包含LG12-进化枝蛋白酶变体的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了由LG12-进化枝酶产生的丝氨酸蛋白酶。此外，本发明专利技术提供了包含这些蛋白酶的组合物。在一些实施方案中，本发明专利技术提供了包含这些蛋白酶中的至少一者的清洁组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关专利申请的交叉引用本专利申请要求提交于2013年9月12日的美国临时专利申请序列号61/877,087的优先权，该申请的内容全文以引用方式并入本文。
技术介绍
丝氨酸蛋白酶是一类能裂解蛋白质中的肽键的酶。丝氨酸蛋白酶包含位于活性位点的亲核丝氨酸残基。枯草杆菌蛋白酶是丝氨酸蛋白酶中的一个大家族，虽然它们早已为工业酶领域所知，但仍然需要适用于特定条件和用途的工程化蛋白酶。
技术实现思路
本公开特别提供了LG12-进化枝蛋白酶(包括LG12-进化枝蛋白酶变体)、编码此类酶的核酸、以及与其生产和使用有关的组合物和方法。在一些实施方案中，本专利技术是LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体或其活性片段，该LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体或其活性片段包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰，其中该修饰位于LG12-进化枝酶变体的生产性位置。在一些实施方案中，本专利技术是LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体或其活性片段，该LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体或其活性片段包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰，其中该修饰位于LG12-进化枝酶变体的生产性位置，其中在该生产性位置处测试的修饰中至少50％满足下列标准中的至少一个：a)在该位置处，相对于亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面的最低性能指数(PI)大于或等于0.9：1)选自pH9或pH10下的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10下的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测试中的任一者而言，具有大于或等于1.0的PI；b)在该位置处，相对于亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面的最低性能指数(PI)大于或等于0.8：1)选自pH9或pH10下的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10下的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测试中的任一者而言，具有大于或等于1.2的PI；或者c)在该位置处，相对于亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面的最低性能指数(PI)大于或等于0.5：1)选自pH9或pH10下的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10下的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测试中的任一者而言，具有大于或等于1.5的PI；并且其中该生产性位置选自第27、40、43、78、98、130、131、158、166、182、237、239、242、245和251位，其中LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO:3中示出的芽孢杆菌属(Bacillussp.)LG12sprC枯草杆菌蛋白酶氨基酸序列来编号的。在一些实施方案中，修饰选自：残基27(K,H，N，A，D，E，G，L，P，Q，R，S，T，M)，40(A，I，Q，L，T，W，D，E，H，K，M，N，R，V，Y)，43(N，V，I，A，F，G，H，K，L，M，Q，S，W，Y，D，E)，78(T，C，S，I，K，L，V，A，D，E，F，G，H，R，W)，98(A，Y，V，D，F，K，N，W，H，M，Q，S，T)，130(S，I，R，H，L，N，Q，T，W，E，F，V，Y)，131(G，I，K，L，T，H，N，A，P，R，S，D，E)，158(S，E，G，H，I，L，Q，K，A，D，M，T，V)，166(G，K，W，C，F，I，L，A，D，E，H，M，N，Q，S，T，Y)，182(S，C，Q，P，W，A，H，I，M，R，Y，D，E)，237(K，L，M，T，Y，F，S，D，G，H，R，A，N，Q)，239(P，Y，C，E，F，G，H，I，N，R，S，T，W，A，D，K，L，M，V)，242(T，G，H，L，I，K，N，V，W，A，E，P，Q，S)，245(Q,C,A,F,H,M,N,R,T,W,D,S,Y)和251(K,C,G,H,Y,W,F,L,R,A,D,M,N,S,T,V)，其中LG12-进化枝变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO:3中示出的LG12sprC蛋白酶氨基酸序列来编号的。在一些实施方案中，本专利技术是LG12-进化枝酶变体或其活性片段，该LG12-进化枝酶变体或其活性片段包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰，其中该修饰位于LG12-进化枝酶变体的生产性位置，其中在该生产性位置测试的修饰中至少30％但少于50％满足a、b和c(同上)中所列的标准中的至少一个，并且其中该生产性位置选自第2、9、15、38、45、48、52、59、62、75、97、99、103、117、118、119、123、129、133、145、148、149、156、159、161、181、209、236、240、248、256、267、271和275位。