本发明专利技术涉及病毒载体，其包括编码ＨＩＶ多肽的寡核苷酸，更具体地，其中所述病毒是腺病毒。具体而言，此类腺病毒是非人类的灵长类动物腺病毒，诸如猿猴腺病毒，更具体地，黑猩猩腺病毒。具体而言，本发明专利技术涉及腺病毒载体，其包括编码多种不同ＨＩＶ抗原的ＨＩＶ多核苷酸序列，例如两种或三种或者更多种的ＨＩＶ抗原。本发明专利技术进一步涉及制备所述病毒载体的方法，涉及由此方法制备的病毒载体，并涉及所述载体在医药，尤其是在预防性或治疗性疫苗接种方面的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及病毒载体，包括编码HIV多肽的寡核普酸，更具体地， 其中所迷病毒栽体是腺病毒。具体而言，此类腺病毒是非人灵长类动 物腺病毒，诸如猿猴腺病毒(simian adenovirus),更具体地，是黑猩猩 腺病毒。具体而言，本专利技术涉及包括HIV多核苷酸序列的腺病毒栽体， 该序列编码多种不同的HIV抗原，例如，两种或三种或者更多种HIV 抗原。本专利技术进一步涉及制备所述病毒栽体的方法，涉及通过本方法 所制备的病毒栽体，并涉及所述载体在医药，尤其是在预防性或者治 疗性疫苗接种方面的用途。HI V-1是导致获得性免疫缺陷综合征(the acquired immune deficiency syndrome, AIDS)的主要原因，该病症核j人为是世界上的主 要健康问题之一。尽管在世界范围内已进行了广泛的研究，但生产疫 苗的努力至今尚未获得成功。HIV-1是反转录病毒科的一种RNA病毒。HIV基因组编码至少 九种蛋白，其被划分为三个种类主要的结构蛋白Gag、 Pol和Env, 调控蛋白Tat和Rev，以及辅助蛋白(accessory proteins ) Vpu、 Vpr、 Vif和Nef。 HIV基因组显示了所有反转录病毒的5'LTR-gag-pol-env-LTR3'组织方式。腺病毒是一种双链DNA病毒，基因组大小大约36kb，由于其具 有在多种靶组织中获得高效基因转移的能力以及巨大的转基因容量而 被广泛地用于基因转移。按常规，腺病毒的El基因缺失，并用转基 因盒替换，该转基因盒由所选的启动子、感兴趣基因的cDNA序列和 polyA信号组成，从而产生复制缺陷型重组病毒。腺病毒具有典型的二十面体衣壳形态，其包括三种主要的蛋白， 六邻体(hexon)(II)、五邻体基底(penton base)(III)和具圆柄的纤维(IV), 以及大量的其它次要蛋白VI 、 VIII、 IX、 Ilia和IVa2 (Russell W. C. 2000， Gen Virol, 81 :2573-2604)。该病毒的基因组是线性双链DNA, 5'末端 与末端蛋白共价结合，所述5'末端具有反向末端重复序列(inverted terminal repeats, ITRs)。病毒DNA与高碱性蛋白VII以及被命名为.mu小肽紧密结合。另一种蛋白，V,与此DNA-蛋白复合体包装在一起， 并通过蛋白VI提供了一种连接至衣壳的结构链。此病毒同样包含病 毒编码的蛋白酶，其对于加工一些结构蛋白以产生出成熟的传染性病 毒而言是必要的。100种以上不同血清型的腺病毒已被分离出来，其感染不同种类 的哺乳动物，其中51种是人类起源的。此类人类起源的腺病毒实例 为Adl、 Ad2、 Ad4、 Ad5、 Ad6、 Adll、 Ad24、 AcB4、 Ad35。人类的血清型根据一些生物学、化学、免疫学和结构标准已被划分为六个 亚类(A-F)。尽管基于Ad5的栽体已在大量的基因治疗试验中被广泛地使用， 但是由于自然感染而在总体人群中预先存在的免疫性，使得Ad5以及 其它C组腺病毒栽体的使用可能受到限制。Ad5以及其它C组成员容 易成为血清阳性率最高的血清型之一。对现有栽体的免疫性可能由于 在治疗期间暴露于该载体而得以发展。此类对血清阳性栽体的预先存 在的或者发展的免疫性可能会限制基因治疗或者接种疫苗努力的功 效。因此，在寻找能够规避宿主免疫反应的基因递送系统时，可选的 腺病毒血清型构成了非常重要的靶标。可选血清的一种此类范围是非人灵长类动物的腺病毒，尤其是 黑猩猩腺病毒。参见美国专利6，083，716，其描述了两种黑猩猩腺病毒的基因組。