基因标志物在乳腺癌诊断和治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了基因标志物在乳腺癌诊断和治疗中的应用，所述基因为LINC02544，本发明专利技术首次发现了LINC02544在乳腺癌患者中的表达显著上调，并通过QPCR进一步做了验证，提示LINC02544可作为生物标志物用于乳腺癌的诊断，本发明专利技术还公开了通过降低LINC02544的表达，可以有效的抑制乳腺癌细胞的增殖，降低乳腺癌细胞的迁移和侵袭率，提示LINC02544可作为药物靶点用于治疗乳腺癌及其转移。

The application of gene markers in the diagnosis and treatment of breast cancer

The invention discloses application of genetic markers in the diagnosis and treatment of breast cancer, the gene for LINC02544, the invention first found significantly up-regulated expression of LINC02544 in breast cancer patients, and were further verified by QPCR, suggesting that LINC02544 can be used as a biomarker for the diagnosis of breast cancer, the invention also discloses by reducing the expression of LINC02544, can effectively inhibit the proliferation of breast cancer cells, reduce the migration and invasion of breast cancer cells, suggesting that LINC02544 can be used as a drug target for the treatment of breast cancer and metastasis.

【技术实现步骤摘要】
基因标志物在乳腺癌诊断和治疗中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及基因标志物在乳腺自诊断和治疗中的应用，具体地涉及LINC02544在乳腺癌诊断和治疗中的应用。
技术介绍
乳腺癌是世界范围女性最常见的恶性肿瘤，占女性全部恶性肿瘤的22％左右，是危害女性健康的最主要的疾病之一。乳腺癌过去在中国等发展中国家发病率较低，然而随着社会、经济、环境等诸多因素的变化，乳腺癌的发病率在全球范围迅速增加，仅仅10年时间乳腺癌的总发病率提高了近10倍，乳腺癌在中国更是以每年2.7％的比例快速增长。流行病学资料显示，基因的异常扩增和突变及遗传易感性改变在乳腺癌的发生过程中也起到重要作用。目前对早期诊断的乳腺癌患者仍然以手术切除为主辅助化学药物治疗，对于晚期发现的乳腺癌化学药物治疗及内分泌治疗非常重要。越来越多的证据提示，乳腺癌的分子病理分型对其治疗效果至关重要，它从根本上决定着乳腺癌的进展及患者预后，也在一定程度上决定了乳腺癌的治疗方式的选择。目前，乳腺癌筛查、早期诊断、手术、放疗、化疗、内分泌和免疫治疗等综合诊疗模式使患者的死亡率逐渐降低，但仍有相当一部分患者会出现复发和转移。因此，需要不断探索乳腺癌复发和转移的分子机制，寻找潜在的干预靶点。长链非编码RNA(long-noncodingRNA,lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸，因缺少有意义的开放阅读框，而不具有蛋白编码功能的一类非编码RNA分子。其在表观遗传学、基因转录以及转录后等多层面调控基因表达，并与其他生物分子互相作用，参与许多生理和病理的调控过程。由于lncRNA数量多，结构多样，作用机制复杂，对lncRNA的认识尚处于起步阶段，大多数lncRNA的生物学功能还有待探索。随着基因检测技术的发展和应用，越来越多lncRNA被发现在癌组织异常表达。研究报道证实，lncRNA分子能够特异调控癌症发生和发展，具有癌症新型治疗靶点及生物标志物的潜力和应用前景，如专利201710522240.1、201710522694.9、201710522693.4中就报道了lncRNA的差异表达与肝癌的发生发展相关。乳腺癌是女性中发病率最高的癌症，尤其在城市女性中发病率快速增长。虽然早发现，早治疗，早手术等策略使乳腺癌术后五年生存率提高至98％左右，但乳腺癌的转移和复发依旧无法医治。越来越多的lncRNA分子被证实参与乳腺癌发生和发展的调控。lncRNA的深入研究将为乳腺癌的特异性分子标记物、治疗和预后判断等提供新的思路。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供一种与乳腺癌发生发展相关的分子标志物。本专利技术的目的之二是提供一种乳腺癌的诊断产品和手段，通过检测分子标志物的表达水平来判断患者是否患有乳腺癌或者患乳腺癌的风险。本专利技术的目的之三，提供一种治疗乳腺癌的药物组合或方法，通过特异性的下调分子标志物来治疗乳腺癌。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测LINC02544基因表达的试剂在制备诊断乳腺癌的产品中的应用。进一步，所述试剂选自：特异性识别LINC02544的探针；或特异性扩增LINC02544的引物。进一步，所述的特异性扩增LINC02544基因的引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。