一种拮抗霉菌的芽孢杆菌及其抗菌应用制造技术

本发明专利技术公开了一种拮抗霉菌的芽孢杆菌及其抗菌应用，属于微生物防治技术领域。本发明专利技术提供的拮抗霉菌的芽孢杆菌，是一株具有广谱抗菌能力的芽孢杆菌。保藏于中国典型培养物保藏中心，序列比对分析发现该菌株与已知的解淀粉芽孢杆菌Holycan 1(Bacillus amyloliquefaciens Holycan 1,KM54172)为100％，认定其属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本发明专利技术提供的拮抗霉菌的芽孢杆菌，到达稳定期的时间非常短，有利于其快速定殖并占领生态位，与其他霉菌进行营养物质、生存空间的竞争。因此，本发明专利技术提供的青霉拮抗解淀粉芽孢杆菌，对常见农作物病害真菌具有很好抑制作用，表现出较广的抑菌谱，生防潜力较大，有良好的应用前景。

An Antagonistic Bacillus strain and its antibacterial application

The invention discloses a Bacillus antagonistic to fungi and its antibacterial application, belonging to the field of microbiological control technology. The Bacillus provided by the invention is a Bacillus with broad spectrum antibacterial ability. The sequence alignment analysis found that the strain and the known Bacillus amyloid Holycan 1 (Bacillus amyloliquefaciens Holycan Holycan 1, KM54172) were 100%, and it was identified as Bacillus amylonis (Bacillus amyloliquefaciens). The Bacillus subtilis provided by the invention has a very short time to reach the stable period, which is beneficial to its rapid colonization and occupation of the niche, and the competition with other moulds for nutrition and living space. Therefore, the Penicillium Lactobacillus provided by the invention has a good inhibitory effect on the common crop disease fungi, showing a wide spectrum of bacteriostasis, great potential for biocontrol and good prospects for application.

