猪圆环病毒2型与猪圆环病毒3型二价灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种猪圆环病毒2型与3型二价灭活疫苗及其制备方法，含有灭活的猪圆环病毒2型和3型以及疫苗佐剂；其中猪圆环病毒2型与3型的含量分别至少为10

A two valent inactivated vaccine for porcine circovirus type 2 and porcine circovirus type 3 and its preparation methods

The invention provides a porcine circovirus type 2 and 3 type two valent inactivated vaccine and its preparation method, containing inactivated porcine circovirus type 2 and 3, and vaccine adjuvant, and the content of porcine circovirus type 2 and 3 is 10, respectively.

【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒2型与猪圆环病毒3型二价灭活疫苗及其制备方法
本专利技术涉及一种猪圆环病毒2型与3型二价灭活疫苗及其制备方法，属于兽用疫苗领域。
技术介绍
猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV）是迄今发现的最小的动物病毒之一，直径在12-23nm。基于猪圆环病毒的核苷酸序列、致病性以及抗原性的差异，分为三个亚型，分别是PCV-1、PCV-2和PCV-3三个基因型，其中PCV-1被认为无致病性，PCV2基因组大小分1767和1768bp两种，目前报道PCV-2基因型主要分为2a、2b、2c、2d与2e五种亚型，PCV3基因组大小为2000bp，PCV-2与PCV-3则可造成不同日龄猪只的临床感染。PCV-2与PCV-3是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PostweaningMultisystemicWastingSyndrome,PMWS）、PDNS（猪皮炎与肾病综合征）、PNP（增生性坏死性肺炎）以及PRDC（猪呼吸道疾病综合征）的主要病原。PMWS最早发现于加拿大（1991），很快在欧美及亚洲一些国家包括我国发生和流行，此外，繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV-2和PCV-3感染有重要关联。PCV-2及相关的猪病，死亡率大约为10%-30%之间，疫情严重的猪场死淘率有时高达40%，给养猪业造成巨大的经济损失。究其原因，PCV-2感染可引起猪的免疫抑制，进而降低了机体对其它各类病原的抵抗力，常见的混合感染病原包括PRRSV（猪繁殖与呼吸综合征病毒）、PRV(猪伪狂犬病毒)、PPV（猪细小病毒）、猪肺炎支原体等病，其中二重感染或三重感染也较常见，而病猪的病死率也会大大提高至大约25%-40%。目前市场上主要有10种商品化的PCV-2疫苗，其中德国勃林格殷格翰动物保健公司的PCV-2疫苗，原理是将PCV-2基因组中编码免疫原性蛋白的ORF2片段插入到杆状病毒载体中，进而转导昆虫细胞获得重组杆状病毒，即可快速大量获得具备免疫原性的PCV-2核衣壳蛋白，再将其制备成疫苗，大量田间试验表明该类疫苗可为仔猪提供良好的免疫保护；另一类是青岛易邦生物工程有限公司的猪圆环病毒II型基因工程亚单位疫苗，原理是应用原核表达系统对PCV-2的核衣壳蛋白进行表达，田间试验表明该类疫苗可为仔猪提供较好的免疫保护；另一类是PCV-2灭活疫苗，目前市场上有7个不同毒株的PCV-2全病毒灭活疫苗。但值得注意的是，上述PCV2疫苗皆为基于PCV2a或PCV2b亚型毒株开发生产，近年来的流行病学调查发现PCV2d逐渐成为中国田间流行的主要优势亚型毒株，而市场上目前尚无针对PCV2d亚型毒株的疫苗。目前还没有国产的或国外注册的PCV-3疫苗以及PCV-2与PCV-3二价疫苗。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种猪圆环病毒2型与3型二价灭活疫苗及其制备方法，用于同时预防猪圆环病毒2型与3型。技术方法一种猪圆环病毒2型与3型二价灭活疫苗，含有灭活的猪圆环病毒2型与3型、疫苗佐剂；其中，猪圆环病毒2型与3型含量分别至少为105.5TCID50/头份。优选地，本专利技术所述的猪圆环病毒2型与3型含量分别为106.0TCID50/头份。优选地，本专利技术所述的疫苗佐剂为氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆（Carbomer）、Gel01（法国SEPPIC）、蜂胶、ISA206、ISA760VG。优选地，本专利技术所述的疫苗佐剂为卡波姆（Carbomer）、Gel01、ISA206、ISA760VG。优选地，本专利技术所述的疫苗佐剂为ISA206。最优选地，本专利技术所述的二价灭活疫苗为含有猪圆环病毒2型与3型各106.0TCID50/头份，ISA20650%V/V。