检测PML基因突变的方法、引物和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种检测PML基因突变的引物和方法，其包括(i)扩增PML基因所有外显子序列的引物；(ii)采用Sanger测序技术和测序引物。本发明专利技术可快速地将体内PML基因所有外显子中的突变检测出来。

Methods, primers and kits for detecting PML gene mutation

The invention discloses a primer and a method for detecting the mutation of PML gene, which includes (I) primers that amplify all exon sequences of PML gene, and (II) uses Sanger sequencing technology and sequence primers. The invention can quickly detect the mutations in all the exons of the PML gene in the body.

【技术实现步骤摘要】
检测PML基因突变的方法、引物和试剂盒
本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及检测与急性早幼粒白血病(APL)发生有关的PML基因突变的引物、方法和试剂盒。
技术介绍
急性早幼粒白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)是一种起病凶险的恶性血液病，单纯依赖化疗，患者复发率高，总体生存较差。APL在中国人群中的发病率较其他人群高，可高达AML的17％～25.3％。APL的分子遗传学标志是PML-RARA融合基因的形成，产生的PML-RARA融合蛋白不仅是APL的分子标志，而且在APL发病中起关键作用。PML-RARA融合蛋白可以与维甲酸受体(RXR)结合，中断正常的维甲酸信号通路，抑制基因转录，阻滞粒细胞分化，最终导致APL的发生。近来研究表明PML-RARA的降解在APL白血病干细胞(leukemia-initiatingcell,LIC)的清除中起着重要的作用。PML基因位于15号染色体，包含10个外显子，属于TRIM家族。PML选择性剪接产生了不同分子量的亚型：PMLI是最长的亚型，由882个氨基酸组成，最短的亚型是PMLVIIb，仅有435个氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测PML基因突变的引物，其特征在于，包括：至少一对扩增引物用于扩增PML基因，所述至少一对扩增引物选自PML‑Exon1‑F/PML‑Exon1‑R、PML‑Exon2‑F/PML‑Exon2‑R、PML‑Exon3‑F/PML‑Exon3‑R、PML‑Exon4‑F/PML‑Exon4‑R、PML‑Exon5/6‑F/PML‑Exon5/6‑R、PML‑Exon7‑F/PML‑Exon7‑R、PML‑Exon8‑F/PML‑Exon8‑R、PML‑Exon9‑F/PML‑Exon9‑R、PML‑Exon10‑F/PML‑Exon10‑R，其碱基序列为：PML‑Exon1‑F：TGTAAAA...

【技术特征摘要】
1.检测PML基因突变的引物，其特征在于，包括：至少一对扩增引物用于扩增PML基因，所述至少一对扩增引物选自PML-Exon1-F/PML-Exon1-R、PML-Exon2-F/PML-Exon2-R、PML-Exon3-F/PML-Exon3-R、PML-Exon4-F/PML-Exon4-R、PML-Exon5/6-F/PML-Exon5/6-R、PML-Exon7-F/PML-Exon7-R、PML-Exon8-F/PML-Exon8-R、PML-Exon9-F/PML-Exon9-R、PML-Exon10-F/PML-Exon10-R，其碱基序列为：PML-Exon1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTTACCGTAAGTCAGPML-Exon1-R：AACAGCTATGACCATGCAAATCCTCCGTTAGACCCPML-Exon2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCTTTTGGGACTTCTCPML-Exon2-R：AACAGCTATGACCATGCCTCTACCTGGTACTTGGAPML-Exon3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAGGATAGTGCCTTTGGCPML-Exon3-R：AACAGCTATGACCATGCTGTGCCCTGGAACCTAAPML-Exon4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCACTCTAATGCCACCTCPML-Exon4-R：AACAGCTATGACCATGGACCTCAAACCCATCTCAGPML-Exon5/6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAAAGGAGGTGATGTGATGGPML-Exon5/6-R：AACAGCTATGACCATGGGTGAGACTGCCTTGGAGPML-Exon7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATAGATAAGGCACAGCAAGAPML-Exon7-R：AACAGCTATGACCATGCCCTGGGACCTGAAATGGPML-Exon8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAATCCCTGACGCTTGGTTPML-Exon8-R：AACAGCTATGACCATGGGCTCTGCCTGCACTTCTPML-Exon9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGCTATCCCACCACAACCPML-Exon9-R：AACAGCTATGACCATGCGGCCTTGGAGTAGATGCPML-Exon10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCCTCTTTGGCACATTAPML-Exon10-R：AACAGCTATGACCATGAGAAGGAGACCCTGGAGC。2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括一对测序引物M13F和M13R，其碱基序列为：M13F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13R：AACAGCTATGACCATG。3.一种检测PML基因突变的方法，包括以下步骤：(1)提取样本中的DNA；(2)利用至少一对扩增引物对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物；(3)利用一对测序引物对(2)中的扩增产物进行测序，获得所述扩增产物的碱基序列；(4)将(3)中的碱基序列与PML基因外显子野生型参考序列进行比较，确定突变位点是否存在，其特征在于，所述至少一对扩增引物选自PML-Exon1-F/PML-Exon1-R、PML-Exon2-F/PML-Exon2-R、PML-Exon3-F/PML-Exon3-R、PML-Exon4-F/PML-Exon4-R、PML-Exon5/6-F/PML-Exon5/6-R、PML-Exon7-F/PML-Exon7-R、PML-Exon8-F/PML-Exon8-R、PML-Exon9-F/PML-Exon9-R、PML-Exon10-F/PML-Exon10-R；所述一对测序引物选自M13F和M13R，其碱基序列为：PML-Exon1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTTACCGTAAGTCAGPML-Exon1-R：AACAGCTATGACCATGCAAATCCTCCGTTAGACCCPML-Exon2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCTTTTGGGACTTCTCPML-Exon2-R：AACAGCTATGACCATGCCTCTACCTGGTACTTGGAPML-Exon3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAGGATAGTGCCTTTGGCPML-Exon3-R：AACAGCTATGACCATGCTGTGCCCTGGAACCTAAPML-Exon4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCACTCTAATGCCACCTCPML-Exon4-R：AACAGCTATGACCATGGACCTCAAACC...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘赵玲，吴鹏飞，王淑一，
申请(专利权)人：南昌艾迪康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36