本发明专利技术公开了一种免疫增强试剂，包括携带免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒；免疫检查点为PD-1、PD-L1、CTLA-4中的一种或者几种。本发明专利技术利用携带不同免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒相互组合，通过在体外感染T细胞、自然杀伤细胞、细胞毒性T淋巴细胞或者细胞因子诱导的杀伤细胞等免疫细胞；被感染的免疫细胞回输至肿瘤病人体后表达分泌这些免疫检查点的抗体，从而阻断免疫检查点受体及其配体的结合，有效阻断免疫抑制信号传递，破坏免疫肿瘤抑制微环境，提高免疫细胞的杀伤能力，从而提高过继免疫治疗的疗效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种免疫增强试剂，可以在体外提高免疫细 胞的激活、增殖及细胞因子释放能力。
技术介绍
免疫细胞激活过程中受许多表面分子精密的调节，有的促进免疫细胞激活；有的 则是抑制性受体分子，负责传递抑制信号，以防止免疫系统过度活化。这些刺激或抑制免疫 细胞激活的分子，通常被称为免疫检查点，或免疫检查点分子，免疫开关分子等。 免疫检查点包括细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxicT lymphocyte-associatedantigen-4,CTLA-4)和程序性死亡受体 1 及其配体（programmed death1，PD-1/PD-L1)信号通路分子以及PD-L2、ID0-1、ID0-2、KIR、0X40、CD70、LAG-3、 TM3等。CTLA-4是T细胞活化的重要下调节因子。在T细胞活化过程中，CTLA-4通过抑 制细胞核内白细胞介素-2 (interleukin-2,IL-2)基因的转录、并直接抑制细胞周期的一 些关键成分的表达从而抑制T细胞的活化和增殖。而ro-1/PD-Ll信号通路也发挥着负性 免疫调节作用。已研宄证明，肿瘤细胞表面广泛高表达ro-Li分子。当T细胞表面的ro-i 与ro-Li耦联后，可导致T细胞胞质区的免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的酪氨酸残基磷 酸化，可募集磷酸酶蛋白酪氨酸酶2和蛋白酪氨酸酶1，不仅可阻滞细胞外信号调节激酶的 活化，还可阻断磷脂酰肌醇3-激酶和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的激活，最终抑制T淋巴细 胞增殖和相关细胞因子的分泌。同时，细胞因子白细胞介素2 (IL-2)、干扰素Y分泌也减 少。由于肿瘤病人体内免疫系统监视平衡被破坏，通过病人自身体内的免疫系统无法 有效清除肿瘤细胞。因此通过将在体外激活和扩增的自体或异体免疫效应细胞回输给肿瘤 患者体内，使其在体内发挥杀伤肿瘤细胞作用的过继性免疫细胞治疗在临床中得以盛行， 包括常用的免疫细胞治疗方法如：细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK)疗法、DC联合CIK细胞 疗法、自然杀伤细胞（NK)疗法、肿瘤侵润细胞疗法（TIL)、细胞毒性T淋巴细胞（CTL)的肿 瘤靶向疗法等。 但是，肿瘤细胞发展了许多机制以抑制机体的抗肿瘤免疫活性。肿瘤微环境的免 疫抑制主要通过肿瘤细胞及免疫细胞间传递免疫检查点抑制信号进行调控。由于肿瘤患 者体内的免疫抑制微环境，使得这些体外激活的免疫细胞回输体内后仍然无法克服体内的 免疫抑制作用，因此过继免疫疗法在大量的临床试验和应用中体现了其疗效非常低的局限 性（TrajanoskiZ,MaccalliC,MennonnaD,CasoratiG,ParmianiG,DellabonaP (2015)Somaticallymutatedtumorantigensinthequestforamoreefficacious patient-orientedimmunotherapyofcancer.Cancerimmunology,immunotherapy: CII64: 99-104)。 因此，很有必要研发一种有效的免疫试剂，封闭免疫检查点介导的免疫负调控，阻 断免疫抑制信号传递，提高从病人血液中在体外分离并扩增的免疫细胞的激活、增殖及细 胞因子释放能力，并进一步杀伤肿瘤细胞，以促进过继免疫疗法取得实质性效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种提高免疫细胞激活杀伤肿瘤功能的免疫增强试剂，可以 联合封闭一种或多种免疫检查点介导的共抑制信号通路，增加免疫细胞的激活、增殖及细 胞因子释放能力，有效防止肿瘤细胞的免疫抑制，从而提高从患者血液分离出来并扩增的 免疫细胞对肿瘤杀伤的能力。 