鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121的多重PCR检测引物、试剂盒、方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测引物、试剂盒、方法及应用。本发明专利技术的多重PCR检测方法，包括检测靶标多重PCR引物设计、多重PCR体系扩增和电泳检测，若结果同时出现目标基因0609，0171、prfA条带，则证明菌株是持留型单核细胞增生李斯特菌ST121菌株，若结果出现目标基因0609，0171、prfA三条条带中的任意两条，则为其他ST型单增李斯特菌，若结果只出现prfA基因条带，则为单增李斯特菌。本发明专利技术能有效鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121菌株，具有快速、高效、灵敏度高、经济、准确和操作简单等优点，便于应用于食品、检验检疫等领域。

Detection of Listeria monocytogenes ST121 by multiplex PCR with primers, kits, methods and Applications

The invention discloses a multiplex PCR detection primer, kit, method and application for identifying Listeria monocytogenes ST121 strain of retention type. The multiplex PCR detection method includes detection target multiplex PCR primer design, multiplex PCR system amplification and electrophoresis detection. If the target genes 0609, 0171 and prfA bands appear at the same time, it proves that the strain is Listeria monocytogenes ST121 strain with retention type. If the target genes 0609, 0171 and prfA are found, any two of the three bands will be amplified for other ST types. Listeria monocytogenes were isolated if only prfA gene bands were found in Listeria monocytogenes. The invention can effectively identify Listeria monocytogenes ST121 strain, has the advantages of fast, high efficiency, high sensitivity, economy, accuracy and simple operation, and is convenient for application in the fields of food, inspection and quarantine, etc.

【技术实现步骤摘要】
鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121的多重PCR检测引物、试剂盒、方法及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测引物、试剂盒、方法及应用。
技术介绍
多重PCR是基于普通PCR于同一个反应体系中利用多对特异性引物同时扩增多段特异性检测靶标DNA的PCR技术。在多重PCR报道以来，由于其高效性、灵敏性和经济简便性，已广泛应用于核酸检测的多个领域，如转基因鉴定、病原体检测、遗传疾病诊断、单核苷酸多态性分析等；多重PCR体系，一般包括以下试剂：PCR缓冲液、Taq酶、dNTP、MgCl2、引物、模板和去离子水。单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes，LM)是一种重要的食源性致病菌，可引起严重的李斯特菌病，如脑膜炎、脑膜脑炎、流产、胸肌炎和败血症等，敏感人群主要有老人、新生儿、孕妇和免疫力低下的人群，致死率为20％-30％。近年来，我国部分城市有报道偶发李斯特菌病病例，主要人群为孕妇、新生儿等，对我国居民的身心健康造成一定的威胁。作为重要的食源性致病菌，如何鉴定和防控单增李斯特菌污染食品是降低单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测引物，其特征在于，所述的多重PCR检测引物如下所示：针对ST121菌株0609基因的0609‑F:5'‑TAGGTGACCCTGAAGCAACAACTG‑3'，0609‑R:5'‑TGTGCCTCCACCGCCAGAAC‑3'；针对ST121菌株0171基因的0171‑F:5'‑CAACCTACGACTACAAAGCGGGC‑3'，0171‑R:5'‑TCTTGGTATTCCAGCTTGCGTTAG‑3'；针对单核细胞增生李斯特菌菌株prfA基因的prfA‑F:5'‑ATGAACGCTCAAGCAGAAGAAT‑3'，prf...

【技术特征摘要】
1.一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测引物，其特征在于，所述的多重PCR检测引物如下所示：针对ST121菌株0609基因的0609-F:5'-TAGGTGACCCTGAAGCAACAACTG-3'，0609-R:5'-TGTGCCTCCACCGCCAGAAC-3'；针对ST121菌株0171基因的0171-F:5'-CAACCTACGACTACAAAGCGGGC-3'，0171-R:5'-TCTTGGTATTCCAGCTTGCGTTAG-3'；针对单核细胞增生李斯特菌菌株prfA基因的prfA-F:5'-ATGAACGCTCAAGCAGAAGAAT-3'，prfA-R:5'-ATAATAGCCAACCGATGTTTCTG-3'。2.一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的多重PCR检测试剂盒包含权利要求1所述的多重PCR检测引物。3.根据权利要求2所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的多重PCR检测试剂盒还包括TaqDNA聚合酶、dNTP、MgCl2、PCR缓冲液和无菌去离子水。4.一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测菌株样本的基因组DNA作为模板，利用权利要求1所述的多重PCR检测引物进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈谋通，吴清平，张菊梅，程健恒，庞锐，陈月桃，曾海燕，王涓，丁郁，吴诗，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：广东,44