猪圆环病毒2型灭活疫苗连续收毒悬浮培养生产方法技术

技术编号:12820672 阅读:150 留言:0更新日期:2016-02-07 11:57
本发明专利技术公开了一种猪圆环病毒2型灭活疫苗连续收毒悬浮培养生产方法,首先筛选出PCV2增殖敏感的细胞,扩大培养后消化细胞,接种到一级生物反应器,MEM细胞生长液培养后排出生长液,补加MEM细胞维持液,培养后排出维持液,细胞消化、分散后转入二级生物反应器中培养,收获细胞生长液和细胞维持液,细胞消化、分散后再转入三级生物反应器中培养,收获细胞生长液和细胞维持液,继续在三级生物反应器中用细胞生长液和细胞维持液交替培养,收获细胞生长液和细胞维持液至12代。PCV2增殖敏感的细胞适宜微载体连续多代次收获抗原培养;生物反应器生产效率高、成本低;本发明专利技术的维持液抗原效价较传统转瓶的抗原效价提高10-20倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术的实施方式涉及兽用生物制品
,更具体地,本专利技术的实施方式涉 及一种适合猪圆环病毒2型悬浮培养的敏感细胞株筛选,使用该敏感细胞进行猪圆环病毒 连续收毒悬浮培养生产。
技术介绍
目前,关于猪圆环病毒2型灭活疫苗的生产基本都用猪源PK-15细胞采用传统转 瓶工艺实现。但转瓶培养过程中,细胞增殖缓慢且生产过程中对细胞和病毒的培养条件, 如PH、溶氧、糖耗等难以监控和及时补给,无法提供最佳培养条件,造成该方法自动化程度 低,劳动强度大,并因转瓶细胞培养环境不可控性,导致产品质量稳定性差,批间差较大。而 物学特性特殊,在细胞中增殖滴度低且不产生细胞病变,这与当前动物疫苗大规模 生产不相适应。此外,如要扩大该疫苗生产规模只能通过增加转瓶数量的方法,结果导致车 间生产所需设备、人员等需求更大。另外,提高病毒效价,保证疫苗良好的临床效果是解决 猪圆环疫苗2型灭活疫苗产业化的当务之急。 传统工艺难以满足猪圆环病毒2型灭活疫苗的生产需求,已有的猪圆环病毒2性 悬浮培养生产工艺,病毒效价虽有所提高,但收毒代次较少,生产成本较高,与传统工艺比 较优势并不显著。
技术实现思路
本文档来自技高网
...

【技术保护点】
一种猪圆环病毒2型灭活疫苗连续收毒悬浮培养生产方法,其特征在于它包括以下步骤:(1)准备PK15克隆细胞用PK‑15细胞克隆得到PK15克隆细胞备用,该PK15克隆细胞的分类命名为猪肾上皮细胞PK15,该细胞在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO:11198;(2)PCV2增殖敏感细胞筛选消化不同的PK‑15克隆细胞和母细胞并同步接种相同剂量的PCV2病毒,待细胞长满至少50%时更换细胞维持液为MEM细胞维持液,37℃培养2d,用间接免疫荧光试验检测病毒感染的细胞量,筛选出PCV2增殖敏感的细胞,然后置37℃恒温箱连传3代进行种细胞扩繁,细胞长满后加入适量细胞冻...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:高鹏林艳舒经香
申请(专利权)人:成都天邦生物制品有限公司
类型:发明
国别省市:四川;51

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1