本专利技术提供了一种诊断乳腺癌的产品，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测样本中LINC02544基因的表达水平的试剂。其中，所述产品包括(但不限于)芯片、制剂或试剂盒。进一步，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。本专利技术提供了LINC02544基因在制备预防或治疗乳腺癌的药物组合物中的应用。进一步，所述药物组合物包括LINC02544的下调剂。所述下调剂选自：以LINC02544或其转录本为靶序列、且能够抑制LINC02544基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。在本专利技术的具体实施方式中，所述的下调剂为siRNA；优选的所述siRNA序列如SEQIDNO.8、SEQIDNO.9所示。进一步，所述药物组合物还包括与所述下调剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。本专利技术提供了LINC02544基因在筛选预防或治疗乳腺癌的潜在物质中的应用。本专利技术提供了一种筛选预防或治疗乳腺癌的潜在物质的方法，所述方法包括：用候选物质处理表达或含有LINC02544基因的体系；和检测所述体系中LINC02544基因的表达；其中，若所述候选物质可降低LINC02544基因的表达或活性，(优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该候选物质是预防或治疗乳腺癌的潜在物质。所述体系选自：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选物质包括(但不限于)：针对LINC02544基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物等。附图说明图1是利用QPCR检测LINC02544基因在乳腺癌组织中的表达情况图；图2显示LINC02544在乳腺癌患者中的ROC曲线图；图3是利用QPCR检测LINC02544基因在乳腺癌细胞系中的表达情况图；图4是利用QPCR检测LINC02544在乳腺癌细胞中的转染情况图；图5是用CCK-8法检测LINC02544基因对乳腺癌细胞增殖的影响图；图6是利用Transwell小室检测LINC02544对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响图；其中图A是LINC02544对乳腺癌细胞迁移的影响图；图B是LINC02544对乳腺癌细胞侵袭的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量方法，采用目前覆盖数据库最广的lncRNA芯片，检测乳腺癌标本中lncRNA在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现其中具有明显表达差异的lncRNA，探讨其与乳腺癌的发生之间的关系，从而为乳腺癌的诊断及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了乳腺癌中LINC02544显著性上调。实验证明，siRNA干扰沉默LINC02544，能够有效地抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭，为乳腺癌的个性化治疗提供了新途径。基因标志物在本专利技术中，“基因标志物”、“分子标志物”和“生物标志物”可以相互替代，是其在组织或细胞中的表达水平与正常或健康细胞或组织的表达水平相比发生改变的任何基因。本专利技术可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本专利技术的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。LINC02544基因LINC02544是位于人6号染色长臂2区上，一种代表性的人LINC02544基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术中的LINC02544包括野生型、突变型或其片段。本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的靶标基因的任何特定变体的基因表达进行定量。如果当核酸或其片段与其它核酸(或其互补链)最佳比对时(具有适当的核苷酸插入或缺失)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测LINC02544基因表达的试剂在制备诊断乳腺癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测LINC02544基因表达的试剂在制备诊断乳腺癌的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别LINC02544的探针；或特异性扩增LINC02544的引物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，特异性扩增LINC02544的引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。4.一种诊断乳腺癌的产品，其特征在于，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测样本中LINC02544基因的表达水平的试剂。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。...

【专利技术属性】
技术研发人员：石小峰，孙锦云，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11