本发明专利技术公开了一种检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1、2所示基因片段，用于分别检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型。本发明专利技术公开了一种检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的试剂盒。本发明专利技术基因芯片和试剂盒可以有效检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病原，具有特异性好、灵敏性高和保存期长等特点，耗时短，检测快速，检测结果的观察直观，无需昂贵的设备，可以迅速掌握畜禽疫病的感染情况，临床应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的可视化基因芯片以及检 测方法。
技术介绍
随着我国养猪业向集约化和规模化方向发展，规模化猪场疫病多发、多种病原混 合感染较普遍存在，给养猪业造成了一定损失。其中猪细小病毒（PPV)和猪圆环病毒2型 (PCV2)是引起猪繁殖障碍的两种重要疫病病原。这两种病临诊症状相似，需要进行鉴别诊 断。 目前，对这两种疾病的诊断多采用分离鉴定及常规的血清学方法，所需时间较长， 也有PCR技术的鉴别方法，但还没有建立操作性强且能同时鉴别两种病毒的方法。因此，有 必要建立能同时进行两种疫病快速检测的方法。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种特异性强、灵敏度高、可同时检测猪细小病 毒和/或猪圆环病毒2型的可视化基因芯片和试剂盒。 基因芯片，是指指通过不同方法将生物分子（寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、 抗体、抗原等）固着于硅片、玻璃片（珠）、塑料片（珠）、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的 生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。 本专利技术检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的基因芯片，它包括固相载体以及 固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO :1、2所示基因片段，用于分别检测猪 细小病毒和/或猪圆环病毒2型。 优选地，它还包括质控探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO :3和/或SEQ ID NO :4所 不O 本专利技术还提供了一种检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的试剂盒，其特征在 于：它包括前述的基因芯片以及扩增试剂；其中，扩增试剂包括SEQ ID NO :5~6、SEQ ID NO :7~8所示引物对，用于分别扩增猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的基因。 优选地，它还包括质控探针的扩增引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO :9~10和/ 或 SEQ ID NO :11 ~12 所示。 优选地，所述SEQ ID NO :5、7、9、11所示上游引物标记有生物素。 本专利技术还提供了 SEQ ID NO :1、2所示基因片段在制备检测猪细小病毒和/或猪圆 环病毒2型的基因芯片的用途。 优选地，所述基因芯片还包括质控探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO :3和/或SEQ ID NO :4 所示。 本专利技术还提供了 SEQ ID NO :5~6、SEQ ID NO :7~8所示引物对以及SEQ ID NO : 1、2所示基因片段在制备检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型中的用途；其中，两对引物 对为扩增试剂，SEQ ID NO :1、2所示基因片段为检测探针。 优选地，所述试剂盒还包括质控探针和质控探针的扩增引物，质控探针的核苷酸 序列如SEQ ID NO :3和/或SEQ ID NO :4所示，质控探针的扩增引物，分别如EQ ID NO: 9 ~10、SEQ ID NO :11 ~12 所示。 本专利技术基因芯片和试剂盒可以有效检测猪细小病毒和猪圆环病毒2型病原，具有 特异性好、灵敏性高和保存期长等特点，耗时短，检测快速，检测结果的观察直观，无需昂贵 的设备，可以迅速掌握畜禽疫病的感染情况，临床应用前景良好。 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术权利要 求书记载的内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。【附图说明】 图1 :阵列排布示意图； 图2 :点阵设置图不； 图3:样品设置图示； 图4 :芯片预杂交的组装图示 图5 :芯片特异性检测结果A:PRV检测结果；B:PPV检测结果；C:PCV2检测结果； D:PRV+PPV检测结果；E:PRV+PPV检测结果；F:PRV+PCV2检测结果。 图6 :NS1探针基因芯片灵敏性检测结果 图7 :0RF2探针基因芯片灵敏性检测结果 图8 :稳定性检测结果【具体实施方式】 实施例1本专利技术检测方法 -、探针基因的设计以及包含探针的质粒菌的构建 1 材料 I. 1 种毒 PRV Fa株，由卫生部成都生物制品研宄所惠赠； PCV2由本实验室赵春容从四川资阳病料中分离； 猪细小病毒灭活疫苗购自北京中海科技动物保健科技公司。 1. 2探针基因重组质粒菌 T/GAPDH由英骏生物公司合成。 1. 3主要实验仪器 电子天平：Sartorius BP 310S ; 超纯水仪：Milli Qplus，法国产； 超净工作台：SW-CJ-2FD，苏州安泰空气技术有限公司； 恒温摇床：真空机：SinBo,香港； 恒温水浴锅；Thermo Savant冷冻干燥仪； 核酸蛋白检测仪：Bio-RAD，SmartSpaee TM 3010 ; 高速冷冻离心机3K18型：SigmaB，德国产； Mini-SUB凝胶电泳装置，电泳仪：POWER Pac300,凝胶电泳图像分析系统2000型： Bio-RADt意大利产； 梯度 PCR 仪：PX 2, Thermo hybaid ;分子杂交仪：Thermo,美国产； 晶芯? SmartArrayer?48 (微阵列芯片点样系统），晶芯? LuxScan?10K微阵列芯片 扫描仪： Capitalbio Corporation，北京博奥生物有限公司； 高纯氮气瓶：四川冠峰气体有限公司生产。 1. 4主要试剂 Plasmid miniprep Kit，Gel Extractraction Kit，均购自 Omega (美国）生物技 术有限公司； 血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒、50bp DNA LadderUOObp DNA Ladder、 2XTaq PCR MasterMix、DH5a感受态细胞-化学转化，Amp均购自北京天根生化科技有限公 司； PUC18Cloning Vector，pMD19_T Simple克隆试剂盒，均购自宝生物（大连）科技 有限公司； LB 液体培养基（含 100mg/ml Amp) ;LB 平板（含 100mg/ml Amp)等。 Western Blot膜封闭液，购自天根生物科技有限生司； Streptavidin-HRP，DAB Kit (Brown)购自英駿生物科技有限公司； Baio?点样缓冲液，购自上海百傲生物工程有限公司； 预杂交缓冲液：甲酰胺 50ml、20XSSC 25ml、100Xdenhartd's 5ml、脱脂奶粉 5g、 0· 2M Na3PO4IOml,超纯水定容至 100ml ; 杂交缓冲液，甲酰胺45ml、20XSSC 25ml、100Xdenhartd's 1ml、脱脂奶粉2g、20m M Na3PO4 (pH 6· 5) 10ml，超纯水定容至 100ml ; 尼龙膜，购自GE Healthcare ;硝酸纤维素膜，购自Millipore. 0· 2M PBS 缓冲液：NaCl 8g、KCl 0· 2g、Na2HPO4L 42g、KH2PO4O. 27g，定容至 IL ; 洗液 I :1XSSC 0· 1% SDS ;洗液 II :0· 2XSSC 0· 1% SDS ;洗液III :0· 2XSSC ;超 纯水。 2实验方法 2.1探针设计 2. LlPPV 探针本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型的基因芯片，其特征在于：它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1、2所示基因片段，用于分别检测猪细小病毒和/或猪圆环病毒2型。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：文心田，曹三杰，常晓霞，黄小波，伍锐，文翼平，张仙，杨国淋，马锐，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
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