一种汞离子快速检测金标试纸条或卡制造技术

本发明专利技术公开了一种用于快速检测汞离子的金标试纸条／卡，包括底层支撑板(1)、样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)。本发明专利技术可以实现对环境、土壤、水、食品、药物、化妆品中铅离子污染残留的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种用于快速检测汞离子的金标试纸条／卡，包括底层支撑板(1)、样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)。本专利技术可以实现对环境、土壤、水、食品、药物、化妆品中铅离子污染残留的快速检测。【专利说明】一种汞离子快速检测金标试纸条或卡
:本专利技术涉及的是一种用于快速检测汞离子的金标试纸条/卡及其制备方法与应用，属于免疫学和卫生检验学
。
技术介绍
:汞，俗称水银，是在常温、常压下唯一以液态存在的金属，化学性质稳定，汞常温下即可蒸发，汞蒸气和汞的化合物多有剧毒。汞使用的历史悠久，在殷商时期古代人民就使用天然的硫化汞。汞的用途广泛，常用于制造科学测量仪器、药物、催化剂、汞蒸气灯、电极、雷汞、化妆品等。汞在自然界中普遍存在，一般动物植物中都含有微量的汞。我国是汞的生产、 使用和排放大国，汞污染防治形势十分严峻。重金属汞是环境污染持久的剧毒物质，毒性高，损害人类健康，汞污染已成为全球性重大环境问题，亦引起了我国政府的高度重视，汞污染防治已被列为“十二五规划”重大专项。汞中毒以慢性为多见，主要在生产或使用活动中，长期吸入汞蒸气和汞化合物粉尘所致。汞蒸气较易透过肺泡壁细胞膜，与血液中的脂质结合，很快分布到全身各组织。汞在红细胞和其它组织中被氧化成Hg2+，并与蛋白质结合而蓄积。金属汞在胃肠道几乎不吸收。慢性汞中毒主要症状表现为精神异常、齿龈炎、震颤、 肾炎等。急性汞中毒主要表现为急性腐蚀性口腔炎和胃肠炎，严重时可发生急性肾功能衰竭、肝脏损害。皮肤接触汞及其化合物可引起接触性皮炎，具有变态反应性质。皮疹为红斑丘疹，可融合成片或形成水疱，愈后遗有色素沉着。由于汞的污染和危害性较大，我国制定了土壤、食品、水体、化妆品等涉汞领域中的国家限量标准，食品中牛乳萊允许量标准(GB2762-94)为< 0.01mg / kg,地下水质量标准(GB7468-2012)中规定，主要适用于集中式生活饮用水水源及农田灌溉水的汞离子限量 ^ 0.0Olmg / L0目前，检测环境汞离子的方法主要有:(I)物理和化学分析方法:包括分光光度法、原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)、原子荧光光谱法 (AFS)等。这些方法各有自己优缺点，分光光度法操作简单，快速，干扰小，但其灵敏度不高； 原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、电感耦合等离子体原子发射光谱法、原子荧光光谱法具有选择性好、测定精度高、简单、快速等优点，但所用仪器比较昂贵，只能在实验室进行检测，且对操作人员技术要求较为严格，限制了其广泛使用。(2)免疫学分析方法:包括酶联免疫吸附法(ELISA)，和胶体金免疫层析法。酶联免疫吸附法(ELISA)以竞争性酶联免疫反应为检测原理，反应显色后用酶标仪测定吸光值 (OD)值进行结果判定。缩短了检测时间，可以对重金属进行定性定量检测。但ELISA方法需要配套的酶标仪和配套试剂，操作过程仍较复杂，而且国内现处在研发阶段，进口国外产品价格昂贵，因而ELISA方法的应用受到了较大限制。胶体金免疫层析法(GICA)，其检测原理是当待检样本与吸附在在膜上的胶体金标记物(抗体或单克隆抗体)结合后，通过层析，与固定在膜上的特异性的抗原或抗体发生特异性结合而被截留，`聚集在检测带上，可通过肉眼观察到胶体金标记物的显色结果。胶体金免疫层析技术因具有携带方便、操作简便、 快速、特异性强、敏感性高、影响因素少、无需特殊仪器和标本不易污染等优点，适合对大批 量样品进行现场初筛，从而被广泛用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等众多领域。目前成熟的汞检测技术多是借助大型分析仪器，无法满足廉价、快速的现场检测 需求。而商品化的快速检测仪器和汞试纸条，其灵敏度低(检测下限为0.1mg / L)，达不到 国标规定的限值(污水0.05mg / L，饮用水0.0Olmg / L)，且选择性差，无法满足灵敏、准 确的检测要求。因此，研究一种新型汞离子快速检测金标试纸产品，可以快速、简便、敏感、 特异、经济、筛检量大的现场检测重金属Hg2+，是当前的迫切需要的，对于减少环境污染、提 高食品质量、保障食品安全具有重要意义。
