一种莱鲍迪甙C分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种莱鲍迪甙C分离纯化方法，通过使用合适的工业色谱柱和溶液，并优化工艺步骤，用高效液相色谱检测，结合柱层析分离和重结晶的方法从甜菊甙原料中获得莱鲍迪甙C，成本低更经济，且纯度高，产率高，纯度大于95％，产率大于60％。

A method for the separation and purification of baudein C

The invention discloses a rebaudioside C purification method, through the use of appropriate industrial chromatographic column and solution, and optimize the process steps, using high performance liquid chromatography detection method combined with column chromatography and recrystallization to obtain rebaudioside C from stevioside in raw materials, low cost and more economical. High purity, high yield and purity of more than 95%, more than 60% yield.

【技术实现步骤摘要】
一种莱鲍迪甙C分离纯化方法
本专利技术涉及一种莱鲍迪甙C分离纯化方法。
技术介绍
甜菊糖甙在亚洲作为甜味剂已使用了超过20年。2008年，在北美通过批准其做为食品添加剂。因此，甜菊糖甙以及其有效的纯化方法是具有很高的商业需求的。甜叶菊中主要的甜菊糖甙包括甜菊甙，莱鲍迪甙C，莱鲍迪甙A以及莱鲍迪甙D。莱鲍迪甙D及莱鲍迪甙C只占了其中的一小部分，但是它们具有更纯正的甜味及更独特的应用，因而具有更高的商业价值。现有技术中关于莱鲍迪甙A以及甜菊糖甙的分离纯化方法有很多，对莱鲍迪甙C的关注很少。有研究指出，莱鲍迪甙C虽然苦涩味较重，但却有抗肿瘤、降血压、降血脂、减肥等诸多功效，其潜在应用价值非常有吸引力。因此迫切需要一种能够高纯度、高产率分离和纯化莱鲍迪甙C的方法。
技术实现思路
本专利技术是为了解决现有技术的缺陷，提供一种莱鲍迪甙C分离纯化方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种莱鲍迪甙C分离纯化方法，包括以下步骤：(1)将原料甜菊糖甙溶于3倍量去离子水中，然后浓缩水液至约为原体积的50％，制得样品，(2)将上述样品泵入填有树脂聚合物的工业色谱柱顶部，用水/丙酮或乙腈混合溶液梯度洗脱，所述水与丙酮/乙腈混合溶液的浓度梯度为5％-35％的水/丙酮或乙腈溶液，所述浓度梯度为体积百分比；(3)分段收集从树脂聚合物色谱柱洗脱下来的洗脱溶液，然后分别用高效液相色谱分析检测，待样品中莱鲍迪甙C全部洗脱下来后，停止洗脱，层析柱继续用纯水冲洗，平衡柱子以备再次使用；(4)将步骤(3)中经分析检测后的含有较高纯度莱鲍迪甙C的洗脱溶液通过纳滤膜浓缩至适当体积(固体物含量在15-20％之间)，浓缩液继续用单效真空浓缩器进一步浓缩至浸膏状(比重约1.13-1.15)，浸膏喷雾干燥得莱鲍迪甙C原料干粉。5)将上述干粉溶于含水丙酮中加热至所有固体完全溶解，然后再加入相当于溶液体积的2-3倍的丙酮，将得到的混合溶液在20-30℃中搅拌12h以上，最后得到白色晶体，过滤，干燥得莱鲍迪甙C半成品。(6)将上述半成品加于适量含水甲醇中，然后升温至55-60℃至所有固体完全溶解，随后将溶液温度降至室温静置5小时，将得到的白色晶体滤出。