本专利技术的另一目的在于提供一种制备猪圆环病毒2型与3型二价灭活疫苗的方法，包含以下步骤：分别培养猪圆环病毒2型与3型，将获得的猪圆环病毒2型与3型进行灭活、浓缩，获得猪圆环病毒2型与3型抗原，将上述两种抗原成分按比例混合，辅以疫苗佐剂制备成二价灭活疫苗。优选地，本专利技术所述的二价灭活疫苗的制备方法中，所述的猪圆环病毒2型与3型分别至少105.5TCID50/头份。优选地，本专利技术所述的二价灭活疫苗的制备方法中，所述的猪圆环病毒2型与3型浓缩至含量分别为106.0TCID50/头份。优选地，本专利技术所述的二价灭活疫苗的制备方法中，所述的疫苗佐剂为ISA206，含量为疫苗总量的50%V/V。有上述技术方案及本专利技术的后续实施例可以看出，本专利技术的二价灭活疫苗，无论是从攻毒保护效果上，还是从血清学抗体水平上来看，其免疫效果都较市场上的商品单苗之和更佳，两种抗原之间无相互干扰；其次，本专利技术的二价灭活疫苗的免疫持续期长，效力持久，PCV2部分至少为120d，PCV3部分至少为150d，因此，可以获得更长的免疫周期；最后，本专利技术的二价灭活疫苗只需一次免疫，即可达到分别免疫单苗的效果，且省去PCV2单苗免疫的复杂程序，耗时少，费力少，既降低了成本，也减少了动物的应激反应。附图说明图1为本专利技术的二价灭活疫苗制备方法流程图。毒株来源说明本专利技术所选用的猪圆环病毒2型毒株为PCV-2d毒株HEB18株，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期：2017年6月7日，保藏号为CGMCCNo.13854。本专利技术所选用的猪圆环病毒3型毒株为PCV-3毒株BJ23株，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期：2017年6月7日，保藏号为CGMCCNo.13855。具体实施方式为使本专利技术更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。实施例1、猪圆环病毒2型与3型二价灭活疫苗的制备1.毒株的来源所选用的猪圆环病毒2型毒株为PCV-2d毒株HEB18株，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期：2017年6月7日，保藏号为CGMCCNo.13854。所选用的猪圆环病毒3型毒株为PCV-3毒株BJ23株，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期：2017年6月7日，保藏号为CGMCCNo.13855。2.疫苗半成品的制备及检验2.1生产用种子的制备2.1.1猪圆环病毒2型的制备：将毒种用乳化液作适当稀释，按5%接种于PK15细胞（购自中国兽医药品监察所）培养，37℃吸附30分钟，加入含4%体积小牛血清和2mmol/L的D-氨基葡萄糖盐酸的MEM细胞维持液，37℃培养4日，冻融2-3次，收获病毒。2.1.2猪圆环病毒3型的制备：将毒种用乳化液作适当稀释，按5%接种于PK15-R细胞（基于PK15细胞改造）培养，37℃吸附30分钟，加入含4%体积小牛血清和2mmol/L的D-氨基葡萄糖盐酸的MEM细胞维持液，37℃培养4日，冻融2-3次，收获病毒。2.2制苗用病毒液的制备2.2.1猪圆环病毒2型病毒液的制备：用转瓶细胞培养法。将长满单层的PK15细胞（购自中国兽医药品监察所），倒去细胞培养液，将毒种液按0.1-0.2TCID50/个细胞的接种量接种于PK15细胞上，轻轻旋转细胞瓶2周，37℃吸附30分钟，加入细胞维持液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型的二价灭活疫苗，其特征在于，含有灭活的猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型、疫苗佐剂；其中猪圆环病毒2型与猪圆环病毒3型含量分别≥10

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型的二价灭活疫苗，其特征在于，含有灭活的猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型、疫苗佐剂；其中猪圆环病毒2型与猪圆环病毒3型含量分别≥105.5TCID50/头份；其中所述的猪圆环病毒2型为HEB18株，保藏号为CGMCCNo.13854；其中所述的猪圆环病毒3型为BJ23株，保藏号为CGMCCNo.13855。2.根据权利要求1所述的二价灭活疫苗，其特征在于，所述的猪圆环病毒2型与3型含量分别为106.0TCID50/头份。3.根据权利要求1或2所述的二价灭活疫苗，其特征在于，所述的疫苗佐剂为氢氧化铝胶、矿物油、Gel01、蜂胶、ISA206和ISA760VG中的一种或几种。4.根据权利要求3所述的二价灭活疫苗，其特征在于，所述的疫苗佐剂为Gel01、ISA206、ISA760VG、。5.根据权利要求4所述的二价灭活疫苗，其特征在于，所述的疫苗佐剂为ISA206。6.根据权利要求1所述的二价灭活疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘灿，陈瑞，张磊，
申请(专利权)人：陕西诺威利华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61