蛋白酶检测系统技术方案

本发明专利技术公开了细胞内蛋白酶检测系统。在一个实施方案中，该系统包括嵌合蛋白质，其包括共价连接成分：１）至少一种可选地掩蔽信号蛋白质；２）至少一种蛋白酶特异的切割位点；和３）至少一种可检测的氨基酸序列。本发明专利技术有广谱的应用，包括用于细胞和组织内新蛋白酶抑制剂的检测。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般涉及细胞内蛋白酶检测系统。优选的系统包括嵌合底物蛋白质，其包括共价连接成分1)至少一种任选地掩蔽信号蛋白质(optionally mask signal protein)；2)至少一种蛋白酶特异的切割位点；和3)至少一种可检测的氨基酸序列。本专利技术有广谱重要的应用，包括用于筛选以检测阻断一种或多种人类病原体产生的蛋白酶的化合物。
技术介绍
蛋白酶是切割蛋白质特定肽键的酶。在生物组织中，蛋白酶有特异的蛋白水解活性，且其抑制剂参与调节多种生物功能。在多种生物过程中，生物必需的功能可通过导致活化蛋白质形成的蛋白酶对聚蛋白前体的蛋白酶剪切而被活化和调节。实例包括血液凝固、免疫防御过程、蛋白质通过细胞内膜的选择转运、宿主细胞中的病毒增殖等。因此，蛋白酶是特异的蛋白酶抑制剂作为新药开发中的主要靶标。病毒蛋白酶抑制剂是作为新药开发的蛋白酶抑制剂的典型实例。由于病毒蛋白酶参与聚蛋白前体通过蛋白酶剪切的活化，因此蛋白酶是宿主细胞中病毒增殖起始及复制病毒正确衣壳装配的重要成分。蛋白酶抑制剂已被开发以阻断导致获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的HIV的增殖。例如安泼那韦(amprenavi本文档来自技高网...

【技术保护点】
嵌合蛋白质，其包含至少一种有靶向到亚细胞器的运输信号的信号蛋白质和至少一种蛋白酶的蛋白酶剪切位点，将其构建为：（ａ）通过连接蛋白水解位点或通过蛋白水解位点连接信号掩蔽蛋白质至信号蛋白质的Ｎ或Ｃ末端，失活所有信号蛋白质的运输信号，因此 嵌合蛋白质存在于胞质溶胶中；（ｂ）当蛋白酶剪切位点被蛋白酶切割时，至少一种信号蛋白质的运输信号被活化，并导致至少一种包含活化信号蛋白质的片段蛋白质被转运到亚细胞器；和（ｃ）用至少一种荧光蛋白质标记嵌合蛋白质，荧光标记信号在细 胞中的位置和强度分布根据蛋白酶的切割而改变。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄仁焕，金旲宪，李勇直，
申请(专利权)人：阿赫姆生物系统公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]