(7)将步骤(6)中得到的白色晶体置于70-80℃下真空干燥，最后用高效液相色谱分析干燥后的晶体含量；所述树脂聚合物为聚苯乙烯/二乙烯苯聚合物。例如罗门哈斯的CG-161m系列树脂或类似树脂。优选地，上述所称将洗脱液浓缩所用的设备为分子量为150的纳滤膜浓缩装置。。优选地，步骤(2)中树脂聚合物的重量是步骤(1)中甜菊甙重量的4-20倍。本专利技术所达到的有益效果：本专利技术的生产方法可从甜菊糖甙原料中获得莱鲍迪甙C，成本低更经济，且纯度高，产率高，纯度大于95％，产率大于60％。本专利技术中使用高效液相色谱分析方法对分离过程始终的产品进行纯度检测，及产物莱鲍迪甙C和甜菊糖甙的确定，高效液相色谱检测设备是由岛津LC-10A系统及岛津SPD-10A多波长检测器组成，柱子为250mm*4.6mmi.d.5μmC18柱，32％乙腈与68％的水组成的等度流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为210nm，甜菊糖甙及莱鲍迪甙C用对照品定量。附图说明图1是本专利技术分离纯化的莱鲍迪甙C高效液相色谱图；图2生产工艺技术路线图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。实施例一(1)将含莱鲍迪甙C15.2％的原料甜菊糖甙50kg加入500L反应釜中，随后加入150L去离子水并搅拌升温至70℃，待固体物完全溶解后，将此溶液从反应釜中放出并泵入单效浓缩器中浓缩至约为原体积的50％，制得样品。(2)将上述样品直接泵入填有树脂聚合物的工业制备层析柱顶部，树脂聚合物的重量是步骤(1)中甜菊甙重量的10倍。用水与丙酮的混合溶液梯度洗脱，所述水与丙酮混合溶液的浓度梯度为10％-35％(体积比)(3)分段收集从树脂聚合物层析柱洗脱下来的洗脱溶液，然后分别用高效液相色谱分析检测，待样品中莱鲍迪甙C全部洗脱下来后，停止洗脱。(4)将步骤(3)中经分析检测后的含有较高纯度莱鲍迪甙C的洗脱溶液通过纳滤膜装置浓缩，待浓缩到约为原体积的20％时止，浓缩液转入单效真空浓缩器进一步浓缩至浸膏状(比重1.13-1.15)，此浸膏进一步用喷雾干燥器喷干得含莱鲍迪甙C35-45％的莱鲍迪甙C生产原料。5)将上述干粉溶于含水丙酮中加热至所有固体完全溶解，然后再加入相当于溶液体积的2-3倍的丙酮，将得到的混合溶液在20-30℃中搅拌12h以上，最后得到白色晶体，过滤，干燥得莱鲍迪甙C半成品。(6)将上述半成品加于适量含水甲醇中，然后升温至55-60℃至所有固体完全溶解，随后将溶液温度降至室温静置5小时，将得到的白色晶体滤出。(7)将步骤(6)中得到的白色晶体置于80℃下真空干燥，最后用高效液相色谱分析干燥后的晶体含量；该晶体即莱鲍迪甙C，纯度为95.3％，重量为4.65kg，产率61％。以上所称树脂聚合物为罗门哈斯Amberlite1600实施例二目标原料：60kg甜菊糖甙，购买所得，其中甜菊甙24％，莱鲍迪甙A27％，莱鲍迪甙C15.5％，余量为杂质。层析柱：高压工业制备层柱，柱子尺寸800*3000mm，填充1000LRohmHaasAmberlite1600。实验步骤：(1)将含莱鲍迪甙C15.5％的原料甜菊糖甙60kg加入500L反应釜中，随后加入180L去离子水并搅拌升温至75℃，待固体物完全溶解后，将此溶液从反应釜中放出并泵入单效浓缩器中浓缩至约为原体积的50％，制得样品。(2)将上述样品直接泵入填有树脂聚合物的工业制备层析柱顶部，树脂聚合物的重量是步骤(1)中甜菊甙重量的8倍。用水与丙酮的混合溶液梯度洗脱，所述水与丙酮混合溶液的浓度梯度为10％-35％(体积比)(3)分段收集从树脂聚合物层析柱洗脱下来的洗脱溶液，然后分别用高效液相色谱分析检测，待样品中莱鲍迪甙C全部洗脱下来后，停止洗脱。