一种脱落细胞染色液及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种脱落细胞染色液及其制备方法，包括用于细胞核染色的苏木素染色液，用于细胞浆染色的EA50染色液与橙黄G染色液，染色效果持久稳固，不易脱色，可长久保存。可长久保存。

【技术实现步骤摘要】
一种脱落细胞染色液及其制备方法


[0001]本专利技术涉及细胞染色
，具体涉及一种脱落细胞染色液及其制备方法。

技术介绍

[0002]在生物体体液或分泌物的细胞检测中，通常采用细胞染色技术来区分不同种类、不同形态、不同状态的细胞，用于明场观察检测的常规细胞染色技术中，通常是将待检测样本涂抹在透明载体如载玻片上，等检测样本干燥后，再依次滴入具有不同染色效果的染液及缓冲液，混合均匀完成染色后，再冲洗掉影响观测的染液及缓冲液主体，再等待染色样本干燥后，完成整个染色过程，形成用于明场观测的染色后的样本涂片。
[0003]在临床实验中，液基测试白带或子宫颈细胞样本中的有形成分的数量，可以明显提高妇儿科阴道炎症疾病如细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎和非特异性阴道炎等类别的辅助诊断或阴道手术后炎症的预防、癌变细胞的检测率，而判定样本中有形成分的数量是通过对染色后的细胞样本进行计数而得到的，因此脱落细胞染色液对于样本检测十分重要。
[0004]公开号为CN201910139521.8的中国专利公开了一种一种液基脱落细胞染色液及其染色方法，该染色液由细胞浆染色液R1和染色液R2组成，所述细胞浆染色液R1由A1溶液、A2溶液和A3溶液混合而成，A1溶液为0.5
‑
1.5g碱性染料溶解于10
‑
20mL无水乙醇得到的混合液；A2溶液为0.1
‑
0.5g灿烂甲酚蓝与80
‑
100mL水配制的混合液；A3溶液为1
‑
3g碘盐与10
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15mL水配制得盐溶液；染色液R2为双氧水与生理盐水的混合液，其中双氧水的浓度为3
‑
5%，双氧水与生理盐水的混合体积比为1：3
‑
5。通过科学配比，能有效显示细胞核结构，操作简单快捷，大大节省了细胞染色时间，提高了检测效率，但是使用该染色剂后，染色效果不稳定，在很短的时间内即褪色，无法满足长时间实时观察活细胞的需要。

