一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒。所述试剂盒含有培养液II和培养液I；培养液II包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液；培养液I包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、BMP4、GSK3抑制剂和不含血清的基础培养液。实验证明，采用本发明专利技术提供的制备方法可以获得血管内皮细胞，且该制备方法使用的培养液不仅能够使人多能干细胞快速高效的分化成血管内皮细胞，而且化学成分确定、无动物源蛋白、无胰岛素添加。采用本发明专利技术提供的制备方法可大规模生产人血管内皮细胞，质量稳定，安全性高。本发明专利技术具有重大的应用价值。

A method for preparing vascular endothelial cells and its special kit

The invention discloses a method for preparing vascular endothelial cells and a special kit thereof. The kit contains culture medium II and culture medium I; culture medium II includes serum albumin, transferrin, vitamin C, sodium selenite, VEGF, bFGF and non serum basic culture fluid; the culture medium I includes serum albumin, transferrin, vitamin C, sodium selenite, BMP4, GSK3 inhibitors and basic culture without serum. Raise liquid. It has been proved that the preparation method provided by the invention can obtain vascular endothelial cells, and the culture solution used in this preparation method can not only make the human pluripotent stem cells differentiate into vascular endothelial cells quickly and efficiently, but also determine the chemical composition, no animal source protein, and no islet addition. By adopting the preparation method provided by the invention, the human vascular endothelial cells can be produced in large scale, and the quality is stable and the safety is high. The invention has great application value.

