一组新型酯酶及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一组新型酯酶及其应用，具体地，涉及一组对布洛芬类药物具有立体选择性嗜热酯酶及其应用。本发明专利技术利用布洛芬的酯化衍生物作为筛选底物，利用微流控双色荧光筛选体系对嗜热酯酶进行多轮定向进化改造，获得了一组立体选择性显著提升的酯酶。本发明专利技术还涉及了所述酯酶在制备以布洛芬为代表的芳基丙酸类分子衍生物中的应用。

A group of new esterases and their applications

The invention relates to a set of novel esterases and their applications, in particular to a set of stereoselective thermophilic esterases for ibuprofen drugs and their applications. The invention utilizes the esterification derivative of ibuprofen as the screening substrate, and uses the microfluidic two-color fluorescence screening system to carry out multi-round directional evolution transformation of thermophilic esterase, and obtains a group of esterase enhancements with remarkable stereoselectivity. The invention also relates to the application of the esterase in the preparation of aryl propionic acid derivatives represented by ibuprofen.

【技术实现步骤摘要】
一组新型酯酶及其应用
本专利技术属于生物制药领域，具体地，本专利技术涉及一组新型酯酶及其应用，更具体地，涉及一组具有立体选择性的新型酯酶及其在制备非甾体类抗炎药中的应用。
技术介绍
嗜热酯酶AFEST(Archaeoglobusfulgidusesterase，AFEST)由GiuseppeManco等人于2000年从来自意大利温泉的嗜热古菌Archaeoglobusfulgidus中克隆出来，该酶具有良好的热稳定性，其最适催化温度为85℃，该酶具有较为广泛的底物谱，最适底物为C4-C6的短链脂肪酸酯。作为酯酶，AFEST具有一系列工业应用潜力，在食品、精细化工、洗涤剂、医药、油脂、能源等工业领域有着潜在的应用。布洛芬药物是一类常见的非甾体抗炎药，具有非常广阔的市场，年产量高达两万吨。布洛芬类药物是2-芳基丙酸的衍生物，为手性分子，异丙基布洛芬是最常规的布洛芬药物之一，其中的主要药效来自于其S型对映体，而R型对映体药效作用较低，且具有胃肠道刺激性等副作用。目前市场上的异丙基布洛芬多数以外消旋体的形式出售，但随着人们对药物安全性要求的提高，尤其在儿童用药方面，越来越倾向于去除药物中的R本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酯酶，属于α/β水解酶家族，其催化活性中心包含有“丝氨酸‑组氨酸‑天冬氨酸”催化三联体，其特征在于，所述酯酶与SEQ ID No:2具有不低于80％的氨基酸序列一致性，且包含以下至少一个或多个位置的突变，所述的突变位点包括SEQ ID No:2的第8、11、13、37、41、49、81、87、88、89、90、203、206、209、211、216、257、284或302位中的至少一个或者其相应的位置；所述的突变为在所述的突变位点上发生取代、插入或删除一个或多个氨基酸残基。

【技术特征摘要】
1.一种酯酶，属于α/β水解酶家族，其催化活性中心包含有“丝氨酸-组氨酸-天冬氨酸”催化三联体，其特征在于，所述酯酶与SEQIDNo:2具有不低于80％的氨基酸序列一致性，且包含以下至少一个或多个位置的突变，所述的突变位点包括SEQIDNo:2的第8、11、13、37、41、49、81、87、88、89、90、203、206、209、211、216、257、284或302位中的至少一个或者其相应的位置；所述的突变为在所述的突变位点上发生取代、插入或删除一个或多个氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的酯酶，其特征在于，所述酯酶对以2-芳基丙酸类分子具有立体选择性。3.根据权利要求1所述的酯酶，其特征在于，所述的突变位点为取代突变，至少包含以下一个或多个氨基酸残基的取代：第8位脯氨酸被亮氨酸取代；第11位酪氨酸被天冬酰胺取代；第13位亮氨酸被组氨酸取代；第37位天冬酰胺被丝氨酸取代；第41位谷氨酸被赖氨酸取代；第49位谷氨酰胺被亮氨酸取代；第81位缬氨酸被丙氨酸取代；第87位甘氨酸被丝氨酸取代；第88位甘氨酸被精氨酸取代；第88位甘氨酸被丝氨酸取代；第89位甘氨酸被半胱氨酸取代；第89位甘氨酸被丝氨酸取代；第89位甘氨酸被脯氨酸取代；第89位甘氨酸被酪氨酸取代；第90位苯丙氨酸被色氨酸取代；第90位苯丙氨酸被酪氨酸取代；第90位苯丙...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨广宇，马富强，冯雁，栗林胜男，钟孟庭，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海,31