The present invention provides specific primers and probes for the detection of Proteus mirabilis, the probe sequence is 5 'TCTTGACCGTGGCTTCTG 3'; the specific primers are the following sequence or the complementary chain sequence of the following sequence: the sequence of upstream primers is 5 'CTAAATGTCGATTTGAGGTT 3'; the sequence of downstream primers is 5 'GCATTCTGATCTACGA TTAC 3 '. The primers and probes provided by the invention can accurately quantify the content of Proteus mirabilis by extracting the genomic DNA of Proteus mirabilis and the real-time fluorescence quantitative PCR detection technique, with high sensitivity and high specificity. The primers and probes of the invention can be used for qualitative and quantitative analysis of the content of Proteus mirabilis, and it is of great significance for the determination of the content of the active bacteria of Proteus mirabilis and the secondary infection.
【技术实现步骤摘要】
用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针以及实时荧光定量PCR试剂盒
本专利技术属于分子生物学和体外诊断试剂
,具体涉及用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针以及实时荧光定量PCR试剂盒。
技术介绍
奇异变形杆菌(Proteusmirabilis,PM)是一种较常见的机会致病菌,该菌广泛存在于水、土壤腐败的有机物以及人和动物的肠道中,为条件致病菌,多为继发感染,如慢性中耳炎、创伤感染等,也可引起膀胱炎、婴儿腹泻、食物中毒等。传统的诊断奇异变形杆菌的方法主要是通过细菌生理生化特性进行分类,需要大量的时间进行生理生化反应的结果判定,不利于及时找到病原,诊断病因。PCR技术作为一种分子生物学工具,可以选择性体外扩增DNA或RNA片段,操作简单、特异性强、快速、敏感性高等特点。TaqMan探针法检测特异性强,灵敏度高,方便优化反应条件,能够用于奇异变形杆菌的快速检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于设计一组奇异变形杆菌特异性引物和探针序列,建立一种能广泛应用于奇异变形杆菌检测的快速、灵敏、特异性好的用荧光定量PCR检测的方法。本专利技术采用基因克隆技术,将奇异变形杆菌16SrDNA基因片段插入到载体pMD18-T中,获得含有16SrDNA基因片段的重组质粒,以此作为标准品。根据奇异变形杆菌16SrDNA基因片段编码基因序列设计并合成一组特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立以实时荧光定量聚合酶链反应为平台的检测方法,并对所建立的方法进行评估。本专利技术的第一个目的是提供用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针,所述探针序列为:5’-TCTTGACCGTGGC ...
【技术保护点】
1.用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针,其特征在于:所述探针序列为:5’‑TCTTGACCGTGGCTTCTG‑3’;所述特异性引物为下述序列或为下述序列的互补链序列:上游引物序列为5’‑CTAAATGTCGATTTGAGGTT‑3’;下游引物序列为5’‑GCATTCTGATCTACGATTAC‑3’。
【技术特征摘要】
1.用于检测奇异变形杆菌的特异性引物和探针,其特征在于:所述探针序列为:5’-TCTTGACCGTGGCTTCTG-3’;所述特异性引物为下述序列或为下述序列的互补链序列:上游引物序列为5’-CTAAATGTCGATTTGAGGTT-3’;下游引物序列为5’-GCATTCTGATCTACGATTAC-3’。2.根据权利要求1所述的特异性引物和探针,其特征在于:探针5’端标记的荧光报告基团为FAM,3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ。3.根据权利要求1所述的特异性引物和探针,其特征在于:所述上游引物和所述下游引物为向5’端和/或3’端方向延伸一至数个碱基或删减一至数个碱基得到的序列。4.一种用于检测奇异变形杆菌的实时荧光定量PCR试剂盒,其特征在于:所述实时荧光定量PCR试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的特异性引物和探针。5.根据权利要求4所述的实时荧光定量PCR试剂盒,其特征在于:在20μlPCR反应体系中,所述上游引物的用量为0.2μl,所述下游引物的用量为0.2μl,所述探针的用量为0.2μl。6.根据权利要求4或5所述的实时荧光定量PCR试剂盒,其...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐红,车团结,陈游,高恺,李亚鹏,
申请(专利权)人:苏州百源基因技术有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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