用于治疗细菌感染的包含抗细菌噬菌体的混合物的组合物及其使用方法技术

本发明专利技术涉及用于治疗和控制细菌感染(特别是糖尿病足感染)的噬菌体治疗领域。更具体而言，本发明专利技术涉及噬菌体菌株F44/10、F125/10、F770/05、F510/08、F1245/05、和/或其变体的新型混合物；以及使用该混合物来治疗和预防细菌感染的方法，包括由例如金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和/或鲍曼不动杆菌引起的与糖尿病足感染有关的皮肤溃疡。所述的混合物可以单独用作药物组合物，或者与其他疗法(例如抗生素、生长因子或者糖尿病足感染的其他标准及非标准的疗法)进一步结合来用作药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗细菌感染的包含抗细菌噬菌体的混合物的组合物及其使用方法序列表本专利技术包含序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII形式提交，并以引用方式全文并入本文。在2012年3月14日创建的所述ASCII拷贝命名为16395105.txt，并且大小为574,104字节。
本专利技术涉及用于治疗和控制细菌感染(具体为慢性溃疡，例如糖尿病足感染)的噬菌体疗法领域。更具体而言，本专利技术涉及噬菌体菌株F44/10、F125/10、F770/05、F510/08、F1245/05、其他噬菌体和/或其变体的新型混合物；以及使用该混合物在治疗和预防细菌感染中的方法，包括由例如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、绿脓假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和/或鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)引起的与糖尿病足感染有关的皮肤溃疡。所述的混合物可以单独地用作药物组合物，或者与其他疗法(例如抗生素、生长因子或用于慢性溃疡的其他标准或非标准的疗法)进一步组合使用。
技术介绍
糖尿病足感染(DFI)是糖尿病(DM)的频繁且严重的并发症，并且是全世界非创伤性下肢截肢的主要因素(JeffcoateWJ,etal.2003.Lancet361:1545-1551)。在目前的临床实践中，DFI的治疗包括清创术和系统性抗生素(例如参见LipskyBA,etal.2004.ClinInfectDis.39:885-910)。然而，由于血管化缺陷及局部微环境，所以抗生素浓度为多次低治疗浓度(LipskyBA,etal.2009.ClinInfectDis.49:1541-1549)。此外，随着社区和医院患者数量的逐渐增多，多重耐药有机体(例如甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌以及泛耐药非发酵阴性杆菌)的发生率的增加威胁着上述结果(MendesJJ,etal.2012.DiabetesResClinPract.95(1):153-161；TasciniC,etal.2011.DiabetesResClinPract94(1):133-139)。因此，仍需要鉴定用于治疗、控制和处理DFI的新方案。局部治疗提供了避免系统性不利作用、提供增加的靶位点浓度并允许使用不可用于系统性疗法的试剂的优点。由于机械清创术降低了细菌存在的生物负担并且还为局部抗微生物疗法(TAT)开放了时间依赖的治疗窗口，其改善了局部治疗(WolcottRD,etal.2010.JWoundCare19:320-328)。然而，到目前为止，没有TAT试剂被证明可以有效用于治疗DFI(NelsonEA,etal.2006.DiabetMed23:348-359)。噬菌体为特异性地感染并溶解细菌的病毒。噬菌体疗法由Felixd’Herelle在二十世纪20年代引入，其为使用整个噬菌体病毒来治疗细菌感染疾病的方法。但是随着抗生素在二十世纪40年代的发展，西方世界对基于噬菌体的疗法的兴趣下降。导致这种下降的最重要的因素之一是缺乏标准的测试方案和生产方法。就噬菌体疗法的价值而言，不能研发出用于测试噬菌体疗法的工业规模的标准干扰了研究结果的记录，导致可觉察的效力缺乏及可靠性问题。噬菌体生产的另一个问题涉及噬菌体的商业化制备物的纯度级别，其中制备物包含不需要的细菌成分，例如内毒素。因此，不良事件通常与制备物有关，特别是在静脉接受它们的患者中。然而，在东欧和前苏联(接受抗生素受到限制的地方)，噬菌体疗法的发展和使用与抗生素相关联地继续着，或者替代了抗生素。此外，随着许多细菌的抗生素抗性菌株的出现，对噬菌体基疗法的兴趣重返西方世界。换言之，即使可以研发新种类的抗生素，但是细菌将逐渐发展出对新药品的抗性的前景加剧了对用于控制、预防和治疗细菌感染的非化学疗法手段的探索。溶菌性噬菌体，特别是在补充有充分的机械清创术时，提供治疗DFI的溶液，例如用作新型TAT试剂。溶菌性细菌可以在溶解病原体细菌(特别是与多重抗药性有关的那些)中提供特异性和有效性的优点(RossneyAS，etal.1994.JHospInfect26:219-234)。其他的优点可以包括缺乏对人和动物的致病性(BurrowesB,etal.2011.ExpertRevAntiInfectTher9:775-785)，在生物膜中针对细菌的抗细菌活性，在微需氧环境(甚至具有高的细菌负荷)中的活性(AzeredoJ,etal.2008.CurrPharmBiotechnol9:261-266)，以及在世界上某些地方噬菌体疗法通常可接受的安全性(SulakvelidzeA,etal.,2001,AntimicrobAgentsChemother.45(3):649-659)。近期噬菌体疗法的动物试验证明了其在内部(McVayCS,etal.2007.AntimicrobAgentsChemother51:1934-1938)和外部应用(SoothillJS.1994.Burns20:209-211；WillsQF,etal.2005.AntimicrobAgentsChemother49:1220-1221)中治愈或改善皮肤细菌疾病的潜力。但是，支持使用噬菌体来治疗形成超过几个小时的感染的公开证据较少(RyanEM,etal.2011JPharmPharmacol63:1253-1264)。具体而言，例如在增加针对具体细菌菌株的溶菌活性以及降低对单一噬菌体具有抗性的细菌出现的可能性方面，噬菌体混合物可以提供强于使用单一噬菌体的优点。换言之，不同的噬菌体可以混合成混合物，从而拓宽它们的性质，由此优选地得到整体更广的抗细菌活性谱系，例如扩大的宿主范围，对于该范围的宿主，发展出抗性的可能性较低。但是，到目前为止，很少有噬菌体混合物具有针对不同细菌的抗微生物活性，可能是因为在将不同特异性的噬菌体结合起来同时保持储存稳定性中存在困难。因此，需要研发出作为用于体内针对致病性细菌的治疗性试剂和/或预防性试剂的新型噬菌体产物。此外，还需要更好的DFI治疗，特别是局部治疗。具体而言，需要能够溶解导致DFI的细菌的噬菌体混合物，包括金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和/或鲍曼不动杆菌。本申请解决了这种及其他的需要。专利技术概述在一个方面中，本专利技术涉及包括噬菌体混合物的组合物。在一些实施方案中，本专利技术提供了包含至少2种不同的分离的噬菌体菌株的组合物，每种噬菌体菌株都具有包含选自如下核酸序列的基因组：SEQIDNO:1(F44/10),SEQIDNO:2(F125/10),SEQIDNO:3(F770/05),SEQIDNO:4(F510/08),SEQIDNO:5(F1245/05)，或其变体，所述的变体与相应的核酸序列具有至少95％的序列一致性并且显示出针对金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和/或鲍曼不动杆菌中的至少一种的抗细菌活性。在一些实施方案中，所述的至少2种噬菌体菌株中的一种为具有如下基因组的菌株，所述的基因组包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:2或者其变体的核酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含至少2种不同的分离的噬菌体菌株的组合物，所述的菌株的每一种菌株都具有包含选自如下核酸序列的基因组：SEQ ID NO:1(F44/10)、SEQ ID NO:2(F125/10)、SEQ ID NO:3(F770/05)、SEQ ID NO:4(F510/08)和SEQ ID NO:5(F1245/05)或者其变体，所述的变体与所述的核酸序列具有至少95％的序列一致性并且显示针对金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和/或鲍曼不动杆菌中的至少一种的抗细菌活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.19 US 61/612,5311.一种包含至少4种噬菌体菌株的组合物，其中至少2种噬菌体菌株为具有如下基因组的菌株，所述的基因组包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的核酸序列，其中第三种和第四种菌株各自具有如下基因组，所述的基因组包含选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核酸序列。


