抗CD44单克隆抗体H460-16-2在癌症肿瘤的诊断和治疗中的应用，以及确定表达与单克隆抗体H460-16-2专一性结合的CD44抗原性基序的细胞的存在的结合分析。作为起始对肿瘤的细胞毒性应答的一种手段，单克隆抗体可以选择性与一或多种化疗试剂结合使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及癌症疾病的诊断和治疗，尤其涉及肿瘤细胞的细胞毒性的介导；且最尤其涉及癌症疾病改善抗体(CDMAB)作为一种起始细胞毒性应答的手段的应用，该应用可选择地与一或多种化疗试剂结合。本专利技术进一步地涉及利用本专利技术的CDMAB的结合分析。
技术介绍
人白血细胞的单克隆抗体的制备导致了 CD44抗原的发现；单链透明质酸(HA)结合糖蛋白在广泛的正常组织和所有类型的造血细胞上表达。其起初与淋巴细胞的激活和归巢相关。当前，其推定的生理学作用还包括炎症基因的激活、细胞周期的调节、细胞增殖的诱导、分化和发育的诱导、细胞骨架重组和细胞迁移以及细胞存活/抵抗凋亡的诱导。在人体中，⑶44的单基因拷贝位于染色体11的短臂，llpl3上。该基因包含19个 外显子；前5个是恒定的，随后的9个是可变的，紧接的3个是恒定的，且最后的2个是可变的。差异剪接可以造成超过1000种不同的异构体。然而，目前仅已识别了数十种天然发生的变体。⑶44标准糖蛋白由N-末端胞外(包括20个氨基酸的引导序列和近膜区(85个氨基酸))结构域(270个氨基酸)、跨膜区(21个氨基酸)和胞质尾巴(72个氨基酸)组成。胞外区还包含在N-末端的连接部分(link module) 0该区域有92个氨基酸的长度且显示出与其它HA结合连接蛋白的同源性。在鼠型和人型CD44之间存在很高的同源性。蛋白的变体形式被插入外显子5的羧基末端且在表达时位于胞外部分。⑶44的血清可溶形式也天然地发生且能够通过终止密码子(在可变区内)或蛋白水解活性产生。通过各种刺激包括TNF-a对细胞的激活造成⑶44受体的脱落(shedding)。在肿瘤细胞中也观察到受体的脱落且该脱落可导致CD44在人血清中的浓度增加多达10倍。CD44的高血清浓度暗示着恶性肿瘤(卵巢癌除外)。⑶44的标准形式以大约37kD的分子量存在。翻译后修饰将分子量增加至80-90kD。这些修饰包括氨基末端胞外结构域在天冬氨酸残基上的N-连接糖基化、在胞外结构域的羧基末端的丝氨酸/苏氨酸残基上的0-连接糖基化以及添加的粘多糖。剪接变体的大小可以在80-250kD之间变化。HA，一种哺乳动物胞外基质(ECM)中的聚糖，被认为是⑶44主要的配体。然而，也已经发现CD44与诸如胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等蛋白结合。在HA结合和糖基化之间似乎存在关联。无活性的CD44 (不结合HA)具有最高的糖基化水平，有活性的CD44 (结合HA)糖基化水平最低而可诱导的CD44(除非被细胞因子、单克隆抗体、生长因子等激活，否则不与HA结合或很微弱地与HA结合)的糖基化水平在活性和无活性形式之间。⑶44通过信号转导通路能够介导其的一些功能，这些通路依赖于细胞的相互作用、刺激以及环境。这样的一些通路包括NF K B信号级联(涉及炎症反应)、Ras-MAPK信号转导通路(涉及细胞周期和增殖的激活)、Rho蛋白家族(涉及细胞骨架重组和细胞迁移)以及PI3-K相关信号通路(涉及细胞存活)。上述所有的功能与肿瘤疾病的发生和发展密切相关。⑶44也被暗示通过各种额外的机理在癌症中发生作用。这些机理包括⑶44细胞表面的细胞表面蛋白聚糖将生长因子、化学因子和细胞因子呈现给恶性肿瘤中的受体。同样的，在CD44-HA复合物内化后由溶酶体透明质酸酶进行的HA的胞内降解也潜在地增加了肿瘤入侵和通过ECM的血管新生诱导的可能性。此外，已经显示存活或凋亡信号的传递通过标准或可变⑶44受体发生。⑶44也被暗示涉及细胞分化和迁移。这些机理中的很多但非全部是环境和细胞依赖性的且一些机理产生了不同的发现。因此，在得出任何结论之前需要更多的研究。为了证实⑶44在癌症中潜在的功能作用，进行了⑶44的表达研究以确定受体的差异性表达是否与疾病的进程相关。然而，在大部分的肿瘤类型中观察到不一致的现象，且这可能是由于研究人员之间在试剂、技术、病理学评分和细胞类型上的差异的混和造成的。肾细胞癌和非霍奇金氏(non-Hodgkin’s)淋巴瘤似乎是例外，因为具有⑶44高表达肿瘤的患者一致地比低或无⑶44表达的患者存活时间短。 由于其与癌症的关联，⑶44已经成为发展抗癌治疗的靶点。关于⑶44的标准或变体形式是否是肿瘤进程所必需的仍然存在争论。