技术实现思路
:本专利技术的目的提供一种能够快速、简便、敏感、特异的检测汞离子污染残留的快速 检测汞离子金标试纸条和试纸卡。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案:本专利技术一方面涉及一种用于快速检测汞离子的试纸条，所述包括底层支撑板(I)、 样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)、包被膜(6)和外卡(7)，其特 征在于:所述试纸条是以底层支撑板为底部支撑，将样品垫、金标抗体结合垫、纤维素膜、吸 水垫和包被膜依次粘贴于底层支撑板上。所述试纸卡是以试纸条为基础，加上外卡制成。 所述底层支撑板和外卡均由硬质塑料制成，所述样品垫与金标抗体结合垫由玻璃纤维棉制 成；所述金标抗体结合垫包被有胶体金标记的能识别汞离子的单克隆抗体；所述纤维素膜 中部依次平行排列有隐形检测线(T线)和质控线(C线)，检测线包被有汞离子与载体蛋白 形成的偶联物，质控线包被有兔抗鼠IgG(RaMIgG)(或羊抗鼠IgG(GaMIgG))。所述的汞离子金标试纸条/卡，所述的螯合剂包括异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸 (ITCBE)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、还原谷胱甘肽(GSH);所述载体 蛋白包括鸡卵清白蛋白(OVA)、牛血清白蛋白BSA、匙孔血蓝蛋白(KLH)。所述的汞离子金标试纸条/卡，其特征是:所述的检测抗原汞离子-螯合剂-载体 蛋白，以Hg2+-1TCBE-OVA为例，其制备步骤如下:(I)称取 20mg OVA 溶于 ImL ρΗ9.0 的 HEPES 缓冲液(IOmM / L)中形成 20mg / mL的载体蛋白溶液。(2)称取IOmg ITCBE溶于ImL 二甲基亚砜(DMSO)中形成金属螯合剂溶液；(3)将0.5mL金属螯合剂溶液逐滴加到OVA载体蛋白溶液中，混匀后，加入IOOul 三正丁胺(1.5M)，摇床室温反应24h，制成0VA-1TCBE溶液。(4)取11.25mg硝酸萊(Hg (NO3) 2)溶于IOOul蒸懼水中，形成均勻的Hg2+溶液；(5)将Hg2+溶液加入到0VA-1TCBE溶液中，调节pH值至7.4，在室温下，摇床孵育 4h，然后移入透析袋中PBS透析10d，即形成Hg2+-1TCBE-OVA,收集分装，_20°C冻存。所述的重金属汞离子金标试纸条/卡，其特征是:所述的金标试纸由以下步骤制 备:(I)胶体金溶液制备:采用柠檬酸盐还原法制备，取IOOOmL三角烧瓶，加入975mL 双蒸水煮沸，加入15mL朽1檬酸三钠继续加热5min,加入IOmLl %氯金酸,继续加热至溶液呈 现橘红色，冷却至室温后，4°C保存备用。(2)单克隆抗体制备:用汞离子-螯合剂-载体蛋白免疫小鼠，以Hg2+-1TCBE-OVA 为例，说明如下:用Hg2+-1TCBE-OVA免疫6周雌性BALB / C小鼠5只，剂量为50 μ g /0.2mL /只，背部皮下分点注射。选择细胞融合备用小鼠，间接ELI本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于快速检测汞离子的金标试纸条，包括底层支撑板(1)、样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)，其特征在于：所述试纸条是以底层支撑板为底部支撑，将样品垫、金标抗体结合垫、纤维素膜、吸水垫和包被膜依次粘贴于底层支撑板上所述底层支撑板和外卡均由硬质塑料制成，所述样品垫与金标抗体结合垫以玻璃纤维棉为基质，所述金标抗体结合垫包被有胶体金标记的能识别汞离子的单克隆抗体；所述纤维素膜中部依次平行排列有隐形检测线(T线)和质控线(C线)，检测线包被有汞离子与载体蛋白通过螯合剂形成的偶联物，质控线包被有兔抗鼠IgG(RaMIgG)或羊抗鼠IgG(GaMIgG))。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张海棠，范国英，王自良，葛亚明，张慧辉，王淑云，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：