ALKBH1基因及其表达产物在制备用于诊断肿瘤的试剂盒、治疗肿瘤的药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了人ALKBH1基因在制备诊断和/或治疗肿瘤产品中的应用。本发明专利技术通过检测胃癌、肝癌病人肿瘤组织中ALKBH1基因表达情况，发现其表达水平明显升高。通过构建ALKBH1基因过表达/沉默的肝癌和卵巢癌细胞株分别与对照组相比，其DNA6mA修饰水平、增殖能力、细胞迁移率及细胞侵袭能力等均产生显著变化。ALKBH1基因及其表达产物作为诊断肿瘤的标志物，使肿瘤诊断更加准确、快速，作为制备治疗肿瘤药物的靶基因，为治疗肿瘤提供了新的治疗靶点和治疗途径。

The use of the ALKBH1 gene and its expressed products in the preparation of a kit for the diagnosis of tumors and the use of drugs for the treatment of tumors

The present invention provides the application of human ALKBH1 gene in the preparation of diagnosis and / or treatment of tumor products. By detecting the expression of ALKBH1 gene in cancer tissues of patients with gastric cancer and liver cancer, the present invention has found that its expression level is obviously increased. By constructing ALKBH1 gene overexpression / silencing liver cancer and ovarian cancer cell line, compared with the control group, the DNA6mA level, proliferation ability, cell migration rate and invasion ability of the cells were significantly changed. ALKBH1 gene and its expression products are diagnostic markers for tumors, making tumor diagnosis more accurate and fast. As a target gene for the treatment of tumor drugs, it provides a new therapeutic target and therapeutic approach for cancer treatment.

