CD44v6特异性的抗体制造技术

本发明专利技术属于肿瘤学领域。本发明专利技术是有关具有特示序列的抗体，其对ＣＤ４４基因的变体外显子ｖ６所编码的表位具有特异性，以及有关该抗体的衍生物。本发明专利技术也提出编码该抗体蛋白质的核酸分子。本发明专利技术进一步是有关制备该抗体蛋白质的方法。本发明专利技术也提出含有该抗体蛋白质的药物组合物。本发明专利技术进一步是有关制成药物以治疗癌症之用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肿瘤学领域。本专利技术是有关具特示序列的抗体，其与为CD44基因变体外显子v6所编码的表位具特异性，以及有关该抗体的衍生物。本专利技术也提出编码该抗体蛋白质的核酸分子。本专利技术进一步是有关制备该抗体蛋白质的方法。本专利技术也提出含有该抗体蛋白质的药物组合物。本专利技术再者是有关制成药物以治疗癌症的用法。
技术介绍
近年已示出，为引起所谓非转移性大鼠胰腺癌细胞株以及非转移性大鼠纤维肉瘤细胞株自主转移行为，表面糖蛋白CD44变体的表达是必要且足够的。(Gunthert et al.，1991)。而最小的CD44同型，标准型CD44s(或CD44std)，广泛表达在包括上皮细胞的不同组织中，某些CD44剪接变体(CD44v，CD44var)仅在某一亚群上皮细胞上表达。CD44变体由另外的剪接而产生，其方式使得10个外显子的序列(v1-v10)在CD44s中完全切除，但可出现在不同组合下较大的变体中(Screation et al.，1992；Tolg et al.，1993；Hofmann et al.，1991)。氨基酸序列有异的变体，在蛋白质细胞外部分的某些位置上嵌入。此变体在各种人类肿瘤细胞以及人类肿瘤组织中可测及。如此，CD44变体的表达近来已在结肠直肠致癌原理的过程中被研究(Heider etal.，1993a)。CD44变体的表达在正常人类结肠上皮中不存在，而在腺窝增殖细胞中仅可测及弱的表达。在肿瘤进展的较晚阶段，如在腺癌，所有的恶性细胞均会表达出CD44变体。变体CD44高水平的组织表达也在来势汹汹的非-霍奇金氏淋巴瘤中出现(Koopman et al.，1993)。外显子v6尤其在转移散布的过程中似乎扮演特殊角色。(Rudy et al.，1993)。在动物模型中，抗v6特异表位的抗体可预防转移细胞的固定及转移物的长成(Seiter et al.，1993)。在结肠癌中，v6表达和肿瘤进展相互有关(Wielenga et al.，1993)。在胃癌中，v6表达是一个重要的诊断靶标，可将肠型肿瘤与扩散型区分出来(Heider et al.，1993b)。在后二刊物中，v6表达是利用抗v6特异表位的抗体所决定。因CD44v6已示出是一种与肿瘤有关的抗原，在人类肿瘤及正常组织中有利地表达(Herder et al.，1995；Heider et al.，1996)，因此可应用于以抗体-为基础的诊断及治疗方法上(Heider et al.，1996；WO 95/33771；WO97/21104)。当利用非人类抗体应用于人体时会有一个严重问题出现，即其会十分快速地生成人类抗-非-人类反应，可减低抗体在病人的效力，及破坏接续的给药。为克服此问题，在技术中已发展出“人源化”非-人类抗体的观念。在第一个途径中，已构筑非-人类/人类嵌合抗体，尝试来人源化非人类抗体，其中非-人类可变区连接至人类恒定区(Boulianne G.L.，HozumiN.and Shulman，M.J.(1984)Production of functional chimeric mouse/humanantibody Nature 312643)。如此生成的嵌合抗体保有原先非-人类抗体的结合特异性及亲和力。然而，嵌合抗体，虽然显著优于小鼠抗体，仍可在人类中诱生出抗-嵌合的反应(LoBuglio A.F.，Wheeler R.H.，Trang J.，HaynesA.，Rogers K.，Harvey E.B.，Sun L.，Ghrayeb J.and Khazaeli M.B.