一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法技术

本发明专利技术公开一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，包括：步骤一、细胞分选：使用清洁后的流式细胞仪进行细胞分选，利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个目标细胞。步骤三、细胞培养：将分选后的目标细胞在二氧化碳培养箱静置培养，培养条件为36.5℃和5～6％CO2，培养5～15天，待克隆恢复。采用本发明专利技术的方法，单克隆率达到99.5％。

A method of cell cloning by means of flow cytometry

The invention discloses a method of cell monoclonal using a flow cytometer, including step 1, cell sorting, cell sorting using a clean flow cytometry, cell adhesion removal by FSC and SSC signals, and 1 target cells per hole in the orifice. Step three, cell culture: the target cells after the separation were cultured in a carbon dioxide incubator. The culture conditions were 36.5 C and 5 ~ 6%CO2, culture for 5~15 days, and the clone was restored. By adopting the method of the invention, the monoclonal rate reaches 99.5%.

【技术实现步骤摘要】
一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法
本专利技术属于生物制药和生物
，具体涉及一种利用流式细胞仪进行细胞分选、单克隆化以及生产用细胞株的构建的方法。
技术介绍
生物制药是指综合利用微生物学、化学、生物化学、生物技术、药学等科学的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品，以单克隆抗体、重组蛋白、酶、疫苗为主要代表。单克隆抗体等生物药的生产通常借助于哺乳动物表达系统(如CHO，即中国仓鼠卵巢细胞)，即将单克隆抗体的表达载体转染到哺乳动物宿主细胞系中，筛选稳定高效表达目标产物的细胞株。生产用稳定细胞株的构建通常包括以下步骤，(1)转染，即将目的蛋白的表达载体通过脂质体或者电穿孔的方法转染到宿主细胞中，表达载体上除目的基因序列外，还含有抗生素或者代谢相关的筛选基因；(2)筛选，即使用抗生素等对转染后的细胞进行加压筛选，理论上只有表达目的蛋白的细胞才能存活下来；(3)单克隆化，筛选完成后得到的细胞群需进行单克隆化，对于每一个单克隆细胞株，所有的细胞均来源于同一个母细胞。(4)克隆筛选，得到众多单克隆细胞株后，需评估其表达量、产品质量、细胞株稳定性、反应器可放大性等，最终选出一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，其特征在于，包括步骤：1.1分选细胞准备：将目标细胞进行离心，使用传代培养基重悬，使细胞密度为1 E5～1 E6cells/mL，将细胞用滤网过滤后上样；1.2分选参数设置：设置喷嘴尺寸为85或100μm，Window extension设置为1～3ms，上样流速设置为1～11；1.3单细胞分选：利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个细胞。

【技术特征摘要】
1.一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，其特征在于，包括步骤：1.1分选细胞准备：将目标细胞进行离心，使用传代培养基重悬，使细胞密度为1E5～1E6cells/mL，将细胞用滤网过滤后上样；1.2分选参数设置：设置喷嘴尺寸为85或100μm，Windowextension设置为1～3ms，上样流速设置为1～11；1.3单细胞分选：利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个细胞。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2.1目标细胞为传代培养的CHO-K1细胞。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述目标细胞的细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：张朗，张肖肖，董慧芳，蔡洁行，周伟昌，陈智胜，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，无锡药明康德生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31