以减毒的新城疫病毒为特征的组合物和用于治疗瘤形成的使用方法技术

本发明专利技术提供了用于在人类受试者中诱导肿瘤消退的方法，这些方法利用具有修饰的F蛋白质切割位点的新城疫病毒(NDV)的修饰的中等毒力株，该中等毒力株对家禽是不致病的(弱毒力)，但是展现出溶瘤特性。这些披露的方法提供了安全、有效和可靠的手段在对其需要的个体中诱导肿瘤消退。这些方法克服了使用病毒的致病株用于人类疗法的缺点。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请要求2013年9月3日提交的美国临时申请序列号61/873,039的权益，该申请的内容通过引用结合在此。专利技术背景新城疫病毒(NDV)是一种禽病毒引起的传染性鸟疾病，影响许多驯养的和野生的鸟类。人类接触受感染的鸟类(例如，在家禽加工厂中)可以引起轻微的结膜炎和流感样症状，但是NDV以其他方式并不会对人类健康造成任何危害，并且大多数人针对NDV是血清反应阴性的。基于鸡中的病毒致病性，NDV致病性，如由脑内致病指数(CPI)确定的，分类为高(强毒力)、中等(中等毒力)或低(弱毒力)。由于农业考虑，自从2008年，具有鸡毒力(ICPI>0.7)的中等毒力和强毒力的NDV已经被USDA分类为“选择剂”该选择剂和毒素列表包括生物剂，这些生物剂具有对人类和动物健康、对植物健康、或对动物和植物产品构成严重威胁的潜能。天然发生形式的NDV已经被用于临床研究中，作为免疫疗法和病毒疗法的生物制品。因为病毒的选择性杀死人类肿瘤细胞的能力，伴随着对正常细胞的有限的毒性，NDV显示出了作为抗癌剂的希望。然而，由于NDV重新分类为选择剂，NDV作为抗癌剂的发展未能取得进展。其他溶瘤病毒在临床试验中已显示出相当大的希望。为了有助于NDV作为癌症疗法的发展，需要新形式的病毒。理想地，此类新的形式将仍然保留他们靶向肿瘤细胞的能力，但是在鸟类中将不再引起疾病。专利技术概述如以下所描述，本专利技术特点是用于治疗瘤形成的组合物和方法。在一方面，本专利技术总体上提供了减毒的新城疫病毒(NDV)，该新城疫病毒具有NDV LaSota病毒株的或巨细胞病毒(CMV)的糖蛋白B(gB)的F蛋白质切割位点(S116)。在本专利技术的一个实施例中，经修饰的F蛋白质切割序列(FPCS)具有以下序列修饰之一，S116：111H-N-R-T-K-S/F117；S116K：111H-N-K-T-K-S/F117；S116M：111H-N-R-M-K-S/F117；S116KM：111H-N-K-M-K-S/F-I118；或R116：111H-N-R-T-K-R/F-I118。在另一个实施例中，减毒病毒株是一种经修饰的73T病毒株。在又另一个实施例中，减毒NDV病毒是r73T-R116病毒。在其他实施例中，该病毒具有增大的HN-L基因间区域。在又一其他实施例中，HN-L基因间区域是一种长度在至少约50-300氨基核苷酸之间的非编码序列。在其他实施例中，该非编码序列衍生自1型副粘病毒(APMV-1)，呼吸道合胞体病毒(RSV)或随机序列。在又另一个实施例中，HN和L基因间非编码序列长度为60、102、144、198、或318nt。在另外的实施例中，该病毒在P-M联接和/或HN-L联接处具有插入的一个或多个异源多核苷酸序列。在其他实施例中，该病毒具有两个或更多个异源多核苷酸序列，其中将至少一个异源多核苷酸插入P-M联接处并且至少一个插入HN-L联接处。在其他实施例中，异源多核苷酸序列是一种编码多肽的转基因，该多肽增强了病毒溶瘤特性。在又另一个实施例中，该转基因编码细胞因子、细胞表面配体、和/或趋化因子。在其他实施例中，该细胞因子选自下组，该组由以下各项组成：GM-CSF、IL-2、IL-21、IL-15、IL-12、和IL-12p70。在具体实施例中，该细胞因子是人类GM-CSF。在其他实施例中，该异源多核苷酸序列是编码可检测部分的转基因。在某些实施例中，可检测部分的表达水平与病毒复制相关联。在又另一个实施例中，将NDV的F和HN基因由犬副流感病毒5(PIV 5)或鸽1型副粘病毒(PPMV-1)的相应的胞外域替换。在另一个具体实施例中，该病毒是73T-R116i-hGM-CSF。