【技术实现步骤摘要】
ALKBH1基因及其表达产物在制备用于诊断肿瘤的试剂盒、治疗肿瘤的药物中的用途
本专利技术属于生物技术和医学领域，具体涉及ALKBH1基因及其表达产物在制备用于诊断肿瘤的试剂盒、治疗肿瘤的药物中的应用。
技术介绍
肿瘤是威胁人类健康的主要疾病，其发生发展是一个多步骤的过程。虽然临床治疗方案已在不断改进，但患者的五年生存率仍很低，早诊断、早治疗是提高肿瘤患者生存率的关键。肿瘤的发生发展涉及到癌基因的活化和抑癌基因的失活，通过检测发生改变的癌基因和抑癌基因，可以在分子水平上早期检测到肿瘤的发生，从而为及时的诊断治疗创造机会。随着对肿瘤研究的深入，人们发现表观遗传修饰尤其是DNA甲基化在肿瘤发生发展中扮演着一个重要的角色。DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶的催化下，将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化可以发生在腺嘌呤的N-6位、胞嘧啶的N-4位、鸟嘌呤的N-7位或胞嘧啶的C-5位等。一般认为真核生物中最主要的甲基化修饰是生成5-甲基胞嘧啶(5mC)，而N6-甲基腺嘌呤(6mA)是原核生物中最普遍的DNA修饰。随着深度测序的发展，6mA陆续被发现存在于少数的真核生物中，包括衣藻、线虫、黑腹果蝇、真菌、小鼠、斑马鱼及猪。而由于丰度低或检测技术有限的原因，DNA6mA修饰此前被认为不存在于人类基因组中。但专利技术者证明，6mA广泛分布于人类基因组DNA中。在外显子区域中，6mA密度显著增加，与基因转录激活相关。GO分析表明，6mA可能在G蛋白偶联受体的调控中发挥重要作用，而G蛋白偶联受体与包括癌症等多种疾病有关，因此6mA可能参与调控癌症等疾病。已有报道称ALKBH1是小鼠的DNA6mA脱甲基酶，而且人源ALKBH1与鼠源ALKBH1具有高度同源性。氨基酸序列Oncomine数据库中ALKBH1的mRNA在肺癌、前列腺癌、睾丸癌、肾细胞癌等癌症中高表达。专利技术者通过体外甲基化实验证明ALKBH1可抑制DNA6mA修饰水平，在人肿瘤中可作为DNA6mA的脱甲基酶。但ALKBH1在肿瘤的生物学功能和可能的作用机制尚无文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供了一种用于诊断肿瘤的试剂盒，一种用于治疗肿瘤的药物组合物，以及ALKBH1基因及其表达产物在制备用于诊断肿瘤的试剂盒、治疗肿瘤的药物中的用途。为实现上述目的，所采取的技术方案：一种用于诊断肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包括检测ALKBH1基因表达水平的试剂。优选地，所述试剂包括用于扩增ALKBH1基因的引物。优选地，所述引物包括序列如SEQIDNO:1所示的上游引物和序列如SEQIDNO:2所示的下游引物。本专利技术提供了ALKBH1基因及其表达产物在制备用于诊断肿瘤的试剂盒中的用途。本专利技术提供了检测ALKBH1基因表达水平的试剂在制备用于诊断肿瘤的试剂盒中的用途。本专利技术提供了一种用于治疗肿瘤的药物组合物，所述药物组合物包括降低ALKBH1基因表达的试剂、ALKBH1蛋白中和剂中的至少一种。优选地，所述降低ALKBH1基因表达的试剂包括沉默ALKBH1基因表达的siRNA，所述siRNA包括由SEQINNO:5和SEQINNO:6组成的siRNA、由SEQINNO:7和SEQINNO:8组成的siRNA中的至少一种。本专利技术提供了ALKBH1基因及其表达产物在制备或筛选用于治疗肿瘤的药物中的用途。本专利技术提供了降低ALKBH1基因表达的试剂、ALKBH1蛋白中和剂中的至少一种在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。优选地，所述肿瘤包括胃癌、肝癌或卵巢癌。本专利技术的有益效果是：1)本专利技术通过设计ALKBH1引物进行RT-PCR证实胃癌、肝癌病人肿瘤组织中ALKBH1基因表达情况，发现其表达水平明显升高，因此，ALKBH1可作为多种肿瘤的诊断标志。2)本专利技术对ALKBH1基因进行了体外细胞功能学的研究。通过构建ALKBH1基因过表达的肝癌和卵巢癌细胞株分别与其对照组相比，其DNA6mA修饰水平显著下调，其增殖能力、细胞迁移率及细胞侵袭能力等均显著提高。通过将ALKBH1基因表达下调的肝癌和卵巢癌细胞株与对照组相比，其DNA6mA修饰水平显著上升，其增殖能力、细胞迁移率及细胞侵袭能力等均显著减弱。ALKBH1基因及其表达产物可以应用在制备治疗多种肿瘤的药物中。ALKBH1基因及其表达产物作为诊断肿瘤的标志物，使肿瘤诊断更加准确、快速，作为制备治疗肿瘤药物的靶基因为治疗肿瘤提供了新的治疗靶点和治疗途径。附图说明图1为本专利技术实施例1中RT-PCR检测胃癌及肝癌组织中ALKBH1表达结果对比图；图2为本专利技术实施例2中过表达ALKBH1的肝癌细胞株MHCC-LM3、SK-hep1及卵巢癌细胞株OVCAR-3表达ALKBH1的结果对比图。图3为本专利技术实施例3中过表达ALKBH1的肝癌细胞株MHCC-LM3、SK-hep1及卵巢癌细胞株OVCAR-3的DNA6mA水平下降。图4为本专利技术实施例4中过表达ALKBH1的肝癌细胞株MHCC-LM3、SK-hep1及卵巢癌细胞株OVCAR-3生长速度上升。图5为本专利技术实施例5、6中过表达ALKBH1的肝癌细胞株MHCC-LM3、SK-hep1及卵巢癌细胞株OVCAR-3迁移、侵袭率上升。在肝癌和卵巢癌细胞中上调ALKBH1基因后的细胞迁移、侵袭实验结果示意图。图6为本专利技术实施例2中沉默ALKBH1的肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721及卵巢癌细胞株OVCAR-3表达ALKBH1的结果对比图。图7为本专利技术实施例3中沉默ALKBH1的肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721及卵巢癌细胞株OVCAR-3的DNA6mA水平上升。图8为本专利技术实施例4中沉默ALKBH1的肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721及卵巢癌细胞株OVCAR-3生长速度下降。图9为本专利技术实施例5、6中沉默ALKBH1的肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721及卵巢癌细胞株OVCAR-3迁移、侵袭率下降。在肝癌和卵巢癌细胞中下调ALKBH1基因后的细胞迁移、侵袭实验结果示意图。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。本专利技术首先通过RT-PCR检测人胃癌及肝癌组织中ALKBH1表达情况。结果表明，在人胃癌及肝癌组织中ALKBH1表达明显上调。结果如图1所示。进一步，我们对ALKBH1进行了体外细胞功能学的研究，通过将ALKBH1基因序列在肝癌和卵巢癌细胞株过表达/沉默，以建立该基因表达上调/下调的细胞株。结果表明，过表达ALKBH1基因的肝癌和卵巢癌细胞株分别与对照组相比，其DNA6mA水平显著下降，增殖能力、细胞迁移率及细胞侵袭能力等均显著升高。沉默ALKBH1基因的肝癌和卵巢癌细胞株分别与对照组相比，其DNA6mA水平显著升高，增殖能力、细胞迁移率及细胞侵袭能力等均显著下降。因此，ALKBH1基因及其表达产物可以应用在制备治疗肿瘤的药物中。结果如图2～9所示。本专利技术所涉及的技术均为分子克隆常规技术手段，其中涉及的酶、引物、试剂以及反应条件在未作说明的情况下均可根据本领域技术人员的经验进行合理选择，其中涉及试剂耗材属于市售的普通产品，其中涉及的检测手段以及仪器也均为本领域技术人员所熟知并熟练掌握。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断肿瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测ALKBH1基因表达水平的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断肿瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测ALKBH1基因表达水平的试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于扩增ALKBH1基因的引物。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物包括序列如SEQIDNO:1所示的上游引物和序列如SEQIDNO:2所示的下游引物。4.ALKBH1基因及其表达产物在制备用于诊断肿瘤的试剂盒中的用途。5.检测ALKBH1基因表达水平的试剂在制备用于诊断肿瘤的试剂盒中的用途。6.一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括降低ALKBH1基因表达的试剂、ALKB...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏光荣，肖传乐，朱嵩，焦军，严兆坤，何铭辉，韩悦，罗雪峰，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第三医院广州重症孕产妇救治中心广州柔济医院，中山大学中山眼科中心，广州库基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44