骨肉瘤的诊治标志物制造技术

本发明专利技术公开了骨肉瘤的诊治标志物，所述标志物为FIBCD1，实验证明，FIBCD1 mRNA及其蛋白在骨肉瘤组织中表达上调，提示可以将FIBCD1应用于骨肉瘤的早期诊断中；进一步，体外细胞实验证实FIBCD1与骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭有关，提示FIBCD1可以作为药物靶标应用于骨肉瘤的临床治疗。

Diagnosis and treatment markers of osteosarcoma

The present invention discloses the diagnosis and treatment of osteosarcoma markers, the markers of FIBCD1, experiments show that the expression of FIBCD1 and mRNA protein in osteosarcoma upregulation, revealed that the application of FIBCD1 in early diagnosis of osteosarcoma; further, in vitro experiments confirmed that FIBCD1 and osteosarcoma cell proliferation, apoptosis, migration and the invasion of the clinical treatment of FIBCD1 can be used as a drug target in osteosarcoma.

【技术实现步骤摘要】
骨肉瘤的诊治标志物
本专利技术属于生物医药领域，骨肉瘤的诊治标志物，具体的所述标志物为FIBCD1。
技术介绍
骨肉瘤(Osteosarcoma，OS)又称成骨肉瘤，为多发于10-25岁青少年的最常见的原发性恶性骨肿瘤，转移率、复发率及死亡率均较高，常常伴随截肢、肺转移、死亡等不良结局。目前，治疗骨肉瘤的方法仍然多以手术为主，适当联合放化疗(KushnirI,KolanderY,BickelsJ,etal.[J].MedOncol.,2014,31(5):936.)。切除肿瘤组织虽是骨肉瘤治疗中的重要步骤，但单纯手术治愈率仅为15％-20％(ArcherNP,NapierTS,VillanacciJF.[J].CancerCausesControl,2016,27(7):863一868.)。影像学手段的不断进步、各种保肢技术的逐步提高以及相关骨骼替代物的快速发展等，使得肢体保留的治疗方法日益在骨肉瘤的治疗中崭露头脚(WangTY,DormansJP,ChangB.[J].AnnPlastSurg.,2012,69(5):560-564.)。另一方面，对于控制骨肉瘤进展尤为关键的是适时在切除肿瘤组织之后联合巩固性的化疗或放疗。近年来，基因治疗、免疫治疗、分子靶向治疗等基础及临床研究虽取得了一定进展，当前疗效尚不肯定。肿瘤的发生发展是一个复杂的过程，是机体在各种因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控，导致细胞的异常增生而形成的新生物。肿瘤是基因疾病，其生物学基础是基因的异常。目前，关于骨肉瘤发生发展的分子调控机制至今尚未解释清楚。伴随着分子遗传学、细胞生物学、分子生物学、细胞遗传学、蛋白质组学及转录组学等的深入研究，生存环境与基因变异的相互影响已逐渐成为骨肉瘤领域的研究热点之一(ZhangG,BaiR,ZhangT,etal.[J].GenetMolRes.,2015,14(3):8283-8289)。近期研究发现骨肉瘤中一些基因呈现差异性表达，如专利201510075917.2、201510075920.4、201510075918.7、201510075919.1中公开的WWP1、C8orf59、CCTγ、PLEKHA5基因。随着对骨肉瘤分子生物研究的深入，骨肉瘤的靶向治疗也越来越多的成为研究的重点，并代表着未来的发展方向，寻找新的有效的生物标志物，对于骨肉瘤的早期诊断以及靶向治疗具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于，提供了生物标志物在骨肉瘤诊断和治疗中的应用。本专利技术的目的之二在于，提供一种诊断骨肉瘤的产品和治疗骨肉瘤的药物组合物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术的第一方面提供了一种检测生物标志物的试剂在制备用于诊断骨肉瘤的产品中的应用，包括：a)鉴定受试者的样品中的生物标志物，其中所述生物标志物为FIBCD1；以及b)将所述生物标志物与参照进行比较，其中与参照相比的所述生物标志物的差异用于检测骨肉瘤。进一步，所述样品为组织。进一步，与参照相比，生物标志物表达水平上调。本专利技术的第二方面提供了一种产品，所述产品包括检测FIBCD1水平的试剂。其中，FIBCD1在骨肉瘤患者中表达上调，所述产品包括(但不限于)制剂、芯片、试剂盒。进一步，所述试剂选自：特异性识别FIBCD1基因的探针；或特异性扩增FIBCD1基因的引物；或特异性结合FIBCD1编码的蛋白的抗体或配体。进一步，特异性扩增FIBCD1基因的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。