在其他实施例中，该减毒病毒具有大于90小时或约90-156小时的蛋中平均死亡时间(MDT)。在另一个实施例中，该减毒病毒具有在约0-0.7之间的脑内致病指数。在另外的实施例中，该减毒病毒具有约0的脑内致病指数。在又另一个实施例中，该减毒病毒在HT1080细胞中具有低于约15％的细胞毒性。在其他实施例中，该减毒病毒以至少10％或15％的杀死效率选择性杀死肿瘤细胞。在另一个实施例中，肿瘤细胞杀死效率处于在约75％-100％之间。本专利技术的另一方面一般特征是一种选择性杀死肿瘤细胞的方法，该方法涉及将肿瘤细胞与在此描述的减毒的新城疫病毒接触。在本专利技术的另一个实施例中，该肿瘤细胞是膀胱、卵巢、脑、胰脏、前列腺、肉瘤、肺、乳腺、宫颈、肝、头颈、胃、肾、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、甲状腺、结肠、和黑色素瘤癌细胞。在又另一个实施例中，该方法涉及向受试者给予有效量的在此描述的减毒的新城疫病毒。在又另一个实施例中，将该减毒的新城疫病毒经全身、向腹膜内、或肿瘤内递送。在其他实施例中，将病毒以约107pfu至约109pfu的剂量给予。在另外的实施例中，将病毒以约109pfu至约1011pfu的剂量经静脉内给予。在其他实施例中，受试者患有选自下组的癌症，该组由以下各项组成：膀胱癌、卵巢癌、脑癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、头颈癌、胃癌、肾癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、甲状腺癌、结肠癌、和黑色素瘤。在又另一方面，本专利技术一般特征是一种治疗已经产生抗NDV免疫应答的受试者中瘤形成的方法，该方法涉及向受试者给予有效量的在此描述的减毒嵌合新城疫病毒，其中该病毒是一种嵌合病毒，该嵌合病包括犬副流感病毒5(PIV 5)或鸽1型副粘病毒(PPMV-1)的F和/或HN基因，其中嵌合新城疫病毒在抗原性上与NDV不同。在本专利技术的一个实施例中，相对于已经形成抗NDV疫应答但是并没有接受嵌合新城疫病毒的对照受试者中存在的溶瘤病毒的水平，该方法增加了受试者中存在的溶瘤病毒的水平。定义除非另外说明，本文所用的所有科技术语的意义都与本专利技术所属
的技术人员通常所理解的意义一致。下面的参考文献为技术人员提供了本专利技术所用的多个术语的通用定义：辛格尔顿(Singleton)等人，微生物学和分子生物学词典(Dictionary of Microbiology and Molecular Biology)(第2版，1994)；剑桥科技词典(The Cambridge Dictionary ofScience and Technology)(沃克(Walker)编著，1988)；遗传学的术语表(The Glossary ofGenetics)，第5版，R.列赫尔(R.Rieger)等人(编著)，斯普林格出版社(Springer Verlag)(1991)；以及黑尔(Hale)和马哈姆(Marham)，哈珀柯林斯生物学词典(The Harper Collins Dictionary ofBiology)(1991)。除非另行指明，如在此使用的以下术语具有以下赋予它们的含意。“减毒的新城疫病毒”意指一种新城疫病毒，该新城疫病毒选择性杀死肿瘤细胞但是并不对家禽构成威胁。在一个实施例中，减毒的新城疫病毒具有小于约0.4或0.7的ICPI。在其他实施例中，减毒的新城疫病毒具有在约0和0.1之间的ICPI。“异源多核苷酸序列”意指一种在野生型条件中不存在的重组多核苷酸。所谓“可检测的标记物(detecta本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减毒的新城疫病毒(NDV)，包括衍生自巨细胞病毒(CMV)的糖蛋白B(gB)的F蛋白质切割位点(S116)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.09.03 US 61/873,0391.一种减毒的新城疫病毒(NDV)，包括衍生自巨细胞病毒(CMV)的糖蛋白B(gB)的F蛋白质切割位点(S116)。2.