重组人C1酯酶抑制剂及其用途制造技术

本发明专利技术尤其提供了用于治疗补体介导的疾病的方法和组合物。在一些实施例中，本发明专利技术提供了具有与天然血浆来源的人C1酯酶抑制剂相似或更长的半衰期的重组人C1酯酶抑制剂蛋白及其制备方法。在一些实施例中，本发明专利技术提供了向患有或易患补体介导的疾病的个体施用有效量的重组人C1酯酶抑制剂蛋白的方法，使得所述补体介导的疾病的至少一种症状或特征在强度、严重性或频率方面得到预防和/或减少。

Recombinant human C1 esterase inhibitor and its uses

The invention particularly provides methods and compositions for the treatment of complement mediated diseases. In some embodiments, the present invention provides a recombinant human C1 esterase inhibitor protein with a half-life similar to or longer than that of a human C1 esterase inhibitor derived from natural plasma and a preparation method thereof. In some embodiments, the present invention provides a method of applying an effective amount of recombinant human C1 esterase inhibitor protein to individuals with or susceptible to complement-mediated diseases so that at least one symptom or characteristic of the complement-mediated disease is prevented or/or reduced in intensity, severity, or frequency.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组人C1酯酶抑制剂及其用途相关申请本专利申请要求于2015年11月19日提交的美国临时申请号62/257,711的优先权和权益，所述美国临时申请的内容在此以引用的方式全文并入。以引用的方式并入的序列表于2016年11月16日创建并且大小为15KB，名称为“SHR-1234WOSequenceListing_ST25.txt”的文本文件的内容在此以引用的方式全文并入。
技术介绍
C1抑制剂(C1-INH)也称为C1酯酶抑制剂，是丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白超家族中的最大成员。它是重度糖基化的丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有抑制补体系统的自发活化的主要功能。C1-INH调节补体级联系统，在调节接触(激肽释放酶-激肽)扩增级联中起关键作用，并且参与凝血和纤维蛋白溶解系统的调节。参见Karnaukhova,E.,C1-EsteraseInhibitor:BiologicalActivitiesandTherapeuticApplications.JHematolThrombDis,1:113(2013)。由于C1-INH不能抑制补体系统的活化，所以受试者中C1-INH的功能障碍和/或缺陷已与各种自身免疫性疾病相关联。这种疾病的一个例子是遗传性血管性水肿(HAE)，这是一种罕见的，但潜在危及生命的病症，其特征在于炎症的无法预测和反复发作。HAE发作的症状包括自然发生或由轻度创伤引发的面部、口和/或气道的肿胀。这种肿胀也可在身体的任何部位发生。在某些情况下，HAE与C1抑制剂的低血浆水平相关，而在其它情况下，蛋白质以正常或升高的量循环，但它是功能失调的。除炎症发作之外，它还可导致更严重或危及生命的适应症，如自身免疫性疾病或红斑狼疮。是人血浆来源的C1酯酶抑制剂，已被批准用于HAE急性发作的预防性使用和治疗。(也是血浆来源的人C1-INH，CSLBehring)指示用于急性HAE发作的治疗。人血浆来源的C1酯酶抑制剂的供应与血液和血浆捐献的可用性有关。(conestatalfa,PharmingN.V.)，在经改造的兔中表达的重组C1-INH，指示用于IV施用以治疗急性HAE发作。尽管具有与人血浆来源的C1-INH相同的氨基酸序列，但由于它是在兔中制备的，其糖基化谱与人血浆来源的C1-INH非常不同。结果是Ruconest具有约2.4-2.7小时的极短半衰期。参见RucFDA标签和处方信息。因此，本领域仍然需要改善的重组人C1酯酶抑制剂来治疗各种C1酯酶介导的适应症。
技术实现思路
本专利技术尤其提供了改良的长效重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)，其可用于有效治疗各种补体介导的病症并且可以以成本有效的方式制造。特别地，本专利技术提供了显示出比(conestatalfa)更长的半衰期的重组C1酯酶抑制剂蛋白。在一些实施例中，本专利技术的rhC1-INH蛋白显示出与血浆来源的C1-INH相当或更长的半衰期。例如，本专利技术人已证实根据本专利技术的某些示例性rhC1-INH蛋白具有至少4天的延长的血清半衰期。考虑了rhC1-INH的长血清半衰期导致优异的体内功效，并且允许优选的给药方案和施用途径。在某些实施例中，与经批准的静脉内施用的C1酯酶抑制剂相比，本专利技术的rhC1-INH蛋白可以以相似或降低的频率皮下施用，同时仍达到所需功效(例如预防)。此外，本专利技术的rhC1-INH蛋白可在宿主细胞中重组产生，使得所公开的rhC1-INH蛋白不依赖于血液供应，不造成传染原传播的风险，并且制造成本较低。由于兔宿主相关杂质的存在，Ruconest也携带超敏反应和/或过敏反应的风险。Ruconest不能施用于任何对兔或来自兔的产品具有已知敏感或过敏的任何患者，它也指示不能用于儿童中的施用。由于本专利技术提供了在宿主细胞中重组产生的重组C1酯酶抑制剂蛋白，因此与从人血液、人血液组分(例如血浆)或动物乳中纯化的那些产品相比，它们提供了在生产和最终产品中更高的一致性。此外，与Ruconest不同，本文提供的rhC1-INH蛋白不依赖于畜牧业考虑因素，包括动物年龄和/或成熟度、产奶量、动物疾病等，所有这些都可以影响兔表达的C1-INH的数量和质量(例如，糖基化谱、表达蛋白的异质性、宿主相关杂质等)两者。在一个实施例中，本专利技术提供了包括纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组人C1酯酶抑制剂具有与血浆来源的人C1酯酶抑制剂相似或更长的半衰期。