一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法技术

本发明专利技术公开一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，包括如下步骤：配制细胞培养液；将猪小肠上皮细胞接种至细胞培养液中培养后，进行胰蛋白酶消化处理，获得待诱导细胞；向待诱导细胞中加入含有双氧水的细胞培养液，进行双氧水诱导。本发明专利技术提供的技术方案中，首次以猪小肠上皮细胞为模型细胞建立细胞凋亡模型，并以双氧水为诱导剂，具有诱导时间短、操作简便、成本低廉且效果稳定可靠的优点，该细胞凋亡模型的建立为研究猪肠道损伤机制及其调控措施提供了一条重要途径。

Establishment of a hydrogen peroxide induced apoptosis model of porcine intestinal epithelial cells

The invention discloses a method for establishing the apoptosis model of pig small intestinal epithelial cells induced by hydrogen peroxide, including the following steps: preparing cell culture fluid, inoculating porcine small intestinal epithelial cells into cell culture medium, digesting trypsin, obtaining the treated cells, adding hydrogen peroxide to the cells to be induced. The cell culture medium was induced by hydrogen peroxide. In the technical scheme provided by the invention, the cell apoptosis model of porcine small intestinal epithelial cells was established for the first time, and hydrogen peroxide was used as an inducer, which had the advantages of short induction time, simple operation, low cost and stable and reliable effect. The cell apoptosis model was established to study the mechanism of pig intestinal injury and its control measures. It provides an important way.

【技术实现步骤摘要】
一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法
本专利技术涉及细胞凋亡模型构建
，特别涉及一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法。
技术介绍
我国是世界第一养猪大国，养猪业已成为关乎国计民生的重要产业。养猪业的重大难题之一是仔猪肠道健康问题，已成为制约养猪业快速健康发展的“瓶颈”，我国每年因仔猪肠道健康问题(如消化不良、腹泻、生长阻滞乃至死亡)造成的经济损失达300亿元。有研究表明，肠上皮细胞凋亡紊乱会导致猪肠黏膜结构损伤和功能障碍，而自由基代谢异常与凋亡紊乱密切相关，因此构建猪小肠上皮细胞凋亡模型对研究猪肠道损伤机制及其调控措施具有重要的理论和实践意义。构建细胞凋亡模型需要选取模型细胞和诱导剂，其中，目前常应用于构建细胞凋亡模型的细胞多为肝细胞、癌细胞、乳腺细胞、中性粒细胞以及血细胞等，诱导剂包括融合蛋白、单克隆抗体、脂多糖等，这些诱导剂在实际应用过程中，存在制备过程复杂、诱导操作繁杂、细胞凋亡率不高等缺点。因此，现有技术中并没有适合于构建猪小肠上皮细胞凋亡模型的方法。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提出一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，旨在使猪小肠上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：配制细胞培养液；将猪小肠上皮细胞接种至细胞培养液中培养后，进行胰蛋白酶消化处理，获得待诱导细胞；向待诱导细胞中加入含有双氧水的细胞培养液，进行双氧水诱导。

【技术特征摘要】
1.一种双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：配制细胞培养液；将猪小肠上皮细胞接种至细胞培养液中培养后，进行胰蛋白酶消化处理，获得待诱导细胞；向待诱导细胞中加入含有双氧水的细胞培养液，进行双氧水诱导。2.如权利要求1所述的双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，其特征在于，配制细胞培养液的步骤，具体包括：向DMEM/F-12培养基中加入5％的胎牛血清、1％的青链霉素混合液、1％的谷氨酰胺、0.1％的转铁蛋白以及5μg/L的表皮细胞生长因子，混合后制得细胞培养液。3.如权利要求1所述的双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，其特征在于，将猪小肠上皮细胞接种至细胞培养液中培养后，进行胰蛋白酶消化处理，获得待诱导细胞的步骤，包括：将猪小肠上皮细胞接种至含有细胞培养液的容器中，置于培养箱中培养；在培养箱中培养至细胞汇合率达到70～80％后，进行传代培养；对经过传代培养的猪小肠上皮细胞进行胰蛋白酶消化处理，获得待诱导细胞。4.如权利要求3所述的双氧水诱导猪小肠上皮细胞凋亡模型的建立方法，其特征在于，将猪小肠上皮细胞接种至含有细胞培养液的容器中，置于培养箱中培养的步骤，具体包括：取冻存的猪小肠上皮细胞复苏后，接种至含有细胞培养液的容器中，置于培养箱中培养，其中，所述培养箱的培养条件为：CO2的体积浓度为4.5～5.5％、培养温度为36.5～37.5℃、培养时长为2～3天，每隔20～26h更换一次培养液。5.如权利要求3所述的双氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉兰，康萍，涂治骁，陈少魁，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42