两种观点都有体内动物数据支持，同样的，这可能是肿瘤类型甚至是细胞类型依赖的。不同的治疗手段已包括可溶CD44蛋白、透明质酸合成酶cDNA、透明质酸酶的注射，反义CD44和CD44专一性抗体的使用。各种手段已经实现了一定程度的成功由此为抗CD44癌症治疗提供了支持。实验中已经产生了变体和标准⑶44的专一性单克隆抗体，但绝大部分这样的抗体除了与它们识别的CD44类型专一性地结合外，没有固有的生物学活性。然而，存在某些抗体具有体外活性或体内活性，但通常没有兼具这两种活性。已经显示一些抗CD44抗体介导细胞事件。例如，针对人红血球Lutheran抗原⑶44标准型的小鼠抗体A3D8显示增强⑶2 (9-1抗体)和⑶3 (0KT3抗体)介导的T细胞激活；另一种抗⑶44抗体具有相似的效应。A3D8也诱导IL-I从单核细胞的释放和IL-2从T淋巴细胞的释放。有趣的是，A3D8与药物如柔红霉素、米托蒽醌和依托泊甙结合使用通过消除第二信使神经酰胺的产生抑制了HL60和NB4AML细胞中的凋亡诱导。没有固有活性且靶向CD44的相似抗原决定簇的J173抗体未抑制药物诱导的凋亡。靶向⑶44的85-110KD和200KD形式的NIH44-1抗体通过一通路增强了 T细胞的增殖，作者推断该通路为CD44的交联或聚集。综上所述，没有证据说明诸如这些抗体适合作为癌症治疗，因为它们抑或不针对癌症(例如激活淋巴细胞)，抑或诱导细胞增殖，或者在与细胞毒性试剂一同使用时抑制癌细胞的药物诱导死亡。一些抗⑶44抗体已被描述，这些抗体证实了体内的抗肿瘤效应。抗体I. 1ASML，一种靶向⑶44的v6变体的小鼠抗大鼠IgGl抗体，已经显示降低了大鼠胰腺癌BSp73ASML的淋巴结和肺转移。治疗后的动物的存活随之提高。该抗体仅当在淋巴结定植(colonization)之前给药有效,且据推断其干扰淋巴结中的细胞增殖。在体外，该抗体对肿瘤细胞没有直接的细胞毒性，且抗体没有提高补体介导细胞毒性或免疫效应细胞功能。没有说明该抗体针对人细胞的应用。Breyer等说明了一种商业可获取的抗⑶44s抗体在破坏原位移植大鼠的神经胶母细胞瘤的进程中的应用。将大鼠神经胶母细胞瘤细胞系C6植入额叶，一周后通过脑内注射用抗体对大鼠进行3次治疗。和缓冲液或同型对照治疗后的大鼠相比，治疗后的大鼠证实了降低的肿瘤生长以及更高的体重。在体外，该抗体能够抑制细胞对由基质成分包被的盖玻片的粘附，但对细胞没有直接的细胞毒性效应。该抗体没有对人细胞进行测试。进行了比较抗⑶44s抗体(M7. 8. I)和⑶44vl0抗体(K926)功效的研究。将表达两种CD44异构体的高度转移的小鼠黑素瘤细胞系B16F10静脉内植入小鼠。两天后，在研究期间每三天给予抗体。两种抗体在肺转移的数量上均造成了大于50%的显著降低；在两种抗体的功效之间没有显著的差别。抗体在体外不影响增殖，且作者Zawadzki等推测肿瘤生长的抑制是因为抗体阻断了⑶44和其配本文档来自技高网...
【技术保护点】
保藏于ATCC的保藏号为PTA？4621的克隆编码的单克隆抗体用于体外鉴定表达CD44的细胞的应用。
【技术特征摘要】
2003.08.22 US 10/647,8181.保藏于ATCC的保藏号为PTA-4621的克隆编码的单克隆抗体用于体外鉴定表达⑶44的细胞的应用。2.根据权利要求I所述的应用，其中所述CD44是人CD44。3.根据权利要求2所述的应用，其中所述人⑶44是具有NCBI登录号gi|2134882的CD44。4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其中所述细胞是肿瘤细胞。5.根据权利要求4所述的应用，其中所述肿瘤细胞是皮肤、乳腺、淋巴结、骨、软组织、鼻腔、喉、肺、舌、腿腺、肝、胆囊、胰腺、食管、胃、结肠、直肠、肾、膀胱、前列腺、睾丸、子宫、子宫颈、甲状腺、胸腺或脑细胞。6.体外鉴定对由保藏于ATCC的保藏号为PTA-4621的克隆编码的单克隆抗体治疗敏感的人肿瘤的方法，其包括使用保藏于ATCC的保藏号为PTA-4621的克隆编码的单克隆抗体鉴定表达⑶44的人肿瘤。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述CD44是具有NCBI登录号gi|2134882的CD44。8.根据权利要求6...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴维·S·F·杨，苏珊·E·哈恩，海伦·P·芬德利，
申请(专利权)人：阿里乌斯研究公司，
类型：发明
国别省市：
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