检测IL7R基因全外显子的方法和引物技术

本发明专利技术公开了一种检测与急性T淋巴细胞白血病(T‑cell acute lymphoblastic leukemia,T‑ALL)有关的白介素7受体(interleukin‑7receptor,IL7R)基因全外显子测序的引物和方法，其包括扩增检测全外显子序列的8对引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明专利技术可快速地将IL7R基因全外显子序列及相关的突变检测出来。利用本发明专利技术完成的检测结果准确，可以为T‑ALL的治疗提供依据，对个体化治疗方案的选择有重要的参考意义。

Methods and primers for detecting all exon of IL7R gene

【技术实现步骤摘要】
检测IL7R基因全外显子的方法和引物
本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及检测与急性T淋巴细胞白血病有关的IL7R基因突变的引物和方法。
技术介绍
小儿急性淋巴细胞性白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL)是最常见的儿童肿瘤性疾病，是指前体B、T或成熟B淋巴细胞发生克隆性异常增殖所致的恶性疾病，占儿童急性白血病的80％以上。小儿T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-cellacutelymphoblasticleukemia,T-ALL)是一种高危型ALL，约占ALL的15％-25％，患儿复发率高，预后极差，严重影响患儿的生命健康。近年来的研究报道发现在儿童急性T淋巴细胞白血病中白介素7受体(interleukin-7receptor,IL7R)基因突变的发生率高达10％以上，可能是影响小儿T-ALL发生发展的关键因素之一。IL7R属于Ⅰ型细胞因子受体家族成员的跨膜受体，生理情况下是淋巴细胞增殖和分化过程中的必需因子。病理情况下，IL7R与人类多种免疫性疾病有关，如IL7R缺失会造成重症联合免疫缺陷病，IL7R功能获得型突变可引起急性T淋巴细胞白血病等。IL7R可通过JAK通路及其下游转录因子STAT5、Ser激酶、PI3K等激活B细胞和T细胞发育中多种下游基因，并可能通过改变染色质结构促进基因重排，影响细胞外基质重塑、B细胞和T细胞的发育及内稳态。此外，IL7R对胸腺T细胞发育、记忆性T细胞、初始性T细胞、辅助性T细胞的存活和增殖不可或缺，动物研究发现在IL7R敲除小鼠中上调抗凋亡基因Bcl-2的表达以抑制细胞凋亡，只对T细胞有效，但不能阻止早期B细胞的凋亡，这表明IL7R对维持T细胞系的存活有重要意义。在小鼠和人类，IL7或IL7R缺失会导致T细胞发育和功能的严重缺陷。目前的研究发现在小儿T-ALL中IL7R存在多个位点的突变，例如S185C、V253G及外显子的插入和缺失等，IL7R的这些突变可通过IL7R/JAK通路影响小儿T-ALL的治疗，有研究报道IL7R/JAK轴的基因突变可削弱类固醇激素治疗的效果；也有报道指出JAK抑制剂或可用于IL7R/JAK突变的T-ALL治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测IL7R基因全外显子的引物，采用PCR技术，可用于快速检测急性T淋巴细胞白血病患者体内IL7R基因突变情况。所述检测IL7R基因全外显子突变情况的引物，包括：扩增IL7R基因全外显子的引物，其碱基序列为：IL7R-Exon1-FTGTAAAACGACGGCCAGTGGCTCTGTCTCTTCATGTCCTTGIL7R-Exon1-RAACAGCTATGACCATGTGACTCAGGTCTGTTAGGGAACTGIL7R-Exon2-FTGTAAAACGACGGCCAGTGTCTGCCACAGAGTCTGCTATTIL7R-Exon2-RAACAGCTATGACCATGGCTGAACCGTGAGAGGAGATTIL7R-Exon3-FTGTAAAACGACGGCCAGTTTCCTGAACATGCCTCCACTCIL7R-Exon3-RAACAGCTATGACCATGTAACCTACAGAATGTCCAGACACAIL7R-Exon4-FTGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAGAATGCGGACTGGATIL7R-Exon4-RAACAGCTATGACCATGTGCCTGATTTGCCTATGAAAGTGIL7R-Exon5-FTGTAAAACGACGGCCAGTCACTCTCCTCCTTGACCACTCIL7R-Exon5-RAACAGCTATGACCATGCTCTCACTTGCTCCCACACTTIL7R-Exon6-FTGTAAAACGACGGCCAGTCAAAGCACCCTGAGACCCTACIL7R-Exon6-RAACAGCTATGACCATGACTGTGGAAATTCGCTGAGGATIL7R-Exon7-FTGTAAAACGACGGCCAGTAAGACTCAGTGTGCCTGTGCIL7R-Exon7-RAACAGCTATGACCATGGGACCTGGAAGAGGAGAGAATAGIL7R-Exon8-FTGTAAAACGACGGCCAGTCAAGCTAGAGATGAAGTGGAAGGTIL7R-Exon8-RAACAGCTATGACCATGTCAGGATGGAGTGAGACAAGGT。其中，引物序列IL7R-Exon1-F和IL7R-Exon1-R是扩增IL7R基因第1外显子序列的引物，引物序列IL7R-Exon2-F和IL7R-Exon2-R是扩增IL7R基因第2外显子序列的引物，以此类推，引物序列IL7R-Exon8-F和IL7R-Exon8-R是扩增IL7R基因第8外显子序列的引物。进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：检测IL7R基因全外显子的测序引物碱基序列为：M13F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13R：AACAGCTATGACCATG。进一步地，引物序列IL7R-Exon1-F和IL7R-Exon1-R是扩增IL7R基因第1外显子序列的引物，引物序列IL7R-Exon2-F和IL7R-Exon2-R是扩增IL7R基因第2外显子序列的引物，以此类推，引物序列IL7R-Exon8-F和IL7R-Exon8-R是扩增IL7R基因第8外显子序列的引物。本专利技术还提供了检测凝血因子XI(F11)基因全外显子突变情况的方法，包括以下步骤：(1)抽提骨髓或外周血中的基因组DNA；(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；(4)将测序结果与标准序列进行比对，确定IL7R基因是否发生突变。其中PCR扩增引物为：IL7R-Exon1-FTGTAAAACGACGGCCAGTGGCTCTGTCTCTTCATGTCCTTGIL7R-Exon1-RAACAGCTATGACCATGTGACTCAGGTCTGTTAGGGAACTGIL7R-Exon2-FTGTAAAACGACGGCCAGTGTCTGCCACAGAGTCTGCTATTIL7R-Exon2-RAACAGCTATGACCATGGCTGAACCGTGAGAGGAGATTIL7R-Exon3-FTGTAAAACGACGGCCAGTTTCCTGAACATGCCTCCACTCIL7R-Exon3-RAACAGCTATGACCATGTAACCTACAGAATGTCCAGACACAIL7R-Exon4-FTGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAGAATGCGGACTGGATIL7R-Exon4-RAACAGCTATGACCATGTGCCTGATTTGCCTATGAAAGTGIL7R-Exon5-FTGTAAAACGACGGCCAGTCACTCTCCTCCTTGACCACTCIL7R-Exon5-RAACAGCTATGACCATGCTCTCACTTGCTCCCACACTTIL7R-Exon6-FTGTAAAACGACGGCCAGTCAAAGCACCCTGAGACCCTACIL7R-Exon6-RAACAGCTATGACCATGACTGTGGAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测IL7R基因全外显子的引物，其特征在于，包括：扩增IL7R基因全外显子序列的引物：IL7R‑Exon1‑F TGTAAAACGACGGCCAGTGGCTCTGTCTCTTCATGTCCTTGIL7R‑Exon1‑R AACAGCTATGACCATGTGACTCAGGTCTGTTAGGGAACTGIL7R‑Exon2‑F TGTAAAACGACGGCCAGTGTCTGCCACAGAGTCTGCTATTIL7R‑Exon2‑R