一种包含二氢卟吩e6的多聚体白蛋白纳米球及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种多聚体白蛋白纳米球，所述多聚体白蛋白纳米球包括含巯基和/或二硫键的白蛋白分子，所述白蛋白分子之间通过二硫键相互连接，所述多聚体白蛋白纳米球中包载有目标投递物；所述目标投递物包括抗癌药物；所述多聚体白蛋白纳米球的粒径为10～1000nm。该多聚体白蛋白纳米球是一种安全、稳定的生物相容性纳米载体，可以包载药物或者造影剂等目标投递物，且其储存稳定性高，有利于长时间有效、稳定地释放目标投递物；此外，该多聚体白蛋白纳米球的粒径小，且尺寸均一，分散性好；本发明专利技术还提供了该多聚体白蛋白纳米球的制备方法及应用。

【技术实现步骤摘要】
一种包含二氢卟吩e6的多聚体白蛋白纳米球及其制备方法和应用本申请要求于2013年9月27日提交中国专利局的申请号为201310449770.X，其专利技术名称为“一种多聚体白蛋白纳米球及其制备方法和应用”的中国专利申请的优先权，其部分内容通过引用结合在本申请中。
本专利技术涉及生物医药材料领域，具体涉及一种多聚体白蛋白纳米球及其制备方法和应用。
技术介绍
纳米技术的兴起使得基于高分子纳米微粒的药物输送得到了广泛的关注，白蛋白具有可生物降解、无毒、无抗原性等诸多特点，被认为是一个理想的药物载体。而通常单个白蛋白分子的尺寸在几个纳米以内，不适合直接用于载药，超声乳化法和去溶剂法可制得粒径小于1μm的白蛋白纳米球，可用于运载药物，但由于白蛋白分子的水溶性高，该类方法制得的白蛋白纳米球载体的释药性能不易于控制，如何使白蛋白纳米颗粒在水中有良好的稳定性，且在稀释条件下不溶解是目前制备技术上的难点。戊二醛等交联剂常被用来稳定得到的纳米球，但戊二醛会非选择性的结合白蛋白表面的氨基位点，在生物体内会释放出醛类残基，对生物体有着显著毒副作用。因此，有必要提供一种制备安全、稳定性高的白蛋白纳米球的方法。二氢卟吩e6(chlorine6，Ce6)作为第二代光敏剂，具有无毒、肿瘤组织高选择性及非肿瘤组织清除率高等优点，在光照和氧存在下能够产生单线态氧和/或自由基而用于肿瘤的光动力学治疗。但是，二氢卟吩e6不溶于水，无法制成稳定的水溶液体系，即使先用有机溶剂溶解二氢卟吩e6，然后再分散在水溶液中，二氢卟吩e6也是以悬浊液形式存在，很难被细胞有效地摄取；而且，有机溶剂本身对细胞也存在一定的毒性。因此，如何提高Ce6的亲水性，使Ce6快速、有效地进入细胞以提高光动力学治疗的疗效是目前研究的热点。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种多聚体白蛋白纳米球，该多聚体白蛋白纳米球包括含巯基和/或二硫键的白蛋白分子，所述白蛋白分子之间通过二硫键相互连接，在稀释条件下有较高的稳定性；此外，该多聚体白蛋白纳米球的粒径为10～1000nm，且其尺寸均一，分散性好，是运载药物或造影剂等目标投递物的良好载体，有利于在患者体内长时间有效、安全、稳定地释放投递物；本专利技术还提供了一种多聚体白蛋白纳米球的制备方法和应用。第一方面，本专利技术提供了一种多聚体白蛋白纳米球，所述多聚体白蛋白纳米球包括含巯基和/或二硫键的白蛋白分子，所述白蛋白分子之间通过二硫键相互连接，所述多聚体白蛋白纳米球的粒径为10～1000nm。优选地，所述含巯基和/或二硫键的白蛋白分子为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、猪血清白蛋白、重组血清白蛋白和血红蛋白中的至少一种。优选地，所述多聚体白蛋白纳米球中包载有目标投递物。进一步优选地，所述目标投递物为抗癌药物和造影剂中的至少一种。