技术实现思路

[0005]为解决上述问题，本专利技术提供一种脱落细胞染色液及其制备方法，染色效果持久稳固，不易脱色，可长久保存。
[0006]根据所属领域技术人员普遍的认知水平，苏木色精经氧化后可作为染核的染料，但其与DNA结合力不强，导致染色效果不佳，而亮绿、曙红、橙黄G作为细胞浆染色剂由于发色部分都是阴离子，只能与蛋白质的阳离子结合，在过酸或过碱状态下都易与蛋白质脱离，因此导致现有技术中的染色液染色效果不持久。
[0007]本专利技术人经过艰难地尝试后发现，添加硫酸铝钾作为苏木素染色液的媒剂能使苏木色精转化为苏木精矾，后者具有强大亲和力，与DNA结合牢固，染成较深紫色，不易为醇、水洗脱，可实现细胞核的稳固染色，而添加磷钨酸作为EA50染色液和橙黄G染色液的媒剂，不仅可通过调节pH使细胞浆内染色环境维持所需范围，还增加染料的着色力，使得细胞浆的染色效果更稳固；另一方面，通过添加促染剂、渗透压调节剂提高染色效率，并通过添加防腐剂解决由于添加促染剂而导致的染色液易长菌腐败的问题。
[0008]根据本专利技术的第一方面，提供一种脱落细胞染色液，包括用于细胞核染色的苏木素染色液，用于细胞浆染色的EA50染色液与橙黄G染色液，其中，所述苏木素染色液包括质量份数如下的组分：苏木色精
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5份硫酸铝钾
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17.6
‑
20份碘酸钠
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0.2
‑
0.8份冰醋酸
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4份无水乙醇
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25份
‑
35份蒸馏水
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75份
‑
80份，所述EA50染色液包括质量份数如下的组分：亮绿
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0.3
‑
0.5份曙红
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6份甲醇
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25
‑
30份冰醋酸
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4份磷钨酸
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5份无水乙醇
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
75
‑
80份，所述橙黄G染色液包括质量份数如下的组分：橙黄G
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8份磷钨酸
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0.15
‑
0.2份无水乙醇
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80
‑
90份蒸馏水
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15份。
[0009]本方案的脱落细胞染色液对细胞核和细胞浆进行分色染色，苏木素染色液对细胞核的亲和力大，EA50染色液、EA50染色液对细胞浆中不同老化程度的细胞浆蛋白不仅结合力强，且可实现分色，最终达到染色分明、不易脱色的效果。
[0010]其具体机理为：细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸，其等电点为pH 1.6
‑
2.0，当pH大于2.0时DNA带负电，能与带正电的染料阳离子结合。苏木色精是染核的染料，氧化后成为氧化苏木素即苏木素红或苏木精，它的等离子点是PH 6.5，当染液的酸碱度调节到PH 2.2
‑
2.9时，苏木色精能析出阳离子，与带负电的DNA结合。因为苏木色精阳离子电荷不强，与DNA结合不牢，所以染色不深。当加入硫酸铝钾媒剂后，即结合成带强正电的大分子带色体——苏木精矾，后者具有强大亲和力，与DNA结合牢固，染成较深紫色，不易为醇、水洗脱，实现细胞核的稳固染色；细胞浆中的蛋白质等电点约为PH 6.0，在不同的酸碱度中能与不同的染料结合，但在PH小于4时便不能再与染料的阳离子结合；PH大于8时便不再与染料的阴离子结合，亮绿、曙红的发色部分都是阴离子，只能与蛋白质的阳离子结合，因此染色环境不能太酸太碱，需要利用冰醋酸与磷钨酸进行调节，较年轻的细胞如底层鳞状上皮细胞浆中核蛋白体较多，易与亮绿结合而染绿色，成熟的细胞浆中含核蛋白体较少，如成熟红细胞、表层角化鳞状上皮细胞，易与曙红、亮绿结合而染色，很衰老的细胞，如完全角化细胞则可与橙黄G结合染色，以形成不同色系的细胞浆染色状态，另外，磷钨酸在染色过程中，作为媒染剂可增加染料的着色力，使得细胞浆的染色效果更稳固。
[0011]优选地，还包括中和液，所述中和液包括柠檬酸和磷酸氢二钠的混合物，本方案中中和液包括一对中性缓冲剂，可中和染色过程后多余的酸或碱，保证染色达到理想效果。
[0012]优选地，所述苏木素染色液的pH值为2.7
‑
3.0。
[0013]优选地，所述EA50染色液的pH值为5.3
‑
5.5，亮绿、曙红的发色部分为阴离子，只能与蛋白质的阳离子结合，因此染色环境的pH不能太酸也不能太碱。
[0014]优选地，苏木素染色液还包括促染剂，所述促染剂为非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂具体可以为吐温...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱落细胞染色液，其特征在于，包括用于细胞核染色的苏木素染色液，用于细胞浆染色的EA50染色液与橙黄G染色液，其中，所述苏木素染色液包括质量份数如下的组分：苏木色精
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5份硫酸铝钾
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17.6
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20份碘酸钠
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0.2
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0.8份冰醋酸
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4份无水乙醇
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25份
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35份蒸馏水
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75份
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80份，所述EA50染色液包括质量份数如下的组分：亮绿
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0.3
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0.5份曙红
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6份甲醇
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25
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30份冰醋酸
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4份磷钨酸
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5份无水乙醇
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75
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80份，所述橙黄G染色液包括质量份数如下的组分：橙黄G
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8份磷钨酸
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0.15
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0.2份无水乙醇
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80
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90份蒸馏水
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15份。2.根据权利要求1所述的一种脱落细胞染色液，其特征在于，还包括中和液，所述中和液包括柠檬酸和磷酸氢二钠的混合物。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙翠莲，
申请(专利权)人：北京艾迪康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：