JNK信号转导通路的细胞穿透肽抑制剂用于治疗轻度认知损害的新用途制造技术

本发明专利技术涉及蛋白激酶抑制剂的用途，并且更具体涉及蛋白激酶c‑JunN末端激酶的抑制剂、JNK抑制剂序列、嵌合肽、或编码它们的核酸以及包含它们的药物组合物用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】JNK信号转导通路的细胞穿透肽抑制剂用于治疗轻度认知损害的新用途本专利技术涉及蛋白激酶抑制剂的用途，更具体地涉及蛋白激酶c-JunN末端激酶(JNK)的抑制剂、JNK抑制剂序列、嵌合肽、或编码它们的核酸以及包含它们的药物组合物用于预防和/或治疗轻度认知损害的用途。c-JunN末端激酶是有丝分裂原活化蛋白(mitogen-activatedprotein，MAP)激酶的应激激活组的成员。这些激酶与控制细胞生长和分化关联，并且更通常地，与细胞对环境刺激的应答关联。JNK信号转导通路响应环境应激和通过几类细胞表面受体的参与而被激活。这些受体可以包括细胞因子受体，蛇根碱受体和受体酪氨酸激酶。在哺乳动物细胞中，JNK已经与生物过程(比如致癌性转化和调控针对环境应激适应性应答)相关联。JNK还已经与调解免疫应答相关联，所述免疫应答包括免疫细胞的成熟和分化，以及引起由免疫系统鉴别为要破坏的细胞中的程序性细胞死亡。该独特的性质使JNK信号传导成为开发药理学干预有希望的靶标。在一些神经病症中，JNK信号传导尤其与缺血性卒中(ischemicstroke)和帕金森病相关联，并且与其它在下文进一步提到的疾病关联。还显示，c-JunN-末端激酶(JNK)参与到由脊神经结扎(SNL)产生的神经病性疼痛(neuropathicpain)中，其中SNL诱导缓慢和持久的JNK(尤其JNK1)活化，然而SNL之后在脊髓小胶质细胞发现p38有丝分裂原活化蛋白激酶活化，其到21天时降到接近基线水平(Zhuang等人，TheJournalofNeuroscience，2006年3月29日，26(13):3551-3560)。因此，JNK信号传导通路的抑制或中断，特别是提供JNK信号传导通路的抑制剂，似乎在与上述神经病症的斗争方面是有希望的途径。然而，到目前为止，仅已知存在少数JNK信号传导通路的抑制剂。现有技术中已知的JNK信号传导通路的抑制剂特别包括例如上游激酶抑制剂(例如，CEP-1347)，JNK的小化学抑制剂(SP600125和AS601245)，其例如通过与蛋白激酶的ATP-结合位点竞争直接影响激酶活性，和JNK及其底物间的相互作用的肽抑制剂(D-JNKI和I-JIP)(参见例如Kuan等人，CurrentDrugTargets–CNS&NeurologicalDisorders，2005年2月，vol.4，no.1，pp.63-67(5))。上游激酶抑制剂CEP-1347(KT7515)是混合谱系激酶家族的半合成抑制剂。在原代胚胎培养物和分化的PC12细胞中在断供营养后，以及在用1-甲基-4-苯基四氢吡啶处理的小鼠中，CEP-1347(KT7515)以抑制c-JunN末端激酶(JNK)活化的剂量促进神经元存活。此外，CEP-1347(KT7515)能够促进培养的鸡胚背根神经节、交感、睫状和运动神经元的长期存活(例如参见Borasio等人，Neuroreport.9(7):1435-1439，1998年5月11日)。发现小的化学JNK抑制剂SP600125减少c-Jun磷酸化水平，保护多巴胺能神经元抵抗凋亡，并且部分恢复C57BL/6N小鼠中MPTP-诱导的PD中的多巴胺水平(Wang等人，NeurosciRes.2004Feb；48(2)；195-202)。这些结果还表明JNK途径是体内MPTP神经毒性作用的主要调控剂，并且抑制JNK活性可能代表治疗PD的新型有效的策略。小的化学抑制剂的另一个实例是前文提及的JNK-抑制剂AS601245。AS601245抑制JNK信号传导通路并且在脑缺血后促进细胞存活。在体内，在短暂全身缺血的沙鼠模型中，AS601245提供显著的针对延缓的海马趾CA1神经元丧失的包含作用。这一作用受JNK抑制的调控，因此受c-Jun表达和磷酸化的调控(例如参见Carboni等人，JPharmacolExpTher.2004年7月；310(1):25-32.Epub2004年2月26日)。JNK信号传导通路的第三类抑制剂代表JNK与其底物之间相互作用的肽抑制剂，如上文所提及的。作为构建所述JNK抑制剂肽的起点，可以利用天然存在的JNK蛋白的序列比对。典型地，这些蛋白包含JNK结合结构域(JNKbindingdomains，JBDs)，并且存在于多种胰岛素结合(insulinbinding，IB)蛋白中，如IB1或IB2中。这样的示例性序列比对的结果例如IB1[SEQIDNO:13]，IB2[SEQIDNO:14]，c-Jun[SEQIDNO:15]和ATF2[SEQIDNO:16]的JNK结合结构域之间的序列比对(例如参见图1A-1C)。