2.一种包含至少4种噬菌体菌株的组合物，其中至少2种噬菌体菌株为具有如下基因组的菌株，所述的基因组包含SEQIDNO:3和SEQIDNO:4的核酸序列，其中第三种和第四种菌株各自具有如下基因组，所述的基因组包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:5的核酸序列。


3.一种包含至少5种分离的噬菌体菌株的组合物，所述的菌株具有如下基因组，所述的基因组包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核酸序列。


4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述的具有包含SEQIDNO:1、2、4和5的核酸序列的基因组的噬菌体菌株各自以相当于所述的具有包含SEQIDNO:3的核酸序列的基因组的噬菌体菌株10倍的量存在于所述的组合物中。


5.根据权利要求3所述的组合物，其中所述的组合物包含所述的具有如下基因组的噬菌体菌株，所述的基因组包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核酸序列。


6.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-5的任意一项所述的组合物及药物可接受的载体。


7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述的组合物配制用于局部应用。


8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其中所述的组合物包含其他的无菌缓冲剂。


9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述的缓冲剂包含0.05MTris-HCl、0.1MNaCl和10mMMgSO4.7H2O。


10.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其进一步包含其他试剂，该其他试剂选自抗生素试剂、抗炎症试剂、抗病毒试剂、局部麻醉剂、生长因子和皮质类固醇。


11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述的其他试剂为抗生素试剂，所述的抗生素试剂具有针对鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)、绿脓假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和/或金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的抗细菌活性。


12.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述的其他试剂为抗生素试剂，所述的抗生素试剂具有针对除了鲍曼不动杆菌、绿脓假单胞菌和金黄色葡萄球菌以外的细菌的抗细菌活性。


13.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其中所述的组合物用于治疗与不完整皮肤的区域有关的细菌感染，并且每种所述的噬菌体菌株均以相当于103至1013个噬菌体颗粒/cm2所述区域的量存在于所述的组合物中。


14.根据权利要求13所述的药物组合物，其中每种所述的噬菌体菌株均以相当于107至109个噬菌体颗粒/cm2所述区域的量存在于所述的组合物中。


15.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的组合物及药物可接受的载体。


16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述的组合物配制用于局部应用。


17.根据权利要求15或16所述的药物组合物，其进一步包含其他试剂，其中所述的其他试剂为具有针对金黄色葡萄球菌的抗细菌活性的抗生素试剂。


18.根据权利要求15或16所述的药物组合物，其进一...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·J·D·阿尔维斯门德斯，C·I·罗德里格斯莱安德罗，S·弗尔克尔科尔特雷亚尔，
申请(专利权)人：药物技术业制药技术股份有限公司，抗菌技术，生物技术研究与发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：葡萄牙;PT