一种Sanfilippo A综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种Sanfilippo A综合症的慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，其中，所述慢病毒载体还包括SGSH基因。本申请改造后的慢病毒载体的基础上特异地连入SGSH基因，能够在保障安全性的同时实现更高效的基因传递，使得SGSH基因在转基因的大脑相关细胞中的表达量明显增加，能够更高效的完成Sanfilippo A综合症基因治疗过程中正常基因的传递。

【技术实现步骤摘要】
一种SanfilippoA综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程
，涉及一种SanfilippoA综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，尤其涉及一种应用改良后的慢病毒载体优化表达SGSH基因用于制备治疗戈谢病的药物。
技术介绍
Sanfilippo综合症，属于三型黏多糖积贮症(Mucopolysaccharidosis(MPS)typeIII)，是五种MPSⅢ型综合症中的一种，其属于常染色体隐性遗传疾病，属于神经退行性溶酶体堆积紊乱疾病。MPSⅢA涉及到了硫酸胺酶的缺失从而导致了硫酸乙酰肝素(heparansulfate，HS)在脑部的堆积，主要堆积在网状内皮组织和单核巨噬细胞系统，最严重的是堆积在神经元中，这些堆积导致了器官的功能性紊乱。病人会有严重的行为上的改变，包括多动症和睡眠失调，晚期会有意识和运动功能的下降，寿命会显著缩短。病人多发于儿童或青少年时期，发病起始年龄大多在2-6岁之间，10岁之后病情开始恶化，15岁左右死亡，无性别、种族和地域特异性。SanfilippoA是单基因突变造成的溶酶体堆积紊乱疾病(lysosomalstora本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Sanfilippo A综合症慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，具体改造方式如下：(a)其5’端的剪接供体位点被删除或改造，改造后的慢病毒载体剪接供体位点不是所述包装载体和所述参照慢病毒之间的同源重组的潜在位点；(b)其仍具有病毒包装信号功能；其中，所述慢病毒载体还包括SGSH基因。

【技术特征摘要】
1.一种SanfilippoA综合症慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，具体改造方式如下：(a)其5’端的剪接供体位点被删除或改造，改造后的慢病毒载体剪接供体位点不是所述包装载体和所述参照慢病毒之间的同源重组的潜在位点；(b)其仍具有病毒包装信号功能；其中，所述慢病毒载体还包括SGSH基因。2.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其特征在于，所述SGSH基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示或与其具有至少80％同源性，优选至少85％同源性，进一步优选至少95％同源性的核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的慢病毒载体，其特征在于，所述SGSH基因之前还包括启动子序列；优选地，所述启动子序列为EF1α和/或CMV，优选为EF1α；优选地，所述EF1α的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示或与其具有至少90％同源性，优选至少95％同源性的核苷酸序列。4.一种重组慢病毒，其特征在于，将包含如权利要求1-3中任一项所述的慢病毒载体pTYF与包装辅助质粒pNHP和pHEF-VSV-G共转染哺乳细胞得到的重组慢病毒；优选地，所述哺乳细胞为HEK293T细胞和/或TE671细胞。5.一种制备如权利要求4所述慢病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将慢病毒载体pTYF5’端的剪接供体位点进行点突变；(2)全...

【专利技术属性】
技术研发人员：王盈颖，
申请(专利权)人：深圳市免疫基因治疗研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44