所述比对揭示部分保守的8氨基酸序列(例如参见图1A)。IB1与IB2的JBDs的比较进一步揭示在这两个序列间高度保守的7个氨基酸和3个氨基酸的两个区段。基于所述比对构建的序列例如公开在WO01/27268、WO2007/031280或WO2009/144037中。WO2007/031280、WO01/27268和WO2009/144037公开了小细胞渗透性融合肽，其包含来源于HIV-TAT蛋白的碱性运输序列的所谓的TAT细胞渗透序列和IB1的最少20个氨基酸的抑制序列。两种组分彼此共价连接。WO2007/031280、WO01/27268和WO2009/144037中公开的示例性的MAPK–JNK信号传导通路抑制剂(并且目前是唯一的抑制剂)例如是L-JNKI1(由L氨基酸构成的JNK-抑制剂肽)，或特别是蛋白酶耐受性D-JNKI1肽(由非天然D氨基酸构成的JNK-抑制剂肽)。这些JNK-抑制剂(JNKI)肽对JNK(JNK1，JNK2和JNK3)是特异性的。与上文讨论的那些小化合物抑制剂相比，WO2007/031280、WO01/27268和WO2009/144037中的抑制剂序列，例如，JNKI1，相反抑制的是JNK与其底物之间的相互作用。通过其来源于TAT的运输序列，该融合肽被有效地转运到细胞中。由于通过该允许组分获得的新特性，该融合肽被主动转运到细胞中，在细胞中它们保持有效性直到被蛋白水解降解。WO2009/144037具体公开了这样的新型JNK抑制剂肽在治疗阿尔茨海默病中的用途。然而，与阿尔茨海默病(AD)相比，在未患有痴呆的患者中诊断出轻度认知损害(MCI)。不存在痴呆是区分AD和MCI的多个重要标准之一。轻度认知损害是被定义为不满足痴呆诊断标准的大于个体年龄和教育水平所预期的认知和功能的主观和客观下降的综合征。然而，被诊断患有MCI的老年患者构成了发展成为痴呆的高风险人群，特别是阿尔茨海默病(AD)，但是也有其他类型的痴呆，如血管性痴呆(vasculardementia)、额颞痴呆(frontotemporaldementia,FTD)和具有雷维小体的痴呆(dementiawithLewybodies,DLB)。在未患有痴呆的具有基本正常功能活性的人中，MCI通常被称为关于年龄的客观认知疾病。其影响19％的年龄为65岁以上的人。与3％的相同年龄的人群相比，大约46％的患有MCI的人在3年内发展成为痴呆。尽管轻度认知损害的发病率高，特别是在老年患者本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含长度少于150个氨基酸的JNK抑制剂序列，所述JNK抑制剂序列用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.26 EP PCT/EP2015/001294;2015.10.08 EP PCT/1.包含长度少于150个氨基酸的JNK抑制剂序列，所述JNK抑制剂序列用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害。2.根据权利要求1使用的所述JNK抑制剂序列，其中所述JNK抑制剂序列包含5至150个范围内的氨基酸残基，更优选10至100个氨基酸残基，甚至更优选10至75个氨基酸残基，并且最优选10至50个范围内的氨基酸残基。3.根据权利要求1或2使用的所述JNK抑制剂序列，其中所述JNK抑制剂序列结合c-junN末端激酶(JNK)。4.根据权利要求1至3中任一项使用的所述JNK抑制剂序列，其中当所述JNK抑制剂序列存在于表达JNK的细胞中时，所述JNK抑制剂序列抑制至少一种JNK靶向的转录因子的活化。5.根据权利要求4使用的所述JNK抑制剂序列，其中所述JNK靶向的转录因子选自由c-Jun、ATF2、和Elkl组成的组。6.根据权利要求1至5中任一项使用的所述JNK抑制剂序列，其中当所述肽存在于表达JNK的细胞中时，所述JNK抑制剂序列改变JNK作用。7.根据权利要求1至6中任一项使用的所述JNK抑制剂序列，其中所述JNK抑制剂序列由L-氨基酸、D-氨基酸、或二者的组合构成，优选包含至少1个或甚至2个，优选至少3、4或5个，更优选至少6、7、8或9个并且甚至更优选至少10个以上D-和/或L-氨基酸，其中所述D-和/或L-氨基酸可以以区段方式、非区段方式或以交替方式排列在所述JNK抑制剂序列中。8.根据前述权利要求中任一项使用的所述JNK抑制剂序列，其中所述JNK抑制剂序列包含如根据SEQIDNO:102、SEQIDNO:103、SEQIDNO:104或SEQIDNO:105的序列中的任一个限定或编码的人或大鼠IB1序列的片段、变体、或这样的片段的变体。9.根据权利要求1至8中任一项使用的所述JNK抑制剂序列，其中所述JNK抑制剂序列包含根据SEQIDNO:1至4、13至20和33至100的至少一种氨基酸序列、或其片段、衍生物或变体，或者由根据SEQIDNO:1至4、13至20和33至100的至少一种氨基酸序列、或其片段、衍生物或变体组成。