(1989)Mouse/human chimeric monoclonal antibody in manKinetics andImmune response.Proc.Natl.Acad.Sci.864220)。此途径由进一步减少非-人类序列的量而得到精练，即将来自非-人类可变区的互补性决定区(CDRs)嫁接至人类可变区，再将这些“改造的人类”可变区连接至人类恒定区(Riechmann L.，Clark M.，Waldmann H.and Winter G.(1988)Reshaping humanantibodies for therapy.Nature 332323)。CDR-嫁接的或改造的人类抗体含极少或并无蛋白质序列可被鉴定于衍生自鼠抗体。虽然由CDR-嫁接而人源化的抗体仍可诱生某些免疫反应，如抗-同种异型(anti-allotype)或抗-独特型(anti-idiotypic)反应(即使使用天然的人类抗体也可观察到这些反应)，CDR-嫁接的抗体免疫原性显著低于小鼠抗体，因此对病人可有更为延长的治疗。然而，很快地发觉单独CDR-嫁接时不会生成有足够结合亲和力的抗体。CDR-嫁接抗体和其亲代非-人类抗体比较下，有相当不佳的结合特性，此乃因为除CDR′s内的氨基酸之外还有更多的氨基酸涉及于抗原结合之故。因此，结合亲和力不佳的CDR-嫁接抗体，在治疗上无法视为有用的。因此，尝试生成组合有CDR-嫁接抗体低免疫原性及非-人类亲代抗体良好结合特性的抗体。因此除了CDR-嫁接外，也发展出一种概念，即在人源化框架区中的一至数个氨基酸必须保持像啮齿类供者来源残基一般，以保有结合亲和力(Queen et al.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.8610029-10033)。因为高度潜在利用价值，此抗体可应用于诊断及治疗，因此需有具改进特性的抗体，其适用于人类癌症的治疗。本专利技术的基本问题是提供与已知CD44v6特异抗体相比有显著更佳特性的抗体。专利技术概述以上技术问题，可由权利要求书及说明书中鉴定的具体实施方案予以解决。由本专利技术权利要求书及说明书，可克服技术中上述的缺点。为了解决上述问题，本专利技术者设计及产生一种CD44v6特异的人源化抗体，称为BIWA8，其有CDR-嫁接及框架突变，且有低免疫原性组合以高亲和力。然而，本专利技术者可生成具有甚至更超级治疗利用价值的抗体，称为BIWA4。虽然和BIWA8比较下，此者有较差的结合亲和力，当其于活体内给药时可令人惊讶的显示较佳的生物分布及肿瘤吸收。本专利技术属于肿瘤学领域。本专利技术是有关具特示序列的抗体，其与由CD44基因变体外显子v6所编码的表位具特异性，以及有关于该抗体的衍生物。本专利技术也提供编码该抗体蛋白质的核酸分子。本专利技术进一步是有关制备该抗体蛋白质的方法。本专利技术也提供含有该抗体蛋白质的药物组合物。本专利技术进一步是有关制成药物治疗癌症的用法。附图简述(也见实施例1)附图说明图1在竞争性细胞ELISA中测试的相对结合亲和力的评估。IC50cMAb及hMAbs的浓度，此时mMAb BIWA1结合至经粘附的A431细胞减少50％。图中也示出相对于BIWA2的IC50值。图2HNX-OE异种移植-小鼠，在3或4天p.i.下，共注射的125I-及131I-标记的CD44v6-特异性MAbs(10微居里，50微克)的生物分布。三组小鼠，或接受(A)131I-U36(黑线)及125I-BIWA1(阴影)(n＝5)，(B)131I-BIWA4(黑线)及125I-BIWA2(阴影)(n＝6)或接受(C)131I-BIWA4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或其化学衍生物，该抗体分子含有如ＳＥＱＩＤＮｏ．１所定义的氨基酸序列重链的可变区。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：冈瑟阿道夫，埃林伯格奥斯特曼，埃里克帕特泽尔特，马利斯斯普罗尔，卡尔海因茨海德，约翰J米格利塔，奥古斯蒂纽斯AMS范唐根，
申请(专利权)人：贝林格尔英格海姆国际有限公司，贝林格尔英格海姆药物公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]