在一些实施方案中，修饰选自：残基2(Q,E，F，K，P，R，S，W，Y)，9(P，Y，H，Q，A，G，I，M，R，S，T，V)，15(K，M，Q，T，G，H，R，V，Y，A)，38(N，H，Y，A，Q，T，D，E，K，S)，45(K，L，D，E，F，Q，R，S，W，A)，48(A，W，D，E，G，H，K，N，Q)，52(S，E，T，V，D，H，L，M，N，Q，R，F)，59(Q，F，M，H，N，W，T，I，V)，62(N，E，I，V，A，F，K，L，P，W)，75(L，A，N，H，K，F，Q，R，W，G)，97(S，D，G，H，L，M，N，A，I)，99(S，A，D，N，Q，R，S，I，K，L，V)，103(T，E，A，Y，G，H，K，N，R，S，D)，117(N，M，Q，H，K，R，E，G，ST，Y)，118(G，T，K，R，Y，D，E，H，Q，S)，119(M，N，V，A，F，H，I，L，Q，S，T)，123(N，I，S，A，D，E，G，H，Q)，129(S，E，I，R，Y，K，Q，A，G，H，D)，133(T，G，H，A，F，L，M，N，Q，V，D，I)，145(R，D，F，G，L，V，M，W，Y，N)，148(V，D，I，L，M，Q，N，G，S)，149(V，A，P，S，E，G，L，N，Q)，156(S，C，E，C，D，H，Q，A，M，K，N)，159(S，C，F，T，M，N，Y，D，E，K，Q)，161(N，F，K，W，M，S，D，E，R，Y)，181(S，T，D，E，Q，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种LG12‑进化枝变体枯草杆菌蛋白酶或其活性片段，所述LG12‑进化枝变体枯草杆菌蛋白酶或其活性片段包含对亲本LG12‑进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.09.12 US 61/877,0871.一种LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶或其活性片段，所述LG12-进化枝变体枯草杆
菌蛋白酶或其活性片段包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰。
2.一种包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯
草杆菌蛋白酶或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶的
生产性位置，所述生产性位置选自第27、40、43、78、98、130、131、158、166、182、237、239、
242、245和251位，其中所述LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通过对应SEQ
IDNO:3中示出的芽孢杆菌属LG12sprC枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列来编号的。
3.一种包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯
草杆菌蛋白酶或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶的
生产性位置，其中在所述生产性位置处测试的所述修饰的至少50％满足下列标准中的至少
一个：
a)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.9的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.0的PI；
b)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.8的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.2的PI；或者
c)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.5的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.5的PI；
并且其中所述生产性位置选自第27、40、43、78、98、130、131、158、166、182、237、239、
242、245和251位，其中所述LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通过对应SEQ
IDNO:3中示出的芽孢杆菌属LG12sprC枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列来编号的。
4.一种包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯
草杆菌蛋白酶或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶的
生产性位置，所述生产性位置选自第2、9、15、38、45、48、52、59、62、75、97、99、103、117、118、
119、123、129、133、145、148、149、156、159、161、181、209、236、240、248、256、267、271和275
位，其中所述LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO:3中示
出的芽孢杆菌属LG12sprC枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列来编号的。
5.一种包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯
草杆菌蛋白酶或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶的
生产性位置，其中在所述生产性位置处测试的所述修饰的至少30％但少于50％满足下列标
准中的至少一个：
a)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.9的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.0的PI；
b)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.8的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.2的PI；或者
c)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.5的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.5的PI；
并且其中所述生产性位置选自第2、9、15、38、45、48、52、59、62、75、97、99、103、117、
118、119、123、129、133、145、148、149、156、159、161、181、209、236、240、248、256、267、271和
