用于诱导对凝固因子蛋白的免疫耐受的组合物制造技术

本文提供了用于诱导凝固因子蛋白耐受的缀合物，其中所述缀合物包含凝固因子蛋白或其抗原性片段或变体和Siglec配体。也提供包含所述缀合物的药物组合物，方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对相关申请的交叉引用本申请要求2013年4月28日提交的美国临时申请号61/816,790的权益，其通过提述完整并入本文。通过提述并入的电子提交材料通过提述完整并入本文的是同时提交的随附的计算机可读的序列表并确定如下：创建于2014年3月25日，命名为“Sequence_listing_ST25.txt”的一个文件(90,252个字节ASCII(Text))。专利技术背景对凝固因子替代治疗的开发已经改变了许多患有凝血病症，例如血友病的个体的生活。血友病是一类遗传性遗传病症，其损害机体控制血液凝结和凝固的能力。患有血友病的患者不能产生足量的因子VIII(FVIII)或因子IX(FIX)蛋白，其对于有效的血液凝结是必要的。在严重的血友病患者中，甚至是轻微的损伤可能导致持续数天或数周的失血，而且完全愈合可能不会发生，从而导致关节和其它器官衰弱性永久损伤的可能，以及早逝。血友病A是最常见的遗传性凝固病症，估算的发病率为每5000名男性中1人。它由FVIII的缺陷或结构缺陷导致，FVIII是内源性血液凝固途径的关键组分。目前对于血友病A的治疗牵涉内源性注射人FVIII。已经重组产生了作为约300kD的单链分子的人FVIII。其由结构域A1-A2-B-A3-C1-C2组成(Thompson,Semin.Hematol.29:11-22(2003))。前体产物在高尔基体中被加工成200kD(重)和80kD(轻)的两条多肽链，所述两条链通过金属离子保持在一起(Kaufman等，J.Biol.Chem.263:6352(1988)；Andersson等，Proc.Natl.Acad.Sci.83:2979(1986))。FVIII的B-域似乎是非必要的，因为已经证明B-域缺失的FVIII(BDD，90kDA1-A2重链加上80kD轻链)作为替换治疗用于血友病A是有效的。所述B-域缺失的FVIII序列含有除了14个氨基酸外所有B-域的缺失。目前通过根据需要内源性施用FVIII治疗血友病A患者，或作为预防性治疗每周几次施用。对于预防性治疗，15-25IU/kg体重的FVIII每周三次给药。患者不断的需要它。因为FVIII在人中较短的半衰期，必须频繁的施用它。尽管对于全长的蛋白其大于300kD的较大大小，FVIII在人体中的半衰期仅为约11个小时(Ewenstein等，Semin.Hematol.41:1-16(2004))。治疗的严重限制是患者的免疫系统可能形成针对外源性施用的FVIII的抗体(Saenko等，Haemophilia8:1-11(2002))。抑制性抗体的主要表位定位于A2域中残基484-508处，A3域残基1811-1818处，以及C2域。不幸的是，抗体的形成在许多患者中阻止了使用FVIII作为替换治疗。因此，为了替换治疗有效，关键的是防止任意不希望的免疫反应。在用于防止或消除不希望的免疫反应的方法中有许多不足之处，特别是针对生物治疗。目前对不希望的免疫反应的治疗通常涉及广泛的免疫抑制，例如化学抑制剂或B细胞耗竭治疗(REFS)，其可能增加感染的易感性。因此，本领域中对于能够在患者中防止针对凝固因子生物治疗的抗体应答并诱导对其耐受的组合物和方法仍然有需要。专利技术简述本专利技术实施方案提供用于预防或减少不希望的抗体免疫应答并诱导对血液凝固因子例如FVIII的免疫耐受的组合物和方法。在一个方面，本专利技术提供用于诱导凝固因子蛋白耐受的缀合物，其中所述缀合物包含凝固因子蛋白或其抗原性片段或变体和Siglec配体。在一些实施方案中，所述Siglec配体是抑制性Siglec的配体。在一些实施方案中，所述Siglec配体结合选自下组的Siglec：Siglec-1(CD169),Siglec-2(CD22),Siglec-3(CD33),Siglec-4(MAG),Siglec-5,Siglec-6,Siglec-7,Siglec-8,Siglec-9,Siglec-G/10,Siglec-11,和Siglec-12。在一些实施方案中，所述Siglec表达于B淋巴细胞表面。在一些实施方案中，所述Siglec配体是B细胞Siglec-2(CD22)配体。在一些实施方案中，所述Siglec配体是Siglec-G/10配体。在一些实施方案中，所述凝固因子蛋白直接地或间接地，以共价或非共价的方式缀合于所述配体，例如Siglec-2配体。