【技术实现步骤摘要】
一种拮抗霉菌的芽孢杆菌及其抗菌应用
本专利技术属于微生物防治
，涉及一种芽孢杆菌，具体涉及一种拮抗霉菌的芽孢杆菌及其抗菌应用。
技术介绍
霉菌无处不在，因形成孢子而具有很强的抗逆性。由于霉菌属于化能异养菌，可以借用有机质生活，因此凡是有有机物的地方，如果温湿度合适便可能会引发霉菌污染或感染，给人类社会带来很多麻烦。比如在果蔬和粮食饲料贮存中都很容易被霉菌污染，造成经济损失甚至人畜中毒；在禽畜舍中，由于禽畜粪便滋生霉菌，进而带给禽畜疾患；霉菌也会引起很多植物病害，影响植物的生长，造成减产等等。霉菌污染的预防和治理是我们由来已久且可能长期进行下去的一场持久战。芽孢杆菌是一类在自然界中广泛存在的好氧、产芽孢的革兰氏阳性菌，抗逆性强，易于培养。解淀粉芽孢杆菌为芽孢杆菌属的一个种，在自然界分布广泛且属于益生菌，有些菌株对细菌或真菌具有抑菌活性，有着良好的应用潜力(张娟等，解淀粉芽孢杆菌及其作为益生菌的应用[J].动物营养学报,2014,26(4):863-867)，因此该菌可成为理想的生物防治菌株(生防菌)的筛选对象。近些年很多研究者致力于生防菌株的筛选，但截止目前筛选到的广谱拮抗菌株并不多。果蔬作为生鲜食品，在采摘、运输和贮存过程中会发生程度不同的损伤进而招致霉菌污染而腐烂，即使在冷库中贮藏，也会由于湿度较高的原因而感染霉菌。果蔬病原菌由经伤口入侵果蔬，分解果蔬中的营养成分，使果蔬品质发生劣变，不仅造成巨大经济损失，也带来食品安全隐患，成为影响果蔬种植业的重要因素之一。对人畜无害的生防菌可“以菌防菌”，使得果蔬在采摘后的贮藏期减少腐烂(毕文慧等.微生物在果蔬贮藏保鲜中的应用研究进展[J].食品工业科技,2017,(20):347-351)。已有一些研究关注霉菌拮抗菌的筛选及其应用，如不属于芽孢杆菌属的类芽孢杆菌属菌株对青霉的拮抗和应用(郭娟华.柑橘采后青霉病拮抗菌的筛选及其应用[D].江西农业大学,2013)以及使用蜡样芽孢杆菌发酵液对苹果进行保鲜等(黄运红等.蜡样芽孢杆菌发酵液对苹果保鲜作用的初步研究[J].食品工业科技,2006,(11):516-519)。除过影响果蔬贮藏外，霉菌污染也会引起禽畜舍环境卫生恶化，导致动物饲料的发霉变质，进而影响动物的健康，导致肉品质量下降(张闳媛等.浅谈霉菌及霉菌毒素对家禽生产的危害及防治措施[J].吉林畜牧兽医,2013,(06):55；张仁昆等.常见霉菌毒素对猪的危害及防治措施[J].现代农业科技,2017,(17):24-25)。除过禽畜舍卫生管理和霉菌预防外，目前，如何抑制饲料贮藏中霉菌的污染成为饲料行业的研究热点(房祥军等.饲料中霉菌毒素的危害及其降解方法研究进展[J].中国家禽,2016,38(5):34-37)。同样，霉菌也是造成粮食发热、霉变的主要原因。粮食被霉菌污染后，不仅会引起粮食的变质，更为严重的是对人带来的食品安全(严睿等.稻谷中霉菌及其毒素研究进展[J].湖南农业科学,2009,(11):85-87)。植物真菌病害是引起农业生产和食品安全的重要问题，病原微生物的侵害会造成植物生长缓慢、停滞、影响果实的外观和品质，甚至会引起作物毁灭性死亡，颗粒无收，造成巨大经济损失(谢晶.植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理研究[D]：四川大学,2004)。一直以来，植物病害的防治主要依赖于化学农药及肥料的使用，虽然效果显著，但却造成了土壤和地下水污染，这是更为严重的生态问题。生物农药是绿色环保的农药新类型，具有很大的优越性和应用潜力。有人已经从理论上阐明，将芽孢杆菌应用于植物真菌防治中是可行的(柯杨等.芽孢杆菌在植物真菌病害防治中的应用[J].保鲜与加工,2012,12(5):39-43,47)。芽孢杆菌拮抗霉菌的机理有多种，其中一种理论被称为“竞争机制”。其含义是，在同一环境中，芽孢杆菌与霉菌之间存在生态位点的竞争进而使营养物质(包括氧气)被竞争，如果芽孢杆菌生长速度大于霉菌，则芽孢杆菌会占上风，及早占据入侵的生态位点并对动植物形成保护，使得霉菌不得入侵(崔荣强等.芽孢杆菌的生物防治研究进展[J].山东化工,2015,(12):55-57)。研究发现，芽孢杆菌再生长中可在宿主表面形成一层生物薄膜，阻止其他病原菌的侵入(NiuDDetal.Theplantgrowth-promotingrhizobacteriumBacilluscereusAR156inducessystemicresistanceinArabidopsisthalianabysimultaneouslyactivatingsalicylate-andjasmonate/ethylene-dependentsignalingpathways[J].MolPlantMicrobeInteract,2011,24(5):533-542)。芽孢杆菌已被证明是安全有益的微生物。对水产养殖动物的毒性试验研究表明，解淀粉芽孢杆菌微胶囊无毒无害(安健等.解淀粉芽孢杆菌的安全性分析[J].动物医学进展,2013,(01):16-19)。枯草芽孢杆菌活菌剂可以作为口服液应用于人类肠道疾病的治疗，作为保健品可改善动物肠道功能(惠明等.枯草芽孢杆菌的应用研究进展[J].安徽农业科学,2008,(27):11623-11624+11627)。地衣芽孢杆菌活菌制剂已作为婴幼儿急、慢性肠炎、腹泻的常用药。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种拮抗霉菌的芽孢杆菌及其抗菌应用，该芽孢杆菌安全无毒害，可以广谱拮抗霉菌，能够有效应用于果蔬保鲜。本专利技术是通过以下技术方案来实现：本专利技术公开了一种拮抗霉菌的芽孢杆菌，该芽孢杆菌属于解淀粉芽孢杆菌种(Bacillusamyloliquefaciens)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNo.M2017455。优选地，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。优选地，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌具有很快的生长速度，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌生长1h到达对数期，6h到达稳定期。优选地，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌具有广谱拮抗性。优选地，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌能够抵抗青霉菌、香蕉炭疽菌、橡胶炭疽病菌、灰葡萄孢霉、山茱萸叶枯霉、黑曲霉、根霉菌、山叶枯萎病霉菌和大叶黄杨霉菌的生长。本专利技术还公开了上述的拮抗霉菌的芽孢杆菌在制备果蔬抗菌剂中的应用。本专利技术还公开了上述的拮抗霉菌的芽孢杆菌在制备生物农药中的应用。本专利技术还公开了上述的拮抗霉菌的芽孢杆菌在制备饲料及粮食保存防霉剂中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：1、本专利技术公开的拮抗霉菌的芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌，与现有技术如专利号为2013.10263918.0公开的枯草芽孢杆菌LPL-NM45相比，属于不同的种，应用范围也不一样。2、本专利技术公开的拮抗霉菌的芽孢杆菌生长速度更快，占领生态位和利用营养物质更迅速，因此更具有竞争优势，拮抗效果更好。如与申请号为201710100745.9公开的解淀粉芽孢杆菌相比，该专利菌株进入对数期的时间为4h，到达稳定期为12h，而本专利技术提供的菌株1h到达对数期，6h到达稳定期。同时，为了验证生长占位竞争优势，对本专利技术公开的拮抗霉菌的芽孢杆菌的生长曲线和霉菌生长曲线进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种拮抗霉菌的芽孢杆菌，其特征在于，该芽孢杆菌属于解淀粉芽孢杆菌种(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No.M 2017455。

【技术特征摘要】
1.一种拮抗霉菌的芽孢杆菌，其特征在于，该芽孢杆菌属于解淀粉芽孢杆菌种(Bacillusamyloliquefaciens)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNo.M2017455。2.根据权利要求1所述的拮抗霉菌的芽孢杆菌，其特征在于，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1所述的拮抗霉菌的芽孢杆菌，其特征在于，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌生长速度快，且能够快速进入对数期和稳定期。4.根据权利要求3所述的拮抗霉菌的芽孢杆菌，其特征在于，所述拮抗霉菌的芽孢杆菌生长1h到达对数期，6h到达...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨水云，吴丹，苏婷婷，李少锋，赵浩淼，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61