如权利要求1所述的减毒的新城疫病毒，其中该修饰的F蛋白质切割序列(FPCS)包括选自下组的序列，该组由以下各项组成：- S116：111H-N-R-T-K-S/F117- S116K：111H-N-K-T-K-S/F117- S116M：111H-N-R-M-K-S/F117- S116KM：111H-N-K-M-K-S/F-I118- R116：111H-N-R-T-K-R/F-I118。3.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的病毒株是修饰的73T病毒株。4.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的NDV病毒是r73T-R116病毒。5.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该病毒包括增大的HN-L基因间区域。6.如权利要求1-5中任一项所述的减毒的新城疫病毒，其中该HN-L基因间区域包括长度在至少约50-300氨基核苷酸之间的非编码序列。7.如权利要求6所述的减毒的新城疫病毒，其中该非编码序列衍生自1型副粘病毒(APMV-1)，呼吸道合胞体病毒(RSV)或随机序列。8.如权利要求6所述的减毒的新城疫病毒，其中该HN和L基因间非编码序列长度为60nt、102nt、144nt、198nt、或318nt。9.如权利要求1-8中任一项所述的减毒的新城疫病毒，其中该病毒包括在P-M联接处和/或HN-L联接处插入的一个或多个异源多核苷酸序列。10.如权利要求9所述的减毒的新城疫病毒，其中该病毒包括两个或更多个异源多核苷酸序列，其中将至少一个异源多核苷酸序列在P-M联接处插入并且将至少一个在HN-L联接处插入。11.如权利要求9所述的减毒的新城疫病毒，其中该异源多核苷酸序列是编码多肽的转基因，该多肽增强该病毒的溶瘤特性。12.如权利要求10所述的减毒的新城疫病毒，其中该转基因编码细胞因子、细胞表面配体、和/或趋化因子。13.如权利要求10所述的减毒的新城疫病毒，其中该细胞因子选自下组，该组由以下各项组成：GM-CSF、IL-2、IL-21、IL-15、IL-12、和IL-12p70。14.如权利要求13所述的减毒的新城疫病毒，其中该细胞因子是人类GM-CSF。15.如权利要求9所述的减毒的新城疫病毒，其中该异源多核苷酸序列是编码可检测部分的转基因。16.如权利要求15所述的减毒的新城疫病毒，其中该可检测部分的表达水平与病毒复制相关联。17.如权利要求1-16中任一项所述的减毒的新城疫病毒，其中将NDV的F和HN基因用犬副流感病毒5(PIV 5)或鸽1型副粘病毒(PPMV-1)的相应的胞外域替换。18.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该病毒是73T-R116i-hGM-CSF。19.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的病毒具有大于90小时或约90-156小时的蛋中平均死亡时间(MDT)。20.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的病毒具有在约0-0.7之间的脑内致病指数。21.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的病毒具有约0的脑内致病指数。22.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的病毒在HT1080细胞中具有低于约15％的细胞毒性。23.如权利要求1或2所述的减毒的新城疫病毒，其中该减毒的病毒以至少10％或15％的杀死效率选择性杀死肿瘤细胞。24.如权利要求23所述的减毒的新城疫病毒，其中该肿瘤细胞杀死效率在约75％-100％之间。25.一种选择性杀死肿瘤细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：程星，D卡罗尔，M麦库尔特，M贾林斯基，金红，
申请(专利权)人：免疫医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB