一种重组鸡大肠杆菌外膜蛋白包涵体的纯化及高效复性液对其复性的方法技术

本发明专利技术属于蛋白纯化的技术领域，涉及的是生物医药及生物工程下游蛋白纯化领域，本发明专利技术公开了一种重组鸡大肠杆菌外膜蛋白包涵体的纯化及高效复性液对其复性的方法。本发明专利技术的包涵体蛋白的三步洗涤纯化工艺方法，使菌体蛋白与包涵体得到很好的分离，再通过复性溶液及点滴加样一次复性的工艺方法，使蛋白质的复性率大大提高，同时简化复性工艺及所需设备，从而大大提高目的蛋白的收获率，降低重组鸡大肠杆菌外膜蛋白的生产成本。该重组鸡大肠杆菌外膜蛋白纯化方法简便易行，无需进行过柱处理。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组鸡大肠杆菌外膜蛋白包涵体的纯化及高效复性液对其复性的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)包涵体蛋白的提取：4℃，4000～6000rpm，10～20min，离心收集菌体，PBS洗涤菌体，4℃，6000～8000rpm，10～20min，将菌体超声破碎，功率400瓦，超声5秒,间歇25秒，工作时间20～35分钟，所述菌体为重组鸡大肠杆菌；然后4℃，8000～10000rpm，10～20min高速冷冻离心得到鸡大肠杆菌外膜蛋白包涵体蛋白质；(2)包涵体蛋白质的纯化：首先按质量体积比1：10～1：30将包涵体重悬于第一洗涤液中，所述洗涤液为：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmo...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王连民，刘珂飞，孙珊珊，
申请(专利权)人：天津生机集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12