衍生自ＬＬ－３７的毒素的肽抑制剂制造技术

本发明专利技术涉及与毒素、尤其是细菌毒素如脂多糖或脂磷壁酸质具有亲和性的一组肽化合物。这些化合物可抑制或中和毒素。另外，本发明专利技术涉及这些化合物作为治疗剂或诊断剂的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与毒素、尤其是真菌和细菌毒素如脂多糖(LPS)或脂磷壁酸质(LTA)具有亲和性并可以抑制或中和这类毒素的化合物。另外，本专利技术涉及制备这些化合物的方法、其治疗和诊断应用、包含所述化合物的组合物、编码它们的遗传物质及其给药方法。
技术介绍
现代药物治疗在对抗微生物感染尤其是细菌感染方面已经获得了极大的成功，感染是直至上个世纪中叶导致未成年人死亡的主要因素之一。然而，近年来由于细菌抗性的稳步提高而越来越关注于高效抗生素的广泛应用。事实上，在过去的25年里，抗生素抗性—尤其是对广谱抗生素化合物的多重抗性—在检测的每个细菌菌种中实际上均增高。目前确信不受普通的抗性机制影响的最先进类型的抗细菌剂是其应用看起来是选择多重药物抗性突变体的化合物。基于这种进展，专家们建议与过去相比在农业和人体医药学方面使用抗生素应该更加限制。例如，最小的感染—尤其是甚至典型不是由细菌导致的那些病症如普通感冒—不应该用抗生素治疗，抗生素应该用于更严重的病症。另外，需要揭示新的化合物以治疗细菌感染，所述新的化合物具有完全不同类型的药物学活性，优选具有不依赖于抗普通抗生素的细菌抗性的一些活性。其中已经论述了抗生素