进一步优选地，所述抗癌药物为铂及铂的配合物、5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4,10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R,3’S)-N-苯甲酰-3-苯基异丝氨酸酯](紫杉醇)、(7S：9S)-9-羟乙酰基-4-甲氧基-7,8,9,10-四氢-6,7,9,11-四羟基-7-0-(2’,3’,6’,-三去氧-3’-氯基-a-1-来苏已吡喃基)-5,12-萘二酮(阿霉素)、(E,E)-1,7-双(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(姜黄素)、1,3,5,8-四甲基-2,4-二(a-羟乙基)卟酚-6,7-二丙酸(血卟啉)、4-乙基-4，12-二氧-4-羟-1H-吡喃(3'，4'，6，7)吡吲哚(1，2-6)喹啉-3，14-二酮(喜树碱)、(2S-反式)-18-羧基-20-(羧甲基)-13-乙基-2,3-二氢3,7,12,17-四甲基-8-乙烯基-21H,23H-卟吩-2-丙酸(二氢卟吩e6)、IR700碘化物和11-氯-1,1'-二正丙基-3,3,3',3'-四甲基-10,12-三亚甲基吲哚三碳花青碘盐(IR780)中的至少一种。进一步优选地，所述造影剂为2,7-双[1,3-二氢-1,1-二甲基-3-(4-磺丁基)-1,3,5-庚三烯单钠盐(吲哚青绿)、对-[(2,4-二氨基喋啶-6)-N-甲基甲氨基]苯甲酰谷氨酸(甲氨蝶呤)、3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪-5-翁氯化物(美蓝)、6,6'-[[3,3'-二甲基(1,1'-二苯基)-4,4'-二基]双(偶氮基)]双(4-氨基-5-羟基-1,3-萘二磺酸)四钠盐(伊文思蓝)、2-((4-二乙氨基)苯)(4-(二乙氨基)环己烷-2,5-二烯)甲烷)苯基-1,4-二磺酸盐(异硫蓝)、4,4'-双(二乙氨基)三苯脱水甲醇-2'',4''-二磺酸单钠(专利蓝)和金属纳米粒子中的至少一种。由于白蛋白单体分子易溶性，物理方法团聚的白蛋白纳米球容易解体，纳米球中包载的药物很容易被过早地释放，不利于药物等目标投递物在人体循环系统内的运输，即物理方法团聚的白蛋白纳米球载体的释药性能的可控性不高，而本专利技术提供的多聚体白蛋白纳米球由多个白蛋白单体分子通过分子间的二硫键相互连接，这种化学键稳定的多聚体结构比通过物理方法聚集的蛋白纳米球更稳定，不易被人体体液稀释、溶解而解体，有助于保证靶向部位足够的给药浓度。在生物医学应用中，纳米粒子药物的粒径比较重要，不同的粒径代谢路径也不一样，小粒径通过肾代谢，大粒径通过肝代谢；其中，20～200nm的粒子对肿瘤有被动靶向作用，在此粒径范围内的纳米粒子药物可以降低药物本身的毒副作用，同时也增加了疗效。此外，纳米粒子药物的分散性是比较重要的，分散性不好，粒子容易团聚，甚至沉淀，导致应用较为困难，特别是其生物医学应用，分散性尤其重要。本专利技术提供的多聚体白蛋白纳米球粒径小且尺寸均一，分散性好，用该纳米球包裹投递药物在生物医学应用有较大优势，有利于纳米球通过EPR效应进入肿瘤内部并通过gp60通路靶向到肿瘤细胞。另外，一般自由蛋白质分子的分子量大多小于60KDa，本专利技术提供的多聚体白蛋白纳米球由多个白蛋白单体分子聚集而成，分子量高于60KDa，不易被肾小球滤过(由于肾小球的滤过作用下，一般分子量小于60KDa的蛋白质分子会在代谢的过程中被清除掉，而不能达到靶向位置)，能提高药物等目标投递物的投递效率。