ALK7:ACTRIIB异多聚体和其用途制造技术

在某些方面，本公开内容提供了可溶性异聚多肽复合物，其包含ALK7受体的细胞外结构域和ActRIIB的细胞外结构域。在某些方面，这些ALK7:ActRIIB异多聚体可用于改进有需要的患者的代谢参数。在某些方面，这些ALK7:ActRIIB异多聚体可用于在有需要的患者中治疗或预防一种或多种肾相关疾病或病况。

ALK7:ACTRIIB heteroligomers and their uses

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】ALK7:ACTRIIB异多聚体和其用途相关申请的交叉引用本申请要求2015年4月6日提交的美国临时申请系列号62/143,579的优先权的权益。前述申请的公开内容通过引用以其整体结合到本文中。专利技术背景转化生长因子-β(TGF-β)超家族包含各种生长因子，其享有共同的序列元件和结构基序。这些蛋白已知在脊椎动物和无脊椎动物二者中对多种细胞类型发挥生物学作用。超家族的成员在胚胎发育期间在模式形成和组织特化中执行重要的功能，和可影响各种分化过程，包括脂肪生成、肌生成、软骨发生、心脏发生、血细胞生成、神经发生和上皮细胞分化。该家族分成两个概括的系统发生进化枝：更近进化的超家族成员，其包括TGF-β、活化素和nodal，和更远相关的超家族蛋白的进化枝，其包括许多BMP和GDF[Hinck(2012)FEBSLetters586：1860-1870]。TGF-β家族成员具有多样的，通常互补的生物学作用。通过操纵TGF-β家族的成员的活性，通常有可能引起生物体的显著生理学变化。例如，Piedmontese和BelgianBlue牛品种带有GDF8(亦称为肌抑素)基因的功能丢失突变，其导致肌肉质量显著增加[Grobet等(1997)NatGenet.、17(1)：71-4]。此外，在人中，GDF8的失活的等位基因与肌肉质量增加有关，并据报道，与异常优越的力量有关[Schuelke等(2004)NEnglJMed、350：2682-8]。纤维化、肌肉、骨、脂肪、红细胞和其它组织的变化可通过增强或抑制由TGF-β家族的配体介导的细胞内信号传导(例如，SMAD1、2、3、5和/或8)来实现。因此，对调节TGF-β超家族的各种配体的活性的试剂存在需要。专利技术简述如本文所述的，已发现ALK7：ActRIIB异二聚体蛋白复合物是TGF-β超家族的配体的独特拮抗剂，与相应的ActRIIB和ALK7同二聚体比较，显示不同的配体-结合特征/选择性。特别地，与任一同二聚体比较，实例性ALK7：ActRIIB异二聚体显示与活化素AC、活化素C和BMP5的结合增强，保留如ActRIIB同二聚体所观察到的与活化素B的强结合，和显示与GDF11、GDF8、活化素A、BMP10、BMP6、GDF3和BMP9的结合减少。特别地，ALK7：ActRIIB异二聚体显示低至无可观察到的对BMP9的亲和力，但该配体与ActRIIB同二聚体强结合。参见图6。这些结果因此证实与ActRIIB同二聚体比较，ALK7：ActRIIB异二聚体是TGF-β超家族的某些配体的更具选择性的拮抗剂(抑制剂)。因此，在其中这样的选择性拮抗作用是有利的某些应用中，ALK7：ActRIIB异二聚体比ActRIIB同二聚体更有用。实例包括治疗应用，其中需要拮抗活化素B、活化素AC、活化素C和BMP5的一种或多种，伴随对活化素A、BMP10、BMP6、GDF3和BMP9的一种或多种的拮抗作用减少。此外，ALK7：ActRIIB异二聚体显示在肾疾病的小鼠模型中具有治疗作用以及对脂肪细胞的有益分解代谢作用。因此，尽管不希望受限于特定的作用机制，预期ALK7：ActRIIB异多聚体以及其变体，其结合/抑制活化素(例如，活化素A、活化素B、活化素AB、活化素C、活化素E、活化素AC、活化素AE、活化素BC和活化素BE)、GDF8、GDF11、BMP10、BMP6、BMP5、GDF3和/或nodal的至少一种或多种，是用于治疗肾疾病、特别是肾疾病的某些病症例如炎症和纤维化和/或促进对脂肪组织的有益分解代谢作用的有用试剂。此外，预期模拟ALK7：ActRIIB异二聚体的结合/抑制性质的其它拮抗剂(抑制剂)或拮抗剂的组合以及直接或间接拮抗ALK7和/或ActRIIB受体的试剂、直接或间接拮抗ALK7和/或ActRIIB-结合配体的试剂、直接或间接拮抗下游信号传导介质(例如，Smads)的试剂和/或直接或间接拮抗TGFβ超家族共受体(例如，Cripto或Cryptic)的试剂将具有类似的生物学作用。这些拮抗模拟物在文本中统称为“ALK7：ActRIIB拮抗剂”或“ALK7：ActRIIB抑制剂”。因此，本公开内容部分地提供了异多聚体复合物(异多聚体)，其包含至少一个ALK7多肽和至少一个ActRIIB多肽(ALK7：ActRIIB异多聚体)。优选地，ALK7多肽包含ALK7受体的配体-结合结构域，例如，ALK7细胞外结构域的一部分。类似地，ActRIIB多肽通常包含ActRIIB受体的配体-结合结构域，例如，ActRIIB细胞外结构域的一部分。优选地，这样的ALK7和ActRIIB多肽以及其得到的异多聚体是可溶性的。在某些方面，ALK7：ActRIIB异多聚体包含ALK7氨基酸序列，其与以SEQIDNO：9的氨基酸21-28的任一个(例如，氨基酸21、22、23、24、25、26、27或28)开始和以SEQIDNO：9的氨基酸92-113的任一个(例如，氨基酸92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113)结束的多肽具有至少70％同一性。例如，ALK7：ActRIIB异多聚体可包含与SEQIDNO：9的氨基酸28-92具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在其它实施方案中，ALK7：ActRIIB异多聚体可包含ALK7氨基酸序列，其与SEQIDNO：9的氨基酸21-113具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在其它实施方案中，ALK7：ActRIIB异多聚体可包含ALK7氨基酸序列，其与SEQIDNO：10具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在仍其它实施方案中，ALK7：ActRIIB异多聚体可包含ALK7氨基酸序列，其与SEQIDNO：20具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在甚至其它的实施方案中，ALK7：ActRIIB异多聚体可包含ALK7氨基酸序列，其与SEQIDNO：39具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在另外的实施方案中，ALK7：ActRIIB异多聚体可包含ALK7氨基酸序列，其与SEQIDNO：43具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在另外的实施方案中，ALK7：ActRI本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组异多聚体，其包含ALK7多肽和ActRIIB多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.06 US 62/1435791.重组异多聚体，其包含ALK7多肽和ActRIIB多肽。2.权利要求1的异多聚体，其中ALK7多肽包含与以下多肽具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列：a)以SEQIDNO:9的氨基酸21、22、23、24、25、26、27或28的任一个开始，和b)以SEQIDNO:9的氨基酸92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的任一个结束。3.权利要求1的异多聚体，其中ALK7多肽包含与SEQIDNO:9的氨基酸28-92具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。4.权利要求1的异多聚体，其中ALK7多肽包含与SEQIDNO:10具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。5.权利要求1的异多聚体，其中ALK7多肽包含与SEQIDNO:20具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。6.权利要求1的异多聚体，其中ALK7多肽包含与SEQIDNO:39具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。7.权利要求1的异多聚体，其中ALK7多肽包含与SEQIDNO:43或46具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。8.权利要求1-7中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与以下多肽具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列：a)以SEQIDNO:1的氨基酸20、21、22、23、24、25、26、27、28或29的任一个开始，和b)以SEQIDNO:1的氨基酸109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134的任一个结束。9.权利要求1-7中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与SEQIDNO:1的氨基酸29-109具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。10.权利要求1-7中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与SEQIDNO:1的氨基酸25-131具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。11.权利要求8-10中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽在对应于SEQIDNO:1的L79的位置处不包含酸性氨基酸。12.权利要求1-11中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与SEQIDNO:2具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。13.权利要求1-11中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与SEQIDNO:3具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。14.权利要求1-11中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与SEQIDNO:5具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。15.权利要求1-11中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含与SEQIDNO:6具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。16.权利要求1-15中任一项的异多聚体，其中ALK7多肽是还包含异源结构域的融合蛋白。17.权利要求1-16中任一项的异多聚体，其中ActRIIB多肽是还包含异源结构域的融合蛋白。18.权利要求16的异多聚体，其中ALK7多肽包含相互作用对的第一或第二成员。19.权利要求17的异多聚体，其中ActRIIB多肽包含相互作用对的第一或第二成员。20.权利要求16-19中任一项的异多聚体，其中异源结构域包含Fc免疫球蛋白结构域。21.权利要求20的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白结构域包含促进异二聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。22.权利要求20或21的异多聚体，其中免疫球蛋白Fc结构域包含抑制同二聚体形成的一种或多种氨基酸修饰。23.权利要求20-22中任一项的异多聚体，其中异源结构域包含来自IgG免疫球蛋白的Fc免疫球蛋白结构域。24.权利要求23的异多聚体，其中IgG免疫球蛋白选自：IgG1、IgG2和IgG3或IgG4。25.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:23具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。26.权利要求25的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:23的残基134和177的位置处包含带正电荷的氨基酸。27.权利要求26的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在SEQIDNO:23的位置134和177处包含K。28.权利要求25-27中任一项的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:23的残基225的位置处不包含带正电荷的氨基酸。29.权利要求28的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在SEQIDNO:23的位置225处不包含K。30.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:24具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。31.权利要求30的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:24的残基170和187的位置处包含带负电荷的氨基酸。32.权利要求31的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在SEQIDNO:24的位置170和187处包含D。33.权利要求30-32中任一项的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:24的残基225的位置处包含带正电荷的氨基酸。34.权利要求33的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在SEQIDNO:24的位置225处包含K。35.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:25具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。36.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:26具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。37.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:27具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。38.权利要求37的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:27的残基132的位置处包含C，和其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:27的残基144的位置处进一步包含W。