猪圆环病毒2型(PCV2)亚单位疫苗制造技术

本发明专利技术公开了用不同PCV2亚型控制PCV2感染的免疫接种方法。特别地，将PCV2b亚型(PCV2b)ORF2蛋白或包含PCV2b ORF2蛋白的免疫原性组合物用于治疗或预防感染不同亚型的PCV2，减少、预防或治疗感染不同亚型的PCV2所引起的临床表现，或者预防或治疗感染不同亚型的PCV2所引起的疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】序列表本申请包含按照37C.F.R.1.821–1.825的序列表。本申请所附序列表整体援引加入本文。
技术介绍
猪圆环病毒2型(PCV2)是小的(直径17-22nm)、二十面体的、无包膜的DNA病毒，其包含单链环状基因组。PCV2与猪圆环病毒1型(PCV-1)共享约80％序列相同性。但是，与一般无毒力的PCV1相反，感染PCV2的猪表现出通常称作断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的综合征。PMWS的临床特征是消瘦、皮肤苍白、瘦弱、呼吸窘迫、腹泻、黄疸(icterus)和黄疸病(jaundice)。在一些受感染的猪中，所有表现的组合会变得明显，而其他猪仅具有这些临床表现中的一种或两种。在尸检中，微观和宏观病变也出现在多个组织和器官上，其中淋巴器官是最常见的病变部位。已观察到PCV2核酸或抗原的量与微观淋巴病变的严重程度之间的高相关性。感染PCV2的猪的死亡率可以达到80％。除了PMWS，PCV2与几种其他感染有关，包括伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、格拉塞氏病(Glasser’sdisease)、链球菌性脑膜炎、沙门氏菌病、断奶后大肠杆菌病、营养性肝功能障碍和化脓性支气管肺炎。目前，已知有3种亚型的PCV2(PCV2a、PCV2b和PCV2c)，它们根据PCV2基因型的统一命名进行分类(Segales,J.etal.,2008,PCV-2genotypedefinitionandnomenclature,VetRec162:867-8)。已提出另外两种亚型(PCV2d和PCV2e)(Wangetal.VirusRes.2009145(1):151-6)，但是，后来证实它们属于PCV2a和PCV2b组(Corteyetal.VetMicrobiol.2011149(3-4):522-32011)。根据PCV2基因型的这种统一命名，orf2基因用来进行pcv-2的基因型分型，其中所述基因型分型是基于所比较的两个序列不同的核苷酸位点的比例(p距离)。这个值通过核苷酸差异的数量除以所比较的核苷酸的总数获得(Kumaretal.2001Bioinformatics17,1244-1245)，随后，p距离/频率直方图的构建使得能够确定可能截断值以区分不同的基因型(RogersandHarpending1992MolecularBiologyandEvolution9,552-569；Biaginietal.1999JournalofGeneralVirology80,419-424)。利用这种方法，当orf2pcv-2序列之间的遗传距离为0·035时将它们分配至不同基因型。US2011/0305725A1描述了在猪中测试新疫苗制剂以评价其对猪圆环病毒和猪肺炎支原体(M.hyopneumoniae)的效力的研究。在这个研究的过程中，观察到对照和疫苗接种组中的一些猪表现出PMWS的临床表现。随后证实这些猪在攻击之前暴露于环境PCV2。来自这些猪的血液和组织样品的分子分析显示它们包含不同于用来攻击的毒株的2B型毒株(US2011/0305725A1的[0152]段)。因此，需要新的和增强的疫苗接种方法以控制不同PCV2亚型的PCV2感染。
技术实现思路
上述技术问题的解决通过说明书和权利要求书表征的实施方案完成。因此，本专利技术在其不同方面是根据权利要求书实施的。本专利技术是基于令人惊讶的发现，给药仅一个剂量的PCV2b亚型(PCV2b)ORF2蛋白，特别是如果其包含在免疫原性组合物中，足以减少和预防感染PCV2a或PCV2b所引起的临床表现。附图说明图1证实攻击之后28天的淋巴耗竭(lymphoiddepletion)结果。表现出扁桃体、髂、气管支气管和肠系膜淋巴结淋巴耗竭的猪阳性的百分比。示出用PCV2a免疫接种和攻击的猪以及用PCV2b免疫接种和攻击的猪。图2证实攻击之后28天的淋巴炎症结果。表现出扁桃体、髂、气管支气管和肠系膜淋巴结淋巴炎症的猪阳性的百分比。示出用PCV2a免疫接种和攻击的猪以及用PCV2b免疫接种和攻击的猪。图3证实攻击之后28天的IHC组织结果。来自以下组织的猪阳性IHC阳性的百分比；扁桃体、髂、气管支气管和肠系膜淋巴结。示出用PCV2a免疫接种和攻击的猪以及用PCV2b免疫接种和攻击的猪。图4证实攻击之后28天的平均肺炎症评分。攻击之后28天猪的平均组肺炎症评分。示出用PCV2a免疫接种和攻击的猪以及用PCV2b免疫接种和攻击的猪。图5证实攻击之后28天治疗组的PCV2病毒血症。通过利用PCV2a/2b引物和PCV2b特异性引物的PCR的猪阳性的百分比。示出用PCV2a免疫接种和攻击的猪以及用PCV2b免疫接种和攻击的猪。图6证实总严重程度评分，所有淋巴样组织，其用于确定每组缺失、炎症和定殖的缓解分数。图7证实攻击之后的PCV2b病毒血症，其中在第28天之后观察病毒血症的减少。具体实施方式本专利技术因此特别地分别基于PCV2bORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述PCV2bORF2蛋白或所述包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物可以用于特定目的。在一方面，本专利技术因此涉及PCV2b亚型(PCV2b)ORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物,其用在治疗或预防感染PCV2，减少、预防或治疗感染PCV2所引起的临床表现，或者预防或治疗感染PCV2所引起的疾病的方法中。本专利技术还提供一种治疗或预防感染PCV2，减少、预防或治疗感染PCV2所引起的临床表现，或者预防或治疗感染PCV2所引起的疾病的方法，所述方法包括向动物，特别是有需要的动物给药PCV2bORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物。而且，本专利技术提供PCV2bORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防感染PCV2，减少、预防或治疗感染PCV2所引起的临床表现，或者预防或治疗感染PCV2所引起的疾病。特别地，在本专利技术的上下文中，优选PCV2bORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述PCV2bORF2蛋白为重组PCV2bORF2蛋白，更优选重组杆状病毒表达的PCV2bORF2蛋白。特别地，为了本专利技术目的，优选PCV2bORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述PCV2bORF2蛋白包含或由以下序本文档来自技高网...