在一个实施例中，本专利技术提供了包括纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组人C1酯酶抑制剂具有至少约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70小时的半衰期。在一个方面，重组rhC1-INH蛋白包含与SEQIDNO:1相同的氨基酸序列。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH包含与SEQIDNO:2相同的氨基酸序列。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH具有包含不超过约50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％的中性聚糖种类的糖基化谱。在另一个方面，重组rhC1-INH蛋白是融合蛋白。在另一个方面，重组rhC1-INH蛋白包含与C1-INH结构域直接或间接融合的Fc结构域。在另一个方面，重组rhC1-INH蛋白包含与C1-INH结构域直接或间接融合的白蛋白结构域。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH具有包含约5％至约25％的中性聚糖种类的糖基化谱。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH含有小于约20％、15％、10％、5％或0％的甘露糖、α-半乳糖、NGNA和/或寡甘露糖型糖基化中的一种或多种。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH具有包含不超过约30％的中性聚糖种类和足够的唾液酸化聚糖种类的糖基化谱，使得纯化的rhC1-INH具有与血浆来源的C1-INH相似或更长的半衰期。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH具有包含下述中的至少一种的糖基化谱：约5％至约30％的中性聚糖种类；约10％至约30％的单唾液酸化聚糖种类；约30％至约50％的二唾液酸化聚糖种类；约15％至约35％的三唾液酸化聚糖种类；或约5％至约15％的四唾液酸化聚糖种类。在另一个方面，纯化的重组rhC1-INH具有包括下述的糖基化谱：不超过30％的中性聚糖种类；约20％至约30％的单唾液酸化聚糖种类；约30％至约40％的二唾液酸化聚糖种类；约10％至约20％的三唾液酸化聚糖种类；和约5％至约10％的四唾液酸化聚糖种类。在一个实施例中，本专利技术提供了包含纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1‑INH)的组合物，所述rhC1‑INH具有与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组人C1酯酶抑制剂具有与血浆来源的人C1酯酶抑制剂相似或更长的半衰期。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.19 US 62/257,7111.一种包含纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组人C1酯酶抑制剂具有与血浆来源的人C1酯酶抑制剂相似或更长的半衰期。2.一种包含纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组人C1酯酶抑制剂具有至少约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70小时的半衰期。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组rhC1-INH蛋白包含与SEQIDNO:1相同的氨基酸序列。4.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH包含与SEQIDNO:2相同的氨基酸序列。5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有包含不超过约50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％的中性聚糖种类的糖基化谱。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述重组rhC1-INH蛋白是融合蛋白。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述重组rhC1-INH蛋白包含与C1-INH结构域直接或间接融合的Fc结构域。8.根据权利要求6的组合物，其中所述重组rhC1-INH蛋白包含与C1-INH结构域直接或间接融合的白蛋白结构域。9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有包含约5％至约25％的中性聚糖种类的糖基化谱。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH含有小于约20％、15％、10％、5％或0％的甘露糖、α-半乳糖、NGNA和/或寡甘露糖型糖基化中的一种或多种。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有包含不超过约30％的中性聚糖种类和足够的唾液酸化聚糖种类的糖基化谱，使得纯化的rhC1-INH具有与血浆来源的C1-INH相似或更长的半衰期。12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有包含下述中的至少一种的糖基化谱：约5％至约30％的中性聚糖种类；约10％至约30％的单唾液酸化聚糖种类；约30％至约50％的二唾液酸化聚糖种类；约15％至约35％的三唾液酸化聚糖种类；或约5％至约15％的四唾液酸化聚糖种类。13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有包含下述的糖基化谱：不超过30％的中性聚糖种类；约20％至约30％的单唾液酸化聚糖种类；约30％至约40％的二唾液酸化聚糖种类；约10％至约20％的三唾液酸化聚糖种类；和约5％至约10％的四唾液酸化聚糖种类。14.一种包含纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组rhC1-INH平均包含至少约10、11、12、13或14个唾液酸化的聚糖残基/分子，并且具有与人血浆来源的C1酯酶抑制剂相似或更长的半衰期。15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH平均包含至少约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个唾液酸化的聚糖残基/分子。16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH平均包含至少约30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个唾液酸化的聚糖残基/分子。