本专利技术的第三方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括FIBCD1的抑制剂，和/或与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。进一步，所述抑制剂选自：核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子。进一步，所述抑制剂为核酸抑制物siRNA，优选的，siRNA的序列如SEQIDNO.9～10所示。本专利技术的第四方面提供了如下任一项所述的应用：1)本专利技术第二方面所述的产品在制备诊断骨肉瘤的工具中的应用。2)FIBCD1在制备治疗肿瘤的药物中的应用；3)FIBCD1在制备治疗骨肉瘤转移的药物组合物中的应用；4)FIBCD1在筛选治疗骨肉瘤的候选药物中的应用。进一步，1)所述产品包括用RT-PCR、实时定量PCR、新一代测序、原位杂交、芯片或免疫测定技术检测FIBCD1的试剂；2)或3)中所述药物组合物包括FIBCD1抑制剂，和/或与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料；其中，所述抑制剂选自：以FIBCD1或其转录本为靶序列、且能够抑制FIBCD1基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物；或特异性与FIBCD1编码的蛋白结合的结合分子(如能够抑制FIBCD1蛋白活性的抗体或配体)。4)中筛选治疗骨肉瘤的候选药物的步骤包括：用候选物质处理表达或含有FIBCD1基因或其编码的蛋白的体系；和检测所述体系中FIBCD1基因或其编码的蛋白的表达或活性。附图说明图1是利用QPCR检测FIBCD1基因在骨肉瘤组织中的表达情况图；图2是利用Westernblot检测FIBCD1蛋白在骨肉瘤组织中的表达情况图；图3是FIBCD1在骨肉瘤细胞中的转染情况图；其中，图A是利用QPCR检测转染对骨肉瘤细胞中FIBCD1mRNA表达的影响图；图B是利用Westernblot检测转染对骨肉瘤细胞中FIBCD1蛋白的影响图；图4是检测FIBCD1基因对骨肉瘤细胞增殖的影响图；图5是检测FIBCD1对骨肉瘤细胞迁移的影响图；图6是检测FIBCD1对骨肉瘤细胞侵袭的影响图。具体实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序方法，检测骨肉瘤标本中基因在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现差异表达的基因，探讨其与骨肉瘤的发生之间的关系，从而为骨肉瘤的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了骨肉瘤中FIBCD1显著性上调。实验证明，通过降低FIBCD1的表达水平，能够有效地抑制骨肉瘤细胞的生长和侵袭，提示检测FIBCD1基因的表达水平可成为骨肉瘤早期诊断的辅助诊断指标之一，干扰FIBCD1基因表达可成为预防或治疗骨肉瘤或骨肉瘤转移的新途径。(生物)标志物“生物标志物”指代具有特异性生物学特性、生物化学特征或者方面的分子指示物，其可用于确定存在或不存在特定疾病或状况和/或特定疾病或状况的严重程度。在本专利技术中，“标志物”指与一个或多个生物分子相关的参数(即“生物标志物”)，例如天然或人工合成产生的核酸(即个体基因，以及编码和非编码DNA和RNA)和蛋白(例如肽、多肽)。本专利技术中的“标志物”还包括指可通过考虑来自两个或多个不同标志物的表达数据计算或以其他方式获得的单个参数。“蛋白质”、“肽”和“多肽”可以互换使用并且广义上指代具有两个或多个氨基酸亚基、氨基酸类似物或者拟肽的化合物。所述亚基可以由肽键相连。蛋白质或肽必须包含至少两个氨基酸并且氨基酸最大数目不限，其可以包含蛋白质或者肽的序列。本文所用术语“氨基酸”本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测生物标志物的试剂在制备用于诊断骨肉瘤的产品中的应用，其特征在于，包括：a)鉴定受试者的样品中的生物标志物，其中所述生物标志物为FIBCD1；以及b)将所述生物标志物与参照进行比较，其中与参照相比的所述生物标志物的差异用于检测骨肉瘤。

【技术特征摘要】
1.检测生物标志物的试剂在制备用于诊断骨肉瘤的产品中的应用，其特征在于，包括：a)鉴定受试者的样品中的生物标志物，其中所述生物标志物为FIBCD1；以及b)将所述生物标志物与参照进行比较，其中与参照相比的所述生物标志物的差异用于检测骨肉瘤。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样品为组织。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，与参照相比，生物标志物表达水平上调。4.一种产品，其特征在于，所述产品包括检测FIBCD1水平的试剂。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别FIBCD1基因的探针；或特异性扩增FIBCD1基因的引物；或特异性结合FIBCD1编码的蛋白的抗体或配体。6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，特异性扩增FIBCD1基...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，孙耀兰，常鹏，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11