抗体偶联物及其制备和使用方法技术

公开在免疫球蛋白(Ig)轻链多肽的恒定区中包括含硫酸酯酶基序的标签的抗体。所述硫酸酯酶基序可通过甲酰甘氨酸生成酶(FGE)转化，以产生甲酰甘氨酸(fGly)修饰的Ig轻链多肽。所述抗体的fGly修饰的Ig轻链多肽可与所关注的部分共价和位点特异性结合以提供抗体偶联物。本公开还涵盖产生这类带标签的Ig轻链多肽、fGly修饰的Ig轻链多肽和抗体偶联物的方法，以及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体偶联物及其制备和使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年4月26日提交的美国临时申请第62/327,906号的优先权，所述申请以全文引用的方式并入本文中。
技术介绍
抗体可用于各种诊断和治疗应用。抗体也可用于递送药物。然而，药物与抗体的偶联可难以控制，导致附着的药物分子数目不同的偶联物的非均相混合物。这可使控制向患者给药量困难。
技术实现思路
公开在免疫球蛋白(Ig)轻链多肽的恒定区中包括含硫酸酯酶基序的标签的抗体。标签的硫酸酯酶基序可通过甲酰甘氨酸生成酶(FGE)转化，以产生甲酰甘氨酸(fGly)修饰的Ig轻链多肽。抗体的fGly修饰的Ig轻链多肽可与所关注的部分(即有效负载，例如药物)共价和位点特异性结合，以提供抗体偶联物。本公开还涵盖产生这类带标签的Ig轻链多肽、fGly修饰的Ig轻链多肽和抗体偶联物的方法，以及其使用方法。本文提供包括在恒定区含有下式的氨基酸序列的免疫球蛋白(Ig)轻链多肽的抗体：X1Z1X2Z2X3Z3(SEQIDNO:478)，其中Z1为半胱氨酸、丝氨酸，2-甲酰甘氨酸(fGly)或fGly'，其中fGly'为与有效负载共价结合的fGly残基；Z2为脯氨酸或丙氨酸；Z3为脂肪族氨基酸或碱性氨基酸；X1存在或不存在，并且当存在时，可为任何氨基酸；并且X2和X3各自独立地为任何氨基酸，其中氨基酸序列位于Ig轻链多肽中，使得当Z1为fGly时，fGly与有效负载的偶联(例如，在含有本专利技术抗体的组合物中)提供有效负载与抗体的平均摩尔比为至少0.5。在一些实施例中，Ig轻链多肽的恒定区包括以下氨基酸序列：([*/*]表示选自由“/”分隔开的氨基酸残基(或序列)的替代氨基酸(或氨基酸序列)。)在一些实施例中，Z3为精氨酸。在一些实施例中，存在X1。在一些实施例中，X1为甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、半胱氨酸或苏氨酸。在一些实施例中，X2和X3各自独立地为丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸或半胱氨酸。在任何实施例中，Ig轻链多肽恒定区可含有两个或更多个SEQIDNO：46-82。在任何实施例中，抗体可特异性结合在癌细胞上的肿瘤抗原。在一些实施例中，X1Z1X2Z2X3Z3为LCTPSR(SEQIDNO:158)或LSTPSR(SEQIDNO:159)。在一些实施例中，X1Z1X2Z2X3Z3选自MCTPSR(SEQIDNO:160)、VCTPSR(SEQIDNO:161)、LCSPSR(SEQIDNO:162)、LCAPSR(SEQIDNO:163)、LCVPSR(SEQIDNO:164)、LCGPSR(SEQIDNO:165)、ICTPAR(SEQIDNO:166)、LCTPSK(SEQIDNO:167)、MCTPSK(SEQIDNO:168)、VCTPSK(SEQIDNO:169)、LCSPSK(SEQIDNO:170)、LCAPSK(SEQIDNO:171)、LCVPSK(SEQIDNO:172)、LCGPSK(SEQIDNO:173)、LCTPSA(SEQIDNO:174)、ICTPAA(SEQIDNO:175)、MCTPSA(SEQIDNO:176)、VCTPSA(SEQIDNO:177)、LCSPSA(SEQIDNO:178)、LCAPSA(SEQIDNO:179)、LCVPSA(SEQIDNO:180)、LCGPSA(SEQIDNO:181)、MSTPSR(SEQIDNO:182)、VSTPSR(SEQIDNO:183)、LSSPSR(SEQIDNO:184)、LSAPSR(SEQIDNO:185)、LSVPSR(SEQIDNO:186)、LSGPSR(SEQIDNO:187)、ISTPAR(SEQIDNO:188)、LSTPSK(SEQIDNO:189)、MSTPSK(SEQIDNO:190)、VSTPSK(SEQIDNO:191)、LSSPSK(SEQIDNO:192)、LSAPSK(SEQIDNO:193)、LSVPSK(SEQIDNO:194)、LSGPSK(SEQIDNO:195)、LSTPSA(SEQIDNO:196)、ISTPAA(SEQIDNO:197)、MSTPSA(SEQIDNO:198)、VSTPSA(SEQIDNO:199)、LSSPSA(SEQIDNO:200)、LSAPSA(SEQIDNO:201)、LSVPSA(SEQIDNO:202)和LSGPSA(SEQIDNO:203)。