酶检测装置制造方法及图纸

用于检测样品中能够修饰所提供的底物（１０）的酶的存在的酶检测装置（１）。装置（１）包含具有修饰区（１４）的底物，该修饰区对从未修饰状态转变为修饰状态的酶修饰敏感。装置（１）还包含与修饰或未修饰状态下的修饰区（１４）结合的底物识别分子（１６）。当混合时，与酶相比，底物的修饰区（１４）倾向于被底物识别分子（１６）结合。装置还包含与底物识别分子（１７）偶联的可检测标记物（１８）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】酶检测装置 本专利技术涉及酶检测装置，更具体来说，涉及用于检测能够修饰所提供的底物的酶的酶检测装置，该底物在其修饰或未修饰状态下可以被特异性结合分子识别。本专利技术还涉 及能够修饰底物的酶的检测方法。 在许多临床和研究情况下，能够检测样品中具有特定催化活性的酶的存在，是有 用的。这种酶的一个例子是蛋白酶，它通过水解和切割肽键来消化蛋白。因此，被蛋白酶降 解的蛋白被切成两个或多个更小的肽。另一个例子是唾液酸酶，它从较大的糖上切下唾液酸基团。 在US2006/0003394中公开了在样品中检测酶的诊断测试试剂盒。试剂盒含有"反 应复合物"，它们各含有与报告物和特异性结合元件相连的靶配体。靶配体可以被待检测的 酶切开，以释放出报告物。随后将反应复合物与样品的混合物施加到层析介质上。层析介 质含有能够捕获靶配体上的特异性结合元件的第一个检测区，以及能够结合报告物的第二 个检测区。因此，在使用中，样品与反应复合物的混合物被施加到层析介质上，首先流过第 一个检测区，然后流过第二个检测区。靶配体在第一个检测区处被捕获。样品中的任何酶 将报告物从靶配体上切下，切下的报告物被捕获在第二个检测区处，在第一个检测区留下 任何未被切下的报告物仍连接在靶配体上。因此，样品中酶的存在，通过在第二个检测区处 存在报告物(或第一个检测区不存在报告物)来确定。 在US2006/0003394中公开的试剂盒的一个问题是试剂盒可能倾向于给出不准确 的结果，这是因为当混合物沿着层析介质流过时，酶一直是有活性的。当反应复合物固定化 在第一个检测区时，酶不断从靶配体上切下报告物。因此，第一个检测区和第二个检测区处 的信号可倾向于随着时间而变化，反应没有明确的终点。 US2006/0003394的试剂盒的另一个问题是，它只能检测切开耙配体的酶，而不能检测具有其他效应、例如向靶配体添加基团(例如磷酸化或糖基化作用)的酶。 US2006/0003394的试剂盒的另一个问题是，它不能检测必须水解耙配体的末端的酶，例如外切肽酶或外切糖酶的活性，因为需要在末端连接报告物，这将改变末端的化学性质，其程度可能阻止与酶的活性位点的相互作用。 本专利技术力图缓解上述一种或多种问题。 根据本专利技术的一个方面，提供了用于检测样品中能够修饰所提供底物的酶的存在 的酶检测装置，包含 (i)含有修饰区的底物，所述修饰区对从未修饰状态转变为修饰状态的酶修饰敏 感，； (ii)底物识别分子，它能够与修饰或未修饰状态的修饰区特异性结合，底物识别 分子的结合位点使得底物识别分子和酶在混合时竞争与修饰区的结合；以及 (iii)可以与底物识别分子偶联的可检测标记物。 根据本专利技术的另一方面，提供了用于检测样品中能够修饰所提供底物的酶的存在 的酶检测装置，包含 (i)含有修饰区的底物，所述修饰区对从未修饰状态转变为修饰状态的酶修饰敏感，； (ii)底物识别分子，它能够与未修饰状态的修饰区特异性结合，底物识别分子的 结合位点使得当混合时，与酶相比，底物的修饰区倾向于(或竞争性地)被所述底物识别分 子结合；以及 (iii)可以与底物识别分子偶联的可检测标记物。 有利情况下，底物识别分子对底物的亲和性包含相对低的解离速率(kd)。 优选情况下，底物识别分子对底物的亲和性包含相对低的解离速率(kd)和相对高的结合速率GO 。 优选情况下，底物识别分子的解离速率(kd)在10—4. s—1到10—7. s—1之间，更优选在 10—5. s—1到lO—6. s—'之间。 优选情况下，底物识别分子的结合速率(ka)在105. s—1到109. s—1之间，更优选在 107. s—1到108. s—'之间。 