39.权利要求37或38的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:27的残基225的位置处不包含带正电荷的氨基酸。40.权利要求39的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在SEQIDNO:27的位置225处不包含K。41.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:28具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。42.权利要求41的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:28的残基127的位置处包含C，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:28的残基144的位置处进一步包含S，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:28的残基146的位置处进一步包含A，和其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:28的残基185的位置处进一步包含V。43.权利要求41或42中任一项的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在对应于SEQIDNO:28的残基225的位置处不包含带正电荷的氨基酸。44.权利要求43的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白在SEQIDNO:28的位置225处不包含K。45.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:29具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。46.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:30具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。47.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:31具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。48.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:32具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。49.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:33具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。50.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:34具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。51.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:35具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。52.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:36具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。53.权利要求23的异多聚体，其中Fc免疫球蛋白包含与SEQIDNO:37具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。54.权利要求23的异多聚体，其中：a)ALK7多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述免疫球蛋白的恒定区包含与SEQIDNO:23具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列；和b)ActRIIB多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述免疫球蛋白的恒定区包含与SEQIDNO:24具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。55.权利要求23的异多聚体，其中：a)ALK7多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述免疫球蛋白的恒定区包含与SEQIDNO:24具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列；和b)ActRIIB多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述免疫球蛋白的恒定区包含与SEQIDNO:23具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。56.权利要求54或55的异多聚体，其中恒定区在对应于SEQIDNO:23的残基134和177的位置处包含带正电荷的氨基酸。57.权利要求56的异多聚体，其中恒定区在SEQIDNO:23的位置134和177处包含K。58.权利要求54-57中任一项的异多聚体，其中恒定区在对应于SEQIDNO:23的残基225的位置处不包含带正电荷的氨基酸。59.权利要求58的异多聚体，其中恒定区在SEQIDNO:23的位置225处不包含K。60.权利要求54-59中任一项的异多聚体，其中恒定区在对应于SEQIDNO:24的残基170和187的位置处包含带负电荷的氨基酸。61.权利要求60的异多聚体，其中恒定区在SEQIDNO:24的位置170和187处包含D。62.权利要求54-61中任一项的异多聚体，其中恒定区在对应于SEQIDNO:24的残基225的位置处包含带正电荷的氨基酸。63.权利要求62的异多聚体，其中恒定区在SEQIDNO:24的位置225处包含K。64.权利要求23的异多聚体，其中：a)ALK7多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述恒定区包含与SEQIDNO:27具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列；和b)ActRIIB多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述恒定区包含与SEQIDNO:28具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。65.权利要求23的异多聚体，其中：a)ALK7多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述恒定区包含与SEQIDNO:28具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列；和b)ActRIIB多肽是还包含免疫球蛋白的恒定区的融合蛋白，所述恒定区包含与SEQIDNO:27具有至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：J克诺普夫，R库马，A格林伯格，DS萨科，RS皮尔萨尔，R卡斯通瓜伊，G李，Y大衮，
申请(专利权)人：阿塞勒隆制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US