为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为，一种免疫增强试剂，包括携带免 疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒，所述携带免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病 毒中，免疫检查点为ro-l、PD-Ll、CTLA_4中的一种或者几种。本专利技术利用携带不同免疫检 查点抗体分子编码基因的AAV病毒相互组合，通过在体外感染T细胞、自然杀伤细胞、细胞 毒性T淋巴细胞或者细胞因子诱导的杀伤细胞等免疫细胞；被感染的免疫细胞回输至肿瘤 病人体内，并表达分泌免疫检查点的抗体，从而阻断免疫检查点受体及其配体的结合，有效 阻断免疫抑制信号传递，提高了免疫细胞的激活、增殖和分泌细胞因子的能力，破坏免疫肿 瘤抑制微环境，提尚免疫细胞的杀伤能力，从而提尚过继免疫治疗的疗效。本专利技术针对的肿 瘤细胞免疫检查点为ro-l、PD-Ll、CTLA-4中的一种、两种或者三种，互相之间没有干扰，共 同提尚免疫试剂的效应，从而有效的提尚免疫细胞的杀伤能力。 上述技术方案中，所述ro-1抗体分子重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:1或 者SEQIDNO:3,轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:2或者SEQIDNO:4;所述H)-L1抗 体分子重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:5,轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO: 6 ;CTLA-4抗体分子重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:7或者SEQIDNO:9,轻链可变 区的氨基酸序列为SEQIDNO:8或者SEQIDNO:10。 上述技术方案中，所述携带免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒中，编码 I3D-I抗体分子重链可变区序列的DNA序列为SEQIDNO: 11或者SEQIDNO: 13;编码H)-l 抗体分子轻链可变区序列的DNA序列为SEQIDNO: 12或者SEQIDNO: 14;编码H)-L1抗 体分子重链可变区序列的DNA序列为SEQIDNO: 15;编码H)-L1抗体分子轻链可变区序 列的DNA序列为SEQIDNO: 16 ;编码CTLA-4抗体分子重链可变区序列的DNA序列为SEQ IDNO: 17或者SEQIDNO: 19;编码CTLA-4抗体分子轻链可变区序列的DNA序列为SEQID NO: 18 或者SEQIDNO:20。 本专利技术中，携带免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒中，所携带的DNA片段编 码得到的对应免疫检查点抗体分子也可以存在多种形式，为scFv片段、Fab片段或者全长 抗体。这些分子形式都可以结合免疫细胞或肿瘤细胞上对应的免疫抑制信号通路，阻断免 疫检查点与其配体间的结合，从而阻断肿瘤免疫抑制信号的传递。 上述技术方案中，免疫增强试剂还包括生理盐水或者PBS的缓冲液；本领域技术 人员可以根据需要添加。 本专利技术还公开了一种免疫增强体系，由上述携带免疫检查点抗体分子编码基因的 AAV病毒在体外感染T细胞、自然杀伤细胞、细胞毒性T淋巴细胞或者细胞因子诱导的杀伤 细胞制备得到，具体为向含有T细胞、自然杀伤细胞、细胞毒性T淋巴细胞或者细胞因子诱 导的杀伤细胞的培养基中添加上述携带免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒，培养后 就得到免疫增强体系，其可以回输至病人体内；在病人体内，被感染的免疫细胞通过分泌表 达抗体分子，与免疫检查点结合，封闭免疫检查点介导的共抑制信号通路。所结合的抗原分 子可以是免疫细胞表面的免疫检查点分子，也可以是肿瘤细胞或其他细胞表面的其他参与 免疫抑制或免疫激活的免疫检查点分子。 本专利技术还提供了一种体外增强本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫增强试剂，其特征在于：所述免疫增强试剂包括携带免疫检查点抗体分子编码基因的AAV病毒；所述免疫检查点为PD‑1、PD‑L1、CTLA‑4中的一种或者几种。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：季平，李凡池，于继彬，
申请(专利权)人：爱康得生物医学技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。