已表明黑猩猩("Pan"或"C")腺病毒栽体如同人腺病毒载体一样有 效地诱导对转基因产物的强烈的免疫反应(Fitzgerald et al. J. Immunol. 170:1416)。HIV Tat和Nef蛋白是早期蛋白，即它们是在感染的早期，在缺乏结构蛋白的情况下表达。Nef基因编码一种早期的辅助性HIV蛋白，其已被表明具有若干 种活性。例如，已知Nef蛋白能够引起CD4， HIV受体，从细胞表面 的清除，尽管此功能的生物学重要性还有争议。此外，Nef与T细胞 的信号通路相互作用并诱导了一种活化状态，此状态反过来可以促进 更有效的基因表达。 一些HIV分离物在此区域内具有突变，其致使它 们无法编码功能蛋白并导致其在体内复制和致病过程中严重受损。Gag基因是由全长RNA翻译而来，以产生一种前体多聚蛋白，其随后被剪切成3-5种衣壳蛋白；基质蛋白、衣壳蛋白和核酸结合蛋 白以及蛋白酶。(Fundamental Virology, Fields BN, Knipe DM and Howley M 1996 2. Fields Virology vol 2 1996)。Gag基因产生出55-千道尔顿(kD)的Gag前体蛋白，也被称为p55， 其由未经剪接的病毒mRNA表达。在翻译过程中，p55的N末端被 豆蔻酰化，这引发了其与细胞膜胞质面的结合。膜结合的Gag多聚蛋 白募集了病毒基因组RNA的两个拷贝，以及其它病毒蛋白和细胞蛋 白，这引发了病毒颗粒从感染细胞的表面出芽。出芽后，在病毒成熟 期间p55被病毒编码的蛋白酶(Pol基因的产物)切割为四种更小的蛋 白，被命名为MA (基质matrix )、 CA (衣壳capsid )、 NC (核 壳体nucleocapsid )和p6.(4)。除三种主要的Gag蛋白(pl7， p24 and p9)之外，所有Gag前体都 含有若千个其它区域，其被切割下来并作为各种大小的肽保留在病毒 粒子中。这些蛋白具有不同的作用，例如p2蛋白被提出在调节蛋白 酶活性方面具有作用，并且有助于对蛋白水解加工进行正确的时间选 择。MA多肽来源于p55的N-端，豆蔻酰化末端。大多数MA分子保 持连接于病毒粒子脂双层的内表面，使该病毒颗粒稳定。 一套(subset) MA在病毒粒子更深层的内部被募集，在其中它成为复合物的一部分， 该复合物护送病毒DNA至细胞核。这些MA分子促进了病毒基因组 的核转运，因为MA上的亲细胞核信号被细胞的核输入机器所识别。 此现象使HIV能够感染不发生分裂的细胞，对反转录病毒而言是一种 不寻常的特性。p24(CA)蛋白构成病毒颗粒的圆锥形核心。亲环蛋白A(Cyclophilin A)已被证实与p55的p24区域相互作用，导致其整合入HIV颗粒中。 Gag与亲环蛋白A之间的相互作用是必不可少的，因为通过环孢菌素 A破坏这种相互作用抑制了病毒的复制。Gag的NC区负责特异性地识别所谓HIV包装信号。该包装信号 由定位于病毒RNA 5'末端附近的四个茎环结构组成，并且足以介导将 异源RNA整合进HIV-1病毒粒子中。NC通过由两个锌指基元介导的 相互作用而结合于包装信号。NC同样有助于反转录过程。p6多肽区介导p55 Gag和辅助蛋白Vpr之间的相互作用，导致Vpr被整合入装配中的病毒粒子。p6区同样含有所谓的晚期结构域(late domain)，其是出芽的病毒粒子从感染细胞中有效释放所必需的。Pol基因编码三种具有病毒早期感染所需活性的蛋白，反转录酶 RT、蛋白酶以本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种腺病毒载体，包括编码至少ＨＩＶ抗原ＲＴ、Ｎｅｆ和Ｇａｇ或者它们的免疫原性衍生物或免疫原性片段的一种或多种多核苷酸，所述多核苷酸被如此安排以便使它们按照Ｇａｇ、ＲＴ、Ｎｅｆ的顺序被转录。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：PF埃尔特尔，JP蒂特，CA范维利，
申请(专利权)人：葛兰素集团有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。