【技术保护点】
PCV2b亚型(PCV2b)ORF2蛋白或包含PCV2b ORF2蛋白的免疫原性组合物，用在治疗或预防感染PCV2，减少、预防或治疗感染PCV2所引起的临床表现，或者预防或治疗感染PCV2所引起的疾病的方法中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.08.23 US 61/869,3531.PCV2b亚型(PCV2b)ORF2蛋白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原
性组合物，用在治疗或预防感染PCV2，减少、预防或治疗感染PCV2所引
起的临床表现，或者预防或治疗感染PCV2所引起的疾病的方法中。
2.根据权利要求1的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或包含PCV2b
ORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述PCV2bORF2蛋白为重组PCV2b
ORF2蛋白，优选重组杆状病毒表达的PCV2bORF2蛋白。
3.根据权利要求1或2的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或包含
PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述PCV2bORF2蛋白包含与
SEQIDNo:1的序列至少94％或优选至少95％相同的序列，或者由与SEQ
IDNo:1的序列至少94％或优选至少95％相同的序列组成。
4.根据权利要求1-3中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或
包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染PCV2是感染
PCV2b亚型(PCV2b)和/或除2b亚型以外PCV2的亚型。
5.根据权利要求1-4中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或
包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染PCV2是感染除
2b亚型以外PCV2的亚型。
6.根据权利要求4的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或包含PCV2b
ORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染PCV2是同时感染(i)PCV2b
和(ii)除2b亚型以外PCV2的亚型。
7.根据权利要求4-6中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或
包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染除2b亚型以外
PCV2的亚型是感染PCV2a亚型(PCV2a)和/或PCV2c亚型(PCV2c)。
8.根据权利要求4-7中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或
包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染除2b亚型以外
PCV2的亚型是感染PCV2a。
9.根据权利要求1-8中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白或

\t包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染PCV2是同时感
染(i)PCV2b和(ii)PCV2a。
10.根据权利要求4-9中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白
或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染PCV2b是感染
PCV2，所述PCV2包含与SEQIDNO:1的序列至少94％或优选至少95％
相同的多肽或者包含多核苷酸，所述多核苷酸包含编码与SEQIDNO:1的
序列至少94％或优选至少95％相同的多肽的序列。
11.根据权利要求7-9中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋白
或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中所述感染PCV2a是感染
PCV2，所述PCV2包含与SEQIDNO:2的序列至少94％或优选至少95％
相同的多肽或者包含多核苷酸，所述多核苷酸包含编码与SEQIDNO:2的
序列至少94％或优选至少95％相同的多肽的序列。
12.根据权利要求1-11中任一项的用于所述用途的PCV2bORF2蛋
白或包含PCV2bORF2蛋白的免疫原性组合物，其中
-所述治疗或预防感...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·海威克，M·A·艾希迈尔，L·A·赫尔南德斯，W·S·约翰逊，C·M·米伦塞勒，E·M·沃恩，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰动物保健公司，
类型：发明
国别省市：美国;US