预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法及苜蓿黄酮的应用技术

本发明专利技术涉及苜蓿黄酮的应用领域，特别是指预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法及苜蓿黄酮的应用。向猪场购买饲喂不同浓度苜蓿黄酮的断奶仔猪结肠；收集进食不同苜蓿黄酮结肠的内容物，并提取结肠内容物中微生物的DNA；以提取结肠微生物的DNA为模板，采用细菌16S通用引物，进行荧光定量PCR检测；分别收集荧光定量PCR产物，用氢氧化钠溶液变性，产生单链DNA片段，构建Miseq文库；根据Miseq文库进行Miseq测序，并对Miseq测序得到的双端序列数据进行分析。苜蓿黄酮对结肠菌群组成具有一定影响作用，且添加0.2%苜蓿黄酮对其影响效果较明显。

Predicting the effect of Alfalfa flavonoids on colonic microflora of weaned piglets and the application of Alfalfa flavonoids

The invention relates to the application field of Alfalfa flavonoids, in particular to a method for predicting the effect of Alfalfa flavonoids on colonic microflora of weaned piglets and the application of Alfalfa flavonoids. Colon of weaned piglets fed with different concentrations of Alfalfa flavonoids was purchased from pig farms; the contents of colon fed with different alfalfa flavonoids were collected, and the DNA of microorganisms in colon contents was extracted; the DNA of colonic microorganisms was extracted as template and detected by fluorescence quantitative PCR using 16S universal primers of bacteria; the products of fluorescence quantitative PCR were collected, denatured with sodium hydroxide solution, and single-stranded DNA was produced. The Miseq library was constructed by fragments. Miseq was sequenced according to Miseq library, and the double-ended sequence data obtained by Miseq sequencing were analyzed. Alfalfa flavonoids have a certain effect on colonic flora composition, and the effect of adding 0.2% alfalfa flavonoids is obvious.

【技术实现步骤摘要】
预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法及苜蓿黄酮的应用
本专利技术涉及苜蓿黄酮的应用领域，特别是指预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法及提高苜蓿黄酮的应用价值。
技术介绍
饲料中的营养物质不能直接吸收到仔猪体内，必须在消化道中消化才能将大分子有机物质分解成简单的，可溶的，被吸收的小分子。由于消化系统发育不完善，断奶应激而导致断奶仔猪肠损伤引起后续腹泻，最终的结果是采食量减少，消化能力不足，不仅仔猪的健康受到损害，而且还显着降低了仔猪的生长性能，这是对现代化全进全出隔离断奶饲养系统的严峻挑战，也是制约养猪业发展的重要因素。由于缺乏消化酶，仔猪的肠道微生物群落尚未建全，免疫能力差，体温调节能力差，这些决定了饲料营养需求的增加，仔猪的营养状况在后期生长中起关键的影响。以下介绍哺乳仔猪消化生理特点：1）仔猪出生24h内，由于蛋白质和血清蛋白质成分相似，仔猪可以直接吸收初乳，直接吸收到血液中而不转化，从而使仔猪血清Y-球蛋白水平迅速提高，免疫力迅速提高。肠上皮细胞的渗透性随着肠道的发育而变化，并在36-72小时后显著降低；2）仔猪出生后，消化器官小、不发达，在哺乳期增长迅速，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法，其特征在于，步骤如下：（1）向猪场购买饲喂不同浓度苜蓿黄酮的断奶仔猪结肠；（2）收集进食不同苜蓿黄酮结肠的内容物，并提取结肠内容物中微生物的DNA；（3）以提取结肠微生物的DNA为模板，采用细菌16S通用引物，进行荧光定量PCR检测；（4）分别收集荧光定量PCR产物，用氢氧化钠溶液变性，产生单链DNA片段，构建Miseq文库；（5）根据Miseq文库进行Miseq测序；（6）对Miseq测序得到的双端序列数据进行分析。

【技术特征摘要】
1.预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法，其特征在于，步骤如下：（1）向猪场购买饲喂不同浓度苜蓿黄酮的断奶仔猪结肠；（2）收集进食不同苜蓿黄酮结肠的内容物，并提取结肠内容物中微生物的DNA；（3）以提取结肠微生物的DNA为模板，采用细菌16S通用引物，进行荧光定量PCR检测；（4）分别收集荧光定量PCR产物，用氢氧化钠溶液变性，产生单链DNA片段，构建Miseq文库；（5）根据Miseq文库进行Miseq测序；（6）对Miseq测序得到的双端序列数据进行分析。2.根据权利要求1所述的预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法，其特征在于：所述苜蓿黄酮日粮是指向基础日粮中添加基础日粮质量0.1-5%wt的苜蓿黄酮。3.根据权利要求1所述的预测苜蓿黄酮对断奶仔猪结肠微生物区系影响的方法，其特征在于：所述16S通用引物为338F序列如5´-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3´所示、806R序列如5´-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3´所示。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：严学兵，曲根，郭玉霞，郭志鹏，管用卓，张靖雪，王苗利，刘建宇，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41