(4)将步骤(3)中经分析检测后的含有较高纯度莱鲍迪甙C的洗脱溶液通过纳滤膜装置浓缩，待浓缩到约为原体积的20％时止，浓缩液转入单效真空浓缩器进一步浓缩至浸膏状(比重1.13-1.15)，此浸膏进一步用喷雾干燥器喷干得含莱鲍迪甙C35-45％的莱鲍迪甙C生产原料。(5)将上述干粉溶于含水丙酮中加热至所有固体完全溶解，然后再加入相当于溶液体积的2-3倍的丙酮，将得到的混合溶液在20-30℃中搅拌12h以上，最后得到白色晶体，过滤，干燥得莱鲍迪甙C半成品。(6)将上述半成品加于适量含水甲醇中，然后升温至55-60℃至所有固体完全溶解，随后将溶液温度降至室温静置5小时，将得到的白色晶体滤出。(7)将步骤(6)中得到的白色晶体置于80℃下真空干燥，最后用高效液相色谱分析干燥后的晶体含量；该晶体即莱鲍迪甙C，纯度为95.5％，重量为5.76kg，产率62％。以上分离纯化后的甜菊糖甙和莱鲍迪甙C的高效液相色谱谱图见图1。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种莱鲍迪甙C分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将原料甜菊甙加于三倍量的去离子水中，然后加热至70℃至所有固体完全溶解，然后将得到的溶液浓缩至小体积制得样品，(2)将上述样品泵入填有树脂聚合物的工业色谱柱顶部，用水与丙酮/乙腈混合溶液梯度洗脱，所述水与丙酮/乙腈混合溶液的浓度梯度为5％‑35％的水与丙酮/乙腈溶液，所述浓度梯度为体积％比；(3)分段收集从树脂聚合物色谱柱洗脱下来的洗脱溶液，然后分别用高效液相色谱分析检测，待样品中莱鲍迪甙C全部洗脱下来后，停止洗脱；(4)将步骤(3)中经分析检测后的含有高含量莱鲍迪甙C馏份的洗脱溶液通过纳滤膜浓缩至适当体积(固体物含量在15‑20％之间)，浓缩液用单效真空浓缩器进一步浓缩至浸膏状(比重约1.13‑1.15)，浸膏喷雾干燥得莱鲍迪甙C原料干粉；(5)将上述干粉溶于含水丙酮中加热至所有固体完全溶解，然后再加入相当于溶液体积的2‑3倍的丙酮，将得到的混合溶液在20‑30℃中搅拌12h以上，最后得到白色晶体，过滤，干燥得莱鲍迪甙C半成品；(6)将上述半成品加于适量含水甲醇中，然后升温至55‑60℃至所有固体完全溶解，随后将溶液温度降至室温静置5小时，将得到的白色晶体滤出；(7)将步骤(6)中得到的白色晶体置于70‑80℃下真空干燥，最后用高效液相色谱分析干燥后的晶体含量。...

【技术特征摘要】
1.一种莱鲍迪甙C分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将原料甜菊甙加于三倍量的去离子水中，然后加热至70℃至所有固体完全溶解，然后将得到的溶液浓缩至小体积制得样品，(2)将上述样品泵入填有树脂聚合物的工业色谱柱顶部，用水与丙酮/乙腈混合溶液梯度洗脱，所述水与丙酮/乙腈混合溶液的浓度梯度为5％-35％的水与丙酮/乙腈溶液，所述浓度梯度为体积％比；(3)分段收集从树脂聚合物色谱柱洗脱下来的洗脱溶液，然后分别用高效液相色谱分析检测，待样品中莱鲍迪甙C全部洗脱下来后，停止洗脱；(4)将步骤(3)中经分析检测后的含有高含量莱鲍迪甙C馏份的洗脱溶液通过纳滤膜浓缩至适当体积(固体物含量在15-20％之间)，浓缩液用单效真空浓缩器进一步浓缩至浸膏状(比重约1.13-1.15)，浸膏喷雾干燥得莱鲍迪甙C原料干粉；(5)将上述干粉溶于含水丙酮中加热至所有固体完全溶解，然后再加入相当于溶液体积的2-3倍的丙酮，将得到的混合溶液在20-30℃中搅拌12h以上，最后得到白色晶体，过滤，干燥得莱鲍迪甙C半成品；(6)将上述半成品加于适量含水甲醇中，然后升温至55-60℃至所有...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建，
申请(专利权)人：史迪威生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32