AACAGCTATGACCATGGCTGAACCGTGAGAGGAGATTIL7R‑Exon3‑F TGTAAAACGACGGCCAGTTTCCTGAACATGCCTCCACTCIL7R‑Exon3‑R AACAGCTATGACCATGTAACCTACAGAATGTCCAGACACAIL7R‑Exon4‑F TGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAGAATGCGGACTGGATIL7R‑Exon4‑R AACAGCTATGACCATGTGCCTGATTTGCCTATGAAAGTGIL7R‑Exon5‑F TGTAAAACGACGGCCAGTCACTCTCCTCCTTGACCACTCIL7R‑Exon5‑R AACAGCTATGACCATGCTCTCACTTGCTCCCACACTTIL7R‑Exon6‑F TGTAAAACGACGGCCAGTCAAAGCACCCTGAGACCCTACIL7R‑Exon6‑R AACAGCTATGACCATGACTGTGGAAATTCGCTGAGGATIL7R‑Exon7‑F TGTAAAACGACGGCCAGTAAGACTCAGTGTGCCTGTGCIL7R‑Exon7‑R AACAGCTATGACCATGGGACCTGGAAGAGGAGAGAATAGIL7R‑Exon8‑F TGTAAAACGACGGCCAGTCAAGCTAGAGATGAAGTGGAAGGTIL7R‑Exon8‑R AACAGCTATGACCATGTCAGGATGGAGTGAGACAAGGT。...

【技术特征摘要】
1.检测IL7R基因全外显子的引物，其特征在于，包括：扩增IL7R基因全外显子序列的引物：IL7R-Exon1-FTGTAAAACGACGGCCAGTGGCTCTGTCTCTTCATGTCCTTGIL7R-Exon1-RAACAGCTATGACCATGTGACTCAGGTCTGTTAGGGAACTGIL7R-Exon2-FTGTAAAACGACGGCCAGTGTCTGCCACAGAGTCTGCTATTIL7R-Exon2-RAACAGCTATGACCATGGCTGAACCGTGAGAGGAGATTIL7R-Exon3-FTGTAAAACGACGGCCAGTTTCCTGAACATGCCTCCACTCIL7R-Exon3-RAACAGCTATGACCATGTAACCTACAGAATGTCCAGACACAIL7R-Exon4-FTGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAGAATGCGGACTGGATIL7R-Exon4-RAACAGCTATGACCATGTGCCTGATTTGCCTATGAAAGTGIL7R-Exon5-FTGTAAAACGACGGCCAGTCACTCTCCTCCTTGACCACTCIL7R-Exon5-RAACAGCTATGACCATGCTCTCACTTGCTCCCACACTTIL7R-Exon6-FTGTAAAACGACGGCCAGTCAAAGCACCCTGAGACCCTACIL7R-Exon6-RAACAGCTATGACCATGACTGTGGAAATTCGCTGAGGATIL7R-Exon7-FTGTAAAACGACGGCCAGTAAGACTCAGTGTGCCTGTGCIL7R-Exon7-RAACAGCTATGACCATGGGACCTGGAAGAGGAGAGAATAGIL7R-Exon8-FTGTAAAACGACGGCCAGTCAAGCTAGAGATGAAGTGGAAGGTIL7R-Exon8-RAACAGCTATGACCATGTCAGGATGGAGTGAGACAAGGT。2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括测序引物，所述测序碱基序列为：M13F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13R：AACAGCTATGACCATG。3.如权利要求2所述的引物，其特征在于，引物序列M13-F和M13-R是测序IL7R基因扩增产物全外显子序列的引物。4.检测IL7R基因全外显子序列的方法，包括以下步骤：(1)抽提...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛林梅，吴鹏飞，王淑一，
申请(专利权)人：北京艾迪康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11