【技术实现步骤摘要】
一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒
本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒。
技术介绍
人多能干细胞(包括人诱导性多能干细胞和人胚胎干细胞)可分化为各种组织器官的功能性细胞，用于研究人类发育，制作疾病模型，并可通过细胞移植，取代损伤病变的细胞，促进机体创伤修复、治疗疾病。干细胞与再生医学将改变传统对于坏死性和损伤性等疾病的治疗手段，对疾病的机理研究和临床治疗带来革命性变化。血管内皮细胞是人体血管的重要构成细胞，在损伤修复、血管重建、缺血性疾病治疗、组织工程、药物研发、建立疾病模型等等方面有重要应用价值。目前很难获得大量的血管内皮细胞，而且扩增能力有限，价格昂贵，培养液成分不确定，含动物源成分，大大限制了相关临床应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何制备血管内皮细胞。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于制备血管内皮细胞的试剂盒；所述试剂盒可含有培养液II；所述培养液II可包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和不含血清的基础培养液。上述试剂盒中，所述培养液II具体可由血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液组成。上述试剂盒中，每1mL所述培养液II可包括0.1-2.5mg血清白蛋白(如0.1-0.5mg血清白蛋白、0.5-2.5mg血清白蛋白、0.1mg血清白蛋白、0.5mg血清白蛋白或2.5mg血清白蛋白)、1-25μg转铁蛋白(1-5μg转铁蛋白、5-25μg转铁蛋白、1μg转铁蛋白、5μg转铁蛋白或25μg转铁蛋白)、0.04-1mg维生素C(0.04-0.2mg维生素C、0.2-1mg维生素C、0.04mg维生素C、0.2mg维生素C或1mg维生素C)、2-50ng亚硒酸钠(2-10ng亚硒酸钠、10-50ng亚硒酸钠、2ng亚硒酸钠、10ng亚硒酸钠或50ng亚硒酸钠)、10-250ngVEGF(10-50ngVEGF、50-250ngVEGF、10ngVEGF、50ngVEGF或250ngVEGF)和2-50ngbFGF(2-10ngbFGF、10-50ngbFGF、2ngbFGF、10ngbFGF或50ngbFGF)，所述培养液II的基础液可为不含血清的基础培养液，pH值可为7.0～7.6(如7.0～7.3、7.3～7.6、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6)。上述试剂盒中，每1mL所述培养液II可为含0.1-2.5mg血清白蛋白(如0.1-0.5mg血清白蛋白、0.5-2.5mg血清白蛋白、0.1mg血清白蛋白、0.5mg血清白蛋白或2.5mg血清白蛋白)、1-25μg转铁蛋白(1-5μg转铁蛋白、5-25μg转铁蛋白、1μg转铁蛋白、5μg转铁蛋白或25μg转铁蛋白)、0.04-1mg维生素C(0.04-0.2mg维生素C、0.2-1mg维生素C、0.04mg维生素C、0.2mg维生素C或1mg维生素C)、2-50ng亚硒酸钠(2-10ng亚硒酸钠、10-50ng亚硒酸钠、2ng亚硒酸钠、10ng亚硒酸钠或50ng亚硒酸钠)、10-250ngVEGF(10-50ngVEGF、50-250ngVEGF、10ngVEGF、50ngVEGF或250ngVEGF)和2-50ngbFGF(2-10ngbFGF、10-50ngbFGF、2ngbFGF、10ngbFGF或50ngbFGF)的不含血清的基础培养液；pH值可为7.0～7.6(如7.0～7.3、7.3～7.6、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6)。所述培养液II中，所述VEGF具体可为VEGF-A。所述培养液II中，所述血清白蛋白可为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白，也可以是其它非动物来源的重组人血清白蛋白，如植物来源的重组人血清白蛋白。所述培养液II中，所述转铁蛋白可为人转铁蛋白或其它非动物来源的重组人转铁蛋白，如植物来源的重组人转铁蛋白。所述培养液II中，所述不含血清的基础培养液可为RPMI1640培养基或其它常用于细胞培养的基础培养液。上述试剂盒中，所述培养液II具体可为表1所示的培养液II-1、培养液II-2或培养液II-3。表1上述任一试剂盒还可含有培养液I；所述培养液I可包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、骨形态发生蛋白4(BMP4)、糖原合成酶激酶3(GSK3)抑制剂和不含血清的基础培养液。所述培养液I具体可由血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、BMP4、GSK3抑制剂和不含血清的基础培养液组成。上述试剂盒中，每1mL所述培养液I可包括0.1-2.5mg血清白蛋白(如0.1-0.5mg血清白蛋白、0.5-2.5mg血清白蛋白、0.1mg血清白蛋白、0.5mg血清白蛋白或2.5mg血清白蛋白)、1-25μg转铁蛋白(1-5μg转铁蛋白、5-25μg转铁蛋白、1μg转铁蛋白、5μg转铁蛋白或25μg转铁蛋白)、0.04-1mg维生素C(0.04-0.2mg维生素C、0.2-1mg维生素C、0.04mg维生素C、0.2mg维生素C或1mg维生素C)、2-50ng亚硒酸钠(2-10ng亚硒酸钠、10-50ng亚硒酸钠、2ng亚硒酸钠、10ng亚硒酸钠或50ng亚硒酸钠)、2-50ngBMP4(2-10ngBMP4、10-50ngBMP4、2ngBMP4、10ngBMP4或50ngBMP4)和1-10μMGSK3抑制剂(1-5μMGSK3抑制剂、5-10μMGSK3抑制剂、1μMGSK3抑制剂、5μMGSK3抑制剂或10μMGSK3抑制剂)，所述培养液II基础液可为不含血清的基础培养液，pH值为7.0～7.6(如7.0～7.3、7.3～7.6、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6)。上述试剂盒中，每1mL所述培养液I可为含0.1-2.5mg血清白蛋白(如0.1-0.5mg血清白蛋白、0.5-2.5mg血清白蛋白、0.1mg血清白蛋白、0.5mg血清白蛋白或2.5mg血清白蛋白)、1-25μg转铁蛋白(1-5μg转铁蛋白、5-25μg转铁蛋白、1μg转铁蛋白、5μg转铁蛋白或25μg转铁蛋白)、0.04-1mg维生素C(0.04-0.2mg维生素C、0.2-1mg维生素C、0.04mg维生素C、0.2mg维生素C或1mg维生素C)、2-50ng亚硒酸钠(2-10ng亚硒酸钠、10-50ng亚硒酸钠、2ng亚硒酸钠、10ng亚硒酸钠或50ng亚硒酸钠)、2-50ngBMP4(2-10ngBMP4、10-50ngBMP4、2ngBMP4、10ngBMP4或50ngBMP4)和1-10μMGSK3抑制剂(1-5μMGSK3抑制剂、5-10μMGSK3抑制剂、1μMGSK3抑制剂、5μMGSK3抑制剂或10μMGSK3抑制剂)的不含血清的基础培养液；pH值可为7.0～7.6(如7.0～7.3、7.3～7.6、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6)。所述培养液I中，所述血清白蛋白可为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白，也可以是其它非动物来源的重组人血清白蛋白如，植物来源的重组人血清白本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制备血管内皮细胞的试剂盒；所述试剂盒含有培养液II；所述培养液II包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液。

【技术特征摘要】
1.用于制备血管内皮细胞的试剂盒；所述试剂盒含有培养液II；所述培养液II包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：每1mL所述培养液II包括0.1-2.5mg血清白蛋白、1-25μg转铁蛋白、0.04-1mg维生素C、2-50ng亚硒酸钠、10-250ngVEGF和2-50ngbFGF，所述培养液II溶剂为不含血清的基础培养液，pH值为7.0～7.6。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有培养液I；所述培养液I包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、BMP4、GSK3抑制剂和不含血清的基础培养液。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：每1mL所述培养液I包括0.1-2.5mg血清白蛋白、1-25μg转铁蛋白、0.04-1mg维生素C、2-50ng亚硒酸钠、2-50ngBMP4和1-10μMGSK3抑制剂，所述培养液II溶剂为不含血清的基础培养液，pH值为7.0～7.6。5.如权利要求1至4任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有培养液III-1和/或培养液III-2；所述培养液III-1为TeSR-E8完全培养液；所述培养液III-2为含2－10μMR...

【专利技术属性】
技术研发人员：那洁，朱咏林，张凤枝，段福宇，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京,11