17.一种包含纯化的重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的组合物，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述纯化的重组rhC1-INH平均包含至少约30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的荷电聚糖/分子，并且具有与人血浆来源的C1酯酶抑制剂相似或更长的半衰期。18.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH平均包含至少约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40摩尔唾液酸/摩尔蛋白质。19.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有的半衰期在血浆来源的人C1酯酶抑制剂的半衰期的50％-150％范围内。20.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有的半衰期在血浆来源的人C1酯酶抑制剂的半衰期的80％-120％范围内。21.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH具有与血浆来源的人C1酯酶抑制剂的半衰期相似或更长的半衰期。22.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH蛋白作为液体产物在超过约20mg/mL的浓度下是稳定的。23.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH蛋白作为液体产物在超过约60mg/mL的浓度下是稳定的。24.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH蛋白作为液体产物在约70mg/mL或更高的浓度下是稳定的。25.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH蛋白作为液体产物在约100mg/mL或更高的浓度下是稳定的。26.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纯化的重组rhC1-INH蛋白作为液体产物在超过约50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700或750U/mL的浓度下是稳定的。27.一种编码重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的核酸，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。28.一种细胞，其包含根据权利要求27所述的核酸。29.一种包含编码重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的表达载体的宿主细胞，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中一旦在细胞培养条件下培养，所述宿主细胞就能够表达以约0.1g/L至约10.0g/L滴度的重组rhC1-INH。30.一种包含编码重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的表达载体的宿主细胞，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中一旦在细胞培养条件下培养，所述宿主细胞就能够以大于约2、3、4、5、6、7、8、9或10皮克/细胞/天的比生产率表达重组rhC1-INH。31.根据权利要求29或权利要求30所述的宿主细胞，其中一旦在细胞培养条件下培养，所述宿主细胞就能够以大于约10、15、20、25、30、35、40、45或50皮克/细胞/天的比生产率表达重组rhC1-INH。32.根据权利要求29-31中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。33.根据权利要求32所述的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。34.根据权利要求32所述的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。35.根据权利要求34所述的宿主细胞，其中所述人细胞是HT1080或HEK细胞。36.根据权利要求29-35中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞被改造为增加所表达的重组rhC1-INH的唾液酸化。37.一种包含编码重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的表达载体的宿主细胞，所述rhC1-INH具有与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述重组rhC1-INH蛋白被改造为增加唾液酸化。38.根据权利要求36所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞被改造为表达异源酶以增加唾液酸化，被改造为表达突变型异源酶以增加唾液酸化，被改造为过表达内源酶以增加唾液酸化，被改造为表达突变的内源酶以增加唾液酸化，和/或被改造为降低或阻止内源酶的表达，所述内源酶降低、抑制或降解唾液酸化。39.一种生产重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的方法，其包括培养根据权利要求29-38中任一项所述的宿主细胞。40.一种生产重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH)的方法，其包括以下步骤：提供经改造以表达rhC1-INH的宿主细胞，所述rhC1-INH包含与SEQIDNO:1或SEQIDNO:2至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和在适合于细胞产生rhC1-INH的条件下培养所述宿主细胞，其中所述条件包括用包含糖基化调节剂的培养基饲养细胞至少一段时间。41.根据权利要求32或33所述的方法，其中所述细胞在约30℃至34℃下培养至少一段时间。42.一种用于在哺乳动物细胞中大规模生产重组人C1酯酶抑制剂(rhC1-INH...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·W·诺顿，G·科波拉，
申请(专利权)人：夏尔人类遗传性治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US