10.嵌合肽，所述嵌合肽包含通过共价键连接的至少一个第一结构域和至少一个第二结构域，所述第一结构域包含运输序列，并且所述第二结构域包含如在权利要求1至9中任一项中所定义的JNK抑制剂序列，所述嵌合肽用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害。11.根据权利要求10使用的所述嵌合肽，其中所述嵌合肽由L-氨基酸、D-氨基酸、或二者的组合构成，优选包含至少1个或甚至2个，优选至少3、4或5个，更优选至少6、7、8或9个并且甚至更优选至少10个以上D-和/或L-氨基酸，其中所述D-和/或L-氨基酸可以以区段方式、非区段方式或以交替方式排列在所述嵌合肽中。12.根据权利要求10或11使用的所述嵌合肽，其中所述运输序列包含人免疫缺陷病毒TAT多肽的氨基酸序列。13.根据权利要求10至12中任一项使用的所述嵌合肽，其中所述运输序列由SEQIDNO:5、6、7、8、21或22的氨基酸序列组成，或者包含SEQIDNO:5、6、7、8、21或22的氨基酸序列。14.根据权利要求10至13中任一项使用的所述嵌合肽，其中所述运输序列增强所述肽的细胞摄取。15.根据权利要求10至14中任一项使用的所述嵌合肽，其中所述运输序列指引所述肽的核定位。16.根据权利要求10至15中任一项使用的所述嵌合肽，其中所述嵌合肽由SEQIDNO:9至12和23至32中的任一个的氨基酸序列、或其片段、或变体组成，或者包含SEQIDNO:9至12和23至32中的任一个的氨基酸序列、或其片段、或变体。17.根据权利要求10至16中任一项使用的所述嵌合肽，其中所述嵌合肽由与SEQIDNO:9或11具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％，甚至更优选至少95％，并且最优选至少98％序列同一性的氨基酸序列组成，或者包含与SEQIDNO:9或11具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％，甚至更优选至少95％，并且最优选至少98％序列同一性的氨基酸序列。18.根据权利要求17使用的所述嵌合肽，其中所述嵌合肽由SEQIDNO:9或11的氨基酸序列组成，或者包含SEQIDNO:9或11的氨基酸序列。19.根据权利要求17或18使用的所述嵌合肽，其中所述嵌合肽由下列各项组成或者包含下列各项(i)SEQIDNO:11的氨基酸序列；或(ii)与SEQIDNO:11具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％，甚至更优选至少95％，并且最优选至少98％序列同一性的氨基酸序列。20.根据权利要求10至19中任一项使用的所述嵌合肽，其中(i)通过酰胺修饰来修饰所述嵌合肽的C末端；和/或(ii)通过NH2-保护基团如酰基化来修饰所述嵌合肽的N末端。21.下列各项的组合：(a)如权利要求1至9中任一项中所定义的JNK抑制剂序列或如权利要求10至20中任一项中所定义的嵌合肽；和(b)PKR抑制剂所述组合用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害。22.根据权利要求21使用的所述组合，其中所述组合还包含(c)淀粉样蛋白减少试剂；和/或(d)糖皮质激素。23.下列各项的组合：(a)如权利要求1至9中任一项中所定义的JNK抑制剂序列或如权利要求10至20中任一项中所定义的嵌合肽；和(b)淀粉样蛋白减少试剂所述组合用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害。24.根据权利要求23使用的所述组合，其中所述组合还包含(c)PKR抑制剂；和/或(d)糖皮质激素。25.根据权利要求21至24中任一项使用的所述组合，其中在所述PKR抑制剂、所述淀粉样蛋白减少试剂和/或所述糖皮质激素之前或之后施用所述JNK抑制剂序列或所述嵌合肽。26.根据权利要求21至25中任一项使用的所述组合，其中经由与所述PKR抑制剂、所述淀粉样蛋白减少试剂和/或所述糖皮质激素相同或不同的施用途径施用所述JNK抑制剂序列或所述嵌合肽。27.药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1至9中任一项中所定义的JNK抑制剂序列或权利要求10至20中任一项中所定义的嵌合肽和药用载体，所述药物组合物用于预防和/或治疗轻度认知损害，特别是由于阿尔茨海默病引起的轻度认知损害。28.根据权利要求27使用的所述药物组合物，其中所述药物组合物还包含PKR抑制剂。29.根据权利要求27或28使用的所述药物组合物，其中所述药物组合物还包...

【专利技术属性】
技术研发人员：让马克·孔贝特，卡特林·德洛什，
申请(专利权)人：埃克西金炎症有限公司，
类型：发明
国别省市：塞浦路斯,CY