在一些实施例中，组合物包括fGly修饰的抗体，其中抗体的Z1为fGly。在一些实施例中，X1Z1X2Z2X3Z3为L(fGly)TPSR(SEQIDNO:157)。在一些实施例中，X1Z1X2Z2X3Z3选自M(fGly)TPSR(SEQIDNO:204)、V(fGly)TPSR(SEQIDNO:205)、L(fGly)SPSR(SEQIDNO:206)、L(fGly)APSR(SEQIDNO:207)、L(fGly)VPSR(SEQIDNO:208)、L(fGly)GPSR(SEQIDNO:209)、I(fGly)TPAR(SEQIDNO:210)、L(fGly)TPSK(SEQIDNO:211)、M(fGly)TPSK(SEQIDNO:212)、V(fGly)TPSK(SEQIDNO:213)、L(fGly)SPSK(SEQIDNO:214)、L(fGly)APSK(SEQIDNO:215)、L(fGly)VPSK(SEQIDNO:216)、L(fGly)GPSK(SEQIDNO:217)、L(fGly)TPSA(SEQIDNO:218)、I(fGly)TPAA(SEQIDNO:219)、M(fGly)TPSA(SEQIDNO:220)、V(fGly)TPSA(SEQIDNO:221)、L(fGly)SPSA(SEQIDNO:222)、L(fGly)APSA(SEQIDNO:223)、L(fGly)VPSA(SEQIDNO:224)和L(fGly)GPSA(SEQIDNO:225)。在一些实施例中，组合物包括抗体偶联物，其包括与有效负载共价结合的抗体，其中Z1为fGly'。在一些实施例中，X1(fGly')X2Z2X3Z3为L(fGly')TPSR(SEQIDNO:226)。在一些实施例中，X1(fGly')X2Z2X3Z3选自M(fGly')TPSR(SEQIDNO:227)、V(fGly')TPSR(SEQIDNO:228)、L(fGly')SPSR(SEQIDNO:229)、L(fGly')APSR(SEQIDNO:230)、L(fGly')VPSR(SEQIDNO:231)、L(fGly')GPSR(SEQIDNO:232)、I(fGly')TPAR(SEQIDNO:233)、L(fGly')TPSK(SEQIDNO:234)、M(fGly')TPSK(SEQIDNO:235)、V(fGly')TPSK(SEQIDNO:236)、L(fGly')SPSK(SEQIDNO:237)、L(fGly')APSK(SEQIDNO:238)、L(fGly')VPSK(SEQIDNO:239)、L(fGly')GPS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含抗体的组合物，所述抗体包含在恒定区中包含下式的氨基酸序列的免疫球蛋白(Ig)轻链多肽：X1Z1X2Z2X3Z3(SEQ ID NO:478)，其中Z1为半胱氨酸、丝氨酸、2‑甲酰甘氨酸(fGly)或fGly'，其中fGly'为与有效负载共价结合的fGly残基；Z2为脯氨酸或丙氨酸；Z3为脂肪族氨基酸或碱性氨基酸；X1存在或不存在，并且当存在时，可为任何氨基酸；和X2和X3各自独立地为任何氨基酸，其中所述氨基酸序列位于所述Ig轻链多肽中，使得当Z1为fGly时，所述fGly与所述有效负载的偶联使得有效负载与抗体的平均摩尔比为至少0.5。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.26 US 62/327,9061.一种包含抗体的组合物，所述抗体包含在恒定区中包含下式的氨基酸序列的免疫球蛋白(Ig)轻链多肽：X1Z1X2Z2X3Z3(SEQIDNO:478)，其中Z1为半胱氨酸、丝氨酸、2-甲酰甘氨酸(fGly)或fGly'，其中fGly'为与有效负载共价结合的fGly残基；Z2为脯氨酸或丙氨酸；Z3为脂肪族氨基酸或碱性氨基酸；X1存在或不存在，并且当存在时，可为任何氨基酸；和X2和X3各自独立地为任何氨基酸，其中所述氨基酸序列位于所述Ig轻链多肽中，使得当Z1为fGly时，所述fGly与所述有效负载的偶联使得有效负载与抗体的平均摩尔比为至少0.5。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述Ig轻链多肽的所述恒定区包含以下氨基酸序列：3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中Z3为精氨酸。4.根据权利要求1到3中任一项所述的组合物，其中存在X1。5.