有利情况下，底物识别分子与酶相比，具有对底物较低的解离速率(kd)和较高的 结合速率(ka)。 方便的是，底物还含有连接区域，酶检测装置还含有固相支持物，连接区域可以连 接到固相支持物上。 优选情况下，酶检测装置还含有层析介质。 有利情况下，底物还含有可以与层析介质相连的连接区域。 方便的是，层析介质含有固定化在层析介质上或其中并能够与底物的连接区域结 合的第一种捕获识别分子。 优选情况下，层析介质还含有固定化在层析介质上或其中，并且能够与底物识别 分子以及可选的底物的片段结合的第二种捕获识别分子。 有利情况下，第一种捕获识别分子与连接区域和/或第二种捕获识别分子与底物 识别分子各为结合对的两半，其中结合对是抗原与抗体或其特异性抗原结合片段；生物 素与亲和素、链亲和素、中性链亲和素或c即tavidin ;蛋白A与蛋白G ;糖与凝集素；两个互 补的核苷酸序列；效应子与受体分子；激素与激素结合蛋白；酶的辅因子与酶；酶的抑制剂 与酶；纤维素结合结构域与纤维素纤维；固定化的氨基苯硼酸与带有顺式二元醇的分子； 木葡聚糖与纤维素纤维及其类似物、衍生物和片段。 方便的是，底物识别分子是能够与修饰或未修饰状态下的修饰区结合的抗体或其 抗原结合片段，凝集素，核苷酸序列，受体分子，或激素结合蛋白。 或者，底物识别分子是能够结合未修饰生物素的亲和素、链亲和素、中性链亲和素 或c即tavidin。 优选情况下，酶是水解酶，优选为肽酶、脂肪酶、核酸酶、糖酶、磷酸酯酶、硫酸酯 酶、神经氨酸酶、酯酶、DNA酶或RNA酶。 或者，酶是激酶、糖基转移酶、氧化酶、还原酶或转氨酶。 有利情况下，酶检测装置还含有与底物识别分子相连的可检测标记物。 方便的是，可检测标记物与底物识别分子共价连接。 优选情况下，标记物是荧光团、金颗粒、生色团、发光化合物；放射活性化合物；可 见化合物，脂质体或其他含有信号产生物质的囊泡，电活性物质，或酶与其底物的组合。 有利情况下，酶检测装置包含第一和第二种底物，它们各含修饰区，第一种底物的修饰区对第一种酶的修饰敏感，第二种底物的修饰区对第二种酶的修饰敏感。 根据本专利技术的另一方面，提供了能够修饰底物的酶的检测方法，包括下列步骤 (i)提供含有修饰区的底物，该修饰区对从未修饰状态转变为修饰状态的酶修饰敏感，； (ii)提供怀疑含有酶的样品； (iii)提供与未修饰状态或修饰状态下的修饰区特异性结合的底物识别分子，底物识别分子的结合位点使得底物识别分子和酶在混合时竞争与修饰区的结合； (iv)将样品与底物混合，使得至少一些样品中的酶修饰底物；以及 (v)使底物与底物识别分子相接触，并检测底物与底物识别分子之间的相互作用。 根据本专利技术的另一方面，提供了能够修饰底物的酶的检测方法，包括下列步骤 (i)提供含有修饰区的底物，该修饰区对从未修饰状态转变为修饰状态的酶修饰敏感，； (ii)提供怀疑含有酶的样品； (iii)提供与未修饰状态下的修饰区特异性结合的底物识别分子，底物识别分子 的结合位点，使得当混合时，与酶相比，底物的修饰区倾向于(或竞争性地)被所述底物识 别分子结合； (iv)将样品与底物混合，使得至少一些样品中的酶修饰底物；以及 (v)使底物与底物识别分子相接触，并检测底物与底物识别分子之间的相互作用。 有利情况下，底物识别分子对底物的亲和性包含相对低的解离速率(kd)。 优选情况下，底物识别分子对底物的亲和性包含相对低的解离速率(kd)和相对高的结合速率GO 。 优选情况下，底物识本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测样品中能够修饰所提供底物的酶的存在的酶检测装置，包含：（ｉ）含有修饰区的底物，所述修饰区对从未修饰状态转变为修饰状态的酶修饰敏感；（ｉｉ）底物识别分子，其能够与未修饰状态的修饰区特异性结合，底物识别分子的结合位点，使得当混合时，与酶相比，底物的修饰区倾向于被所述底物识别分子结合；以及（ｉｉｉ）能与底物识别分子偶联的可检测标记物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗詹姆士戴维斯，
申请(专利权)人：莫洛迪克有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]