275位，其中所述LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO:3
中示出的芽孢杆菌属LG12sprC枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列来编号的。
6.一种包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯
草杆菌蛋白酶或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶的
生产性位置，所述生产性位置选自第1、3、18、19、20、22、24、25、26、28、30、31、44、50、53、55、
57、58、61、67、72、76、77、79、80、85、86、87、89、90、91、93、96、100、101、102、106、107、108、
113、116、121、124、126、127、136、137、140、144、147、150、152、153、160、162、170、172、173、
183、185、187、188、194、213、216、217、218、222、225、228、231、234、235、241、243、244、246、
252、255、265和272位，其中所述LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通过对
应SEQIDNO:3中示出的芽孢杆菌属LG12sprC枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列来编号的。
7.一种包含对亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯
草杆菌蛋白酶或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶的
生产性位置，其中在所述生产性位置处测试的所述修饰的至少15％但少于30％满足下列标
准中的至少一个：
a)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.9的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.0的PI；
b)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.8的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.2的PI；或者
c)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.5的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.5的PI；
并且其中所述生产性位置选自第1、3、18、19、20、22、24、25、26、28、30、31、44、50、53、
55、57、58、61、67、72、76、77、79、80、85、86、87、89、90、91、93、96、100、101、102、106、107、
108、113、116、121、124、126、127、136、137、140、144、147、150、152、153、160、162、170、172、
173、183、185、187、188、194、213、216、217、218、222、225、228、231、234、235、241、243、244、
246、252、255、265和272位，其中所述LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是通
过对应SEQIDNO:3中示出的芽孢杆菌属LG12sprC枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列来编号
的。
8.一种包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶
或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝酶变体的生产性位置，所述生产性位置
选自第4、7、8、12、14、16、17、29、33、42、46、51、56、65、69、73、81、83、84、88、94、104、109、
111、114、120、122、125、128、132、138、141、143、146、151、163、165、167、175、176、195、203、
204、205、206、211、212、215、220、224、227、230、232、238、250、260、262、268、273和274位，其
中所述LG12变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO:3中示出的LG12sprC蛋白酶的氨基酸
序列来编号的。
9.一种包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶
或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝酶变体的生产性位置，其中在所述生产
性位置处测试的修饰的至少一个但少于15％满足下列标准中的至少一个：
a)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.9的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.0的PI；
b)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.8的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.2的PI；或者
c)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.5的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.5的PI；
并且其中所述生产性位置选自第4、7、8、12、14、16、17、29、33、42、46、51、56、65、69、73、
81、83、84、88、94、104、109、111、114、120、122、125、128、132、138、141、143、146、151、163、
165、167、175、176、195、203、204、205、206、211、212、215、220、224、227、230、232、238、250、
260、262、268、273和274位，其中所述LG12变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO:3中示