根据权利要求4所述的组合物，其中X1为甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、半胱氨酸或苏氨酸。6.根据权利要求1到5中任一项所述的组合物，其中X2和X3各自独立地为丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸或半胱氨酸。7.根据权利要求1到6中任一项所述的组合物，其中所述Ig轻链多肽恒定区包含SEQIDNO:46-82中的两个或更多个。8.根据权利要求1到7中任一项所述的组合物，其中所述抗体特异性结合在癌细胞上的肿瘤抗原。9.根据权利要求1到8中任一项所述的组合物，其中X1Z1X2Z2X3Z3为LCTPSR(SEQIDNO:158)或LSTPSR(SEQIDNO:159)。10.根据权利要求1到8中任一项所述的组合物，其中X1Z1X2Z2X3Z3选自MCTPSR(SEQIDNO:160)、VCTPSR(SEQIDNO:161)、LCSPSR(SEQIDNO:162)、LCAPSR(SEQIDNO:163)、LCVPSR(SEQIDNO:164)、LCGPSR(SEQIDNO:165)、ICTPAR(SEQIDNO:166)、LCTPSK(SEQIDNO:167)、MCTPSK(SEQIDNO:168)、VCTPSK(SEQIDNO:169)、LCSPSK(SEQIDNO:170)、LCAPSK(SEQIDNO:171)、LCVPSK(SEQIDNO:172)、LCGPSK(SEQIDNO:173)、LCTPSA(SEQIDNO:174)、ICTPAA(SEQIDNO:175)、MCTPSA(SEQIDNO:176)、VCTPSA(SEQIDNO:177)、LCSPSA(SEQIDNO:178)、LCAPSA(SEQIDNO:179)、LCVPSA(SEQIDNO:180)、LCGPSA(SEQIDNO:181)、MSTPSR(SEQIDNO:182)、VSTPSR(SEQIDNO:183)、LSSPSR(SEQIDNO:184)、LSAPSR(SEQIDNO:185)、LSVPSR(SEQIDNO:186)、LSGPSR(SEQIDNO:187)、ISTPAR(SEQIDNO:188)、LSTPSK(SEQIDNO:189)、MSTPSK(SEQIDNO:190)、VSTPSK(SEQIDNO:191)、LSSPSK(SEQIDNO:192)、LSAPSK(SEQIDNO:193)、LSVPSK(SEQIDNO:194)、LSGPSK(SEQIDNO:195)、LSTPSA(SEQIDNO:196)、ISTPAA(SEQIDNO:197)、MSTPSA(SEQIDNO:198)、VSTPSA(SEQIDNO:199)、LSSPSA(SEQIDNO:200)、LSAPSA(SEQIDNO:201)、LSVPSA(SEQIDNO:202)和LSGPSA(SEQIDNO:203)。11.根据权利要求1到8中任一项所述的组合物，其包含有包含所述抗体的fGly修饰的抗体，其中Z1为fGly。12.根据权利要求11所述的组合物，其中X1Z1X2Z2X3Z3为L(fGly)TPSR(SEQIDNO:157)。13.根据权利要求11所述的组合物，其中X1Z1X2Z2X3Z3选自M(fGly)TPSR(SEQIDNO:204)、V(fGly)TPSR(SEQIDNO:205)、L(fGly)SPSR(SEQIDNO:206)、L(fGly)APSR(SEQIDNO:207)、L(fGly)VPSR(SEQIDNO:208)、L(fGly)GPSR(SEQIDNO:209)、I(fGly)TPAR(SEQIDNO:210)、L(fGly)TPSK(SEQIDNO:211)、M(fGly)TPSK(SEQIDNO:212)、V(fGly)TPSK(SEQIDNO:213)、L(fGly)SPSK(SEQIDNO:214)、L(fGly)APSK(SEQIDNO:215)、L(fGly)VPSK(SEQIDNO:216)、L(fGly)GPSK(SEQIDNO:217)、L(fGly)TPSA(SEQIDNO:218)、I(fGly)TPAA(SEQIDNO:219)、M(fGly)TPSA(SEQIDNO:220)、V(fGly)TPSA(SEQIDNO:221)、L(fGly)SPSA(SEQIDNO:222)、L(fGly)APSA(SEQIDNO:223)、L(fGly)VPSA(SEQIDNO:224)，和L(fGly)GPSA(SEQIDNO:225)。14.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：金允哲，黄超白，D·兰布卡，
申请(专利权)人：RP谢勒技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US