从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒及方法，属于分子生物学领域。本发明专利技术从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，包括：1）偶联了gp37蛋白的羧基化纳米磁珠Eget103；2）样本稀释液；3）样本裂解液；4）核酸清洗液；5）DNA洗脱液6）核酸吸附磁珠。本发明专利技术使用偶联了gp37蛋白的羧基化纳米磁珠Eget103特异性结合大肠杆菌继而对大肠杆菌进行纯化，然后将纯化后的大肠杆菌用磁珠法提取DNA。整个过程无需大肠杆菌的分离纯化培养，直接进行DNA提取；简化实验过程，极大的节约了实验时间。

Kits and methods for the extraction and purification of Escherichia coli DNA from complex samples

The invention discloses a kit and method for extracting and purifying Escherichia coli DNA from a complex sample, which belongs to the field of molecular biology. The kit for extracting and purifying Escherichia coli DNA from complex samples includes: 1) the gp37 carboxylic nano magnetic beads Eget103, 2) sample diluent, 3) sample lysate, 4) nucleic acid cleaning solution, 5) DNA eluent 6, and nucleic acid adsorption magnetic beads. The invention uses carboxyl magnetic nanoparticles Eget103 coupled with gp37 protein to specifically bind Escherichia coli to purify Escherichia coli, and then extract the DNA from the purified E.coli by magnetic beads. The process of isolation and purification of Escherichia coli was not needed in the whole process, and DNA was extracted directly. The experimental process was simplified, and the experiment time was greatly saved.

【技术实现步骤摘要】
从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒及方法
本专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及一种从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒及方法。
技术介绍
大肠埃希菌，又称大肠杆菌（革兰氏阴性短杆菌），是人和动物肠道中的常见栖居菌。根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。T4噬菌体是一类以大肠杆菌为宿主的病毒，宿主专一性很强。gp37蛋白位于T4类噬菌体长尾丝末端，其C端能够识别宿主菌表面受体，引发噬菌体吸附到大肠杆菌表面的过程，是T4类噬菌体识别受体的关键蛋白。复杂样本是指食物，粪便，土壤，呕吐物等样本，这些样本一般都含抑制下游PCR或者NGS检测的抑制剂，如复杂多糖，胆酸盐，脂类和尿酸等。传统从复杂样本（食物，粪便，土壤，呕吐物等）中提取大肠杆菌DNA的方法需要先从样本中分离并纯化培养菌株，再从纯化好的菌株中提取核酸，过程比较复杂，所用时间较长。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，解决现有从复杂样本中提取大肠杆菌DNA的方法过程复杂、所需时间长的问题，本专利技术提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，其特征在于，包括：1）偶联了gp37蛋白的羧基化纳米磁珠Eget103；2）样本稀释液；3）样本裂解液；4）核酸清洗液；5）DNA洗脱液6）核酸吸附磁珠。

【技术特征摘要】
1.一种从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，其特征在于，包括：1）偶联了gp37蛋白的羧基化纳米磁珠Eget103；2）样本稀释液；3）样本裂解液；4）核酸清洗液；5）DNA洗脱液6）核酸吸附磁珠。2.如权利要求1所述从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，其特征在于，步骤1）中偶联了gp37蛋白的羧基纳米磁珠Eget103的制备方法为：a）采用gp37蛋白的大肠杆菌表达系统，可溶性表达gp37蛋白并纯化；b）活化羟基化纳米磁珠：c）gp37蛋白与羟基化纳米磁珠偶联。3.如权利要求2所述从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，其特征在于，步骤c）gp37蛋白与羟基化纳米磁珠偶联的具体过程为：以含有Tween-20的硼酸盐溶液为偶联缓冲液，用所述偶联缓冲液清洗羟基化纳米磁珠；将所述羟基化纳米磁珠、纯化后的gp37蛋白以及偶联缓冲液混合，20-30℃下偶联2-6小时；磁性分离去除上清液，加入PBST溶液重悬磁珠，20-30℃反应30-90min封闭磁珠表面未反应的活化羟基基团；磁性分离上清液，采用PBS或保存溶液洗涤后，置于保存溶液中，4℃保存。4.如权利要求3所述从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，其特征在于，所述偶联缓冲液的pH为8.0-9.0。5.如权利要求1所述从复杂样本中提取并纯化大肠杆菌DNA的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液的组成为：NaCl137mM,KCl2.7mM,Na2HPO44.3mM,KH2PO41.4mM,0.05％Tween-20；所述样本裂解液的组成为：NaCl0.05mM,EDTA5mM,PH=8.0的Tris-HCl20mM,溶菌酶3mg/ml。6.如权利要求1所述从复杂样本中提取并纯化大肠杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：李硕，张通，王义翠，刘奕，
申请(专利权)人：山东凯景生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37