第二方面，本专利技术提供了一种多聚体白蛋白纳米球的制备方法，包括以下步骤：(1)制备体积质量浓度为0.01～300mg/mL的含巯基和/或二硫键的白蛋白水溶液，并调节所述白蛋白水溶液的pH值为7～12；(2)向步骤(1)所得的所述pH值为7～12的白蛋白水溶液中加入带巯基的还原剂得反应液，然后在0～60℃下轻轻摇动反应0.05～12小时，在所述反应液中，所述带巯基的还原剂的摩尔数为白蛋白摩尔数的10～5000倍；(3)将步骤(2)反应后的溶液在0～60℃的条件下进行超声，所述超声的功率范围为1～100KW，同时在搅拌的条件下在所述进行超声的溶液中以0.01～1000ml/s的速度加入有机溶剂得到微乳溶液，所述微乳溶液在0～60℃的条件下反应5～240min后，静置分层，然后去除有机相，得到含多聚体白蛋白纳米球的悬浊液，其中，所述有机溶剂加入的体积为所述步骤(2)反应后的溶液的1～100倍；(4)将步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多聚体白蛋白纳米球，其特征在于，所述多聚体白蛋白纳米球包括含巯基和/或二硫键的白蛋白分子，所述白蛋白分子之间通过二硫键相互连接，所述多聚体白蛋白纳米球中包载有目标投递物；所述目标投递物包括抗癌药物；所述抗癌药物包括(2S‑反式)‑18‑羧基‑20‑(羧甲基)‑13‑乙基‑2,3‑二氢3,7,12,17‑四甲基‑8‑乙烯基‑21H,23H‑卟吩‑2‑丙酸；所述多聚体白蛋白纳米球的粒径为10～1000nm。

【技术特征摘要】
2013.09.27 CN 201310449770.X1.一种多聚体白蛋白纳米球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备体积质量浓度为0.01～300mg/mL的含巯基和/或二硫键的白蛋白水溶液，并调节所述白蛋白水溶液的pH值为7～12；其中，所述白蛋白水溶液中含有目标投递物；所述目标投递物包括抗癌药物；所述抗癌药物包括(2S-反式)-18-羧基-20-(羧甲基)-13-乙基-2,3-二氢3,7,12,17-四甲基-8-乙烯基-21H,23H-卟吩-2-丙酸；(2)向步骤(1)所得的所述pH值为7～12的白蛋白水溶液中加入带巯基的还原剂得反应液，然后在0～60℃下轻轻摇动反应0.05～12小时，在所述反应液中，所述带巯基的还原剂的摩尔数为白蛋白摩尔数的10～5000倍；(3)将步骤(2)反应后的溶液在0～60℃的条件下进行超声，所述超声的功率范围为1～100KW，同时在搅拌的条件下在所述进行超声的溶液中以50～1000mL/s的速度加入有机溶剂得到微乳溶液，所述微乳溶液在0～60℃的条件下反应5～240min后，静置分层，然后去除有机相，得到含多聚体白蛋白纳米球的悬浊液，其中，所述有机溶剂加入的体积为所述步骤(2)反应后的溶液的1～100倍；(4)将步骤(3)所得的含多聚体白蛋白纳米球的悬浊液在0～60℃以及pH值为9～12的条件下进行透析，得到多聚体白蛋白纳米球溶液；(5)将步骤(4)所得的多聚体白蛋白纳米球溶液进行干燥脱水处理，得到多聚体白蛋白纳米球，所述多聚体白蛋白纳米球包括含巯基和/或二硫键的白蛋白分子，所述白蛋白分子之间通过二硫键相互连接，其中，所述多聚体白蛋白纳米球中包载有目标投递物；所述目标投递物包括抗癌药物；所述抗癌药物包括(2S-反式)-18-羧基-20-(羧甲基)-13-乙基-2,3-二氢3,7,12,17-四甲基-8-乙烯基-21H,23H-卟吩-2-丙酸；所述多聚体白蛋白纳米球的...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡林涛，盛宗海，胡德红，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44