在另一个方面，本专利技术提供药物组合物，包含有效量的所述缀合物用于在受试者中诱导耐受。在另一个方面，本专利技术提供用于在受试者中诱导对凝固因子蛋白耐受的方法，包含向所述受试者施用有效量的缀合物，其包含凝固因子蛋白或其抗原性片段或变体和Siglec配体。在一些实施方案中，所述缀合物进一步包含小颗粒，例如脂质体，且所述凝固因子蛋白或其抗原性片段或变体和Siglec配体展示于所述脂质体的表面上。在一些实施方案中，所述凝固因子蛋白或其抗原性片段或变体和所述Siglec配体通过所述小颗粒连接。在一些实施方案中，所述Siglec配体是选自下组的多糖：9-N-联苯羧基-NeuAca2-6Gal～1-4GlcNAc(6'-BPCNeuAc)，NeuAca2-6Gal～1-4GlcNAc和NeuAca2-6Gal～1-4(6-磺基)GlcNAc和其组合。在一些实施方案中，所述凝固因子蛋白选自下组：因子VII，因子VIII，因子IX，因子X，和因子XI和其组合。应当理解前面的对本专利技术的一般说明和下面的详细说明都是示例性的，因此不限制本专利技术的范围。附图简述本专利技术的技术人员将理解下面所述的附图仅用于说明目的。所述附图不意图以任意方式限制本教导范围。图1.使用展示抗原和CD22配体的脂质体诱导耐受。a，免疫原性和耐受原性(tolerogenic)脂质体的示意图。b，本研究中使用的CD22配体的化学结构。c和d，CD22依赖的对T非依赖(NP，c组)和T依赖抗原(HEL；d组)的耐受诱导。在第0天如所示处理WT或CD22KO小鼠(空心箭头)，并使用免疫原型性脂质体在第15天和30天激发(实心箭头)。数据代表均值+/-s.e.m.(n＝8-10)。e，耐受原性的脂质体上的BPANeuGc和NeuGc的滴定。在使用免疫原性的脂质体激发两次后确定滴度(n＝4)。f，在相对于激发的不同时间使小鼠对HEL耐受化，在使用免疫原性脂质体激发后两周确定滴度，并与天然(naive)小鼠的免疫力(n＝4)相对。数据代表均值+/-s.e.m.(n＝4)。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诱导凝固因子蛋白耐受的缀合物，其中所述缀合物包含凝固因子蛋白或其抗原性片段或变体和B细胞Siglec配体，其中所述凝固因子蛋白在预确定的位点突变且在该位点共价附接于生物相容性聚合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.04.28 US 61/816,7901.一种用于诱导凝固因子蛋白耐受的缀合物，其中所述缀合物包含凝固因子蛋白或其
抗原性片段或变体和B细胞Siglec配体，其中所述凝固因子蛋白在预确定的位点突变且在
该位点共价附接于生物相容性聚合物。
2.权利要求1的缀合物，其中所述凝固因子蛋白直接缀合于Siglec配体。
3.权利要求1-2任一项的缀合物，其中所述凝固因子蛋白间接缀合于Siglec配体。
4.权利要求1-3任一项的缀合物，其中所述缀合物包含脂质体。
5.权利要求1-4任一项的缀合物，其中将所述缀合物的凝固因子蛋白与Siglec配体分
开的距离使得能够有效的呈递到B细胞，从而导致所述Siglec和B细胞受体在免疫突触中的
强制连接和并置。
6.权利要求1-5任一项的缀合物，其中所述凝固因子蛋白选自下组：因子VII，因子
VIII，因子IX，因子X，和因子XI以及其组合。
7.权利要求1-6任一项的缀合物，其中所述Siglec配体是选自下组的聚糖：9-N-联苯羧
基-NeuAca2-6Gal～1-4GlcNAc(6'-BPCNeuAc)，NeuAca2-6Gal～1-4GlcNAc和NeuAca2-6Gal
～1-4(6-磺基)GlcNAc以及其组合。
8.一种药物组合物，包含有效量的根据权利要求1-7任一项的缀合物。
9.一种在受试者中诱导对凝固因子蛋白的耐受的方法，包括向所述受试者施用有效量
的根据权利要求1-7任一项的缀合物。
10.权利要求9的方法，其中所述受试者是人类。
11.权利要求10的方法，其中所述受试者正经历置换疗法并且对于针对所述凝固因子
蛋白的抗体是阳性的。
12.一种试剂盒，包含权利要求1-7的缀合物。
13.权利要求1的缀合物，其中所述凝固因子蛋白是FVIII且生物相容性聚合物共价附
接到FVIII的以下一个或多个...

【专利技术属性】
技术研发人员：FJ阿斯沃德，
申请(专利权)人：拜耳医药保健有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US