出的LG12sprC蛋白酶的氨基酸序列来编号的。
10.一种包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶
或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝酶变体的生产性位置，其中在所述生产
性位置处测试的所述修饰的至少60％满足下列标准中的至少一个：
a)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.9的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.0的PI；
b)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.8的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.2的PI；或者
c)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.5的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.5的PI；
并且其中所述修饰选自：残基27(K，H，N，A，D，E，G，L，P，Q，R，S，T，M)，40(A，I，Q，L，T，W，
D，E，H，K，M，N，R，V，Y)，43(N，V，I，A，F，G，H，K，L，M，Q，S，W，Y，D，E)，78(T，C，S，I，K，L，V，A，D，
E，F，G，H，R，W)，98(A，Y，V，D，F，K，N，W，H，M，Q，S，T)，130(S，I，R，H，L，N，Q，T，W，E，F，V，Y)，131
(G，I，K，L，T，H，N，A，P，R，S，D，E)，158(S，E，G，H，I，L，Q，K，A，D，M，T，V)，166(G，K，W，C，F，I，L，
A，D，E，H，M，N，Q，S，T，Y)，182(S，C，Q，P，W，A，H，I，M，R，Y，D，E)，237(K，L，M，T，Y，F，S，D，G，H，
R，A，N，Q)，239(P，Y，C，E，F，G，H，I，N，R，S，T，W，A，D，K，L，M，V)，242(T，G，H，L，I，K，N，V，W，A，
E，P，Q，S)，245(Q，C，A，F，H，M，N，R，T，W，D，S，Y)，和251(K，C，G，H，Y，W，F，L，R，A，D，M，N，S，T，
V)，
其中所述LG12变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO：3中示出的LG12sprC蛋白酶
的氨基酸序列来编号的。
11.一种包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶
或其活性片段，其中所述修饰位于所述LG12-进化枝酶变体的生产性位置，其中在所述生产
性位置处测试的所述修饰的至少30％但少于50％满足下列标准中的至少一个：
a)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.9的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.0的PI；
b)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.8的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.2的PI；或者
c)在所述位置处，相对于所述亲本LG12-进化枝枯草杆菌蛋白酶，在如下方面具有大于
或等于0.5的最低性能指数(PI)：1)选自pH9或pH10的PAS-38微样布清洁和pH6、pH8或pH10
的EMPA-116微样布清洁的至少一种清洁测定；2)对suc-AAPF-pNA的活性；3)蛋白质表达；和
4)选自洗涤剂稳定性和热稳定性的至少一种稳定性测定；此外，就这些测定中的任一者而
言，具有大于或等于1.5的PI；
并且其中所述修饰选自：残基2(Q，E，F，K，P，R，S，W，Y)，9(P，Y，H，Q，A，G，I，M，R，S，T，V)，
15(K，M，Q，T，G，H，R，V，Y，A)，38(N，H，Y，A，Q，T，D，E，K，S)，45(K，L，D，E，F，Q，R，S，W，A)，48(A，
W，D，E，G，H，K，N，Q)，52(S，E，T，V，D，H，L，M，N，Q，R，F)，59(Q，F，M，H，N，W，T，I，V)，62(N，F，I，
V，A，F，K，L，P，W)，75(L，A，N，H，K，F，Q，R，W，G)，97(S，D，G，H，L，M，N，A，I)，99(S，A，D，N，Q，R，
S，I，K，L，V)，103(T，E，A，Y，G，H，K，N，R，S，D)，117(N，M，Q，H，K，R，E，G，S，T，Y)，118(G，T，K，R，
Y，D，E，H，Q，S)，119(M，N，V，A，F，H，I，L，Q，S，T)，123(N，I，S，A，D，E，G，H，Q)，129(S，E，I，R，Y，
K，Q，A，G，H，D)，133(T，G，H，A，F，L，M，N，Q，V，D，I)，145(R，D，F，G，L，V，M，W，Y，N)，148(V，D，I，
L，M，Q，N，G，S)，149(V，A，P，S，E，G，L，N，Q)，156(S，C，E，G，D，H，Q，A，M，K，N)，159(S，C，F，T，M，
N，Y，D，E，K，Q)，161(N，F，K，W，M，S，D，E，R，Y)，181(S，T，D，E，Q，A，H，K，N)，209(T，I，K，M，V，F，
H，W，Y)，236(A，V，F，G，N，C，D，E，Q，S)，240(S，H，Q，F，I，L，P，V，W，M)，248(E，Q，K，L，N，T，W，D，
C，H，M，Y)，256(N，V，A，D，K，M，Q，W，E，P，R)，267(V，H，N，A，F，I，K，S，T，Y)，271(E，D，L，M，Q，H，
K，A，F，W，Y)，和275(Q，L，T，Y，G，H，W，E，N，R)，
其中所述LG12变体的氨基酸位置是通过对应SEQIDNO：3中示出的LG12sprC蛋白酶的
氨基酸序列来编号的。
12.一种包含对亲本LG12-进化枝酶的氨基酸修饰的LG12-进化枝变体枯草杆菌蛋白酶
或其活性片段，其中所述修饰位于所...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·M·巴贝，D·A·埃斯特尔，F·格德盖布，R·R·博特，M·科尔克曼，H·穆尔德，B·F·施密特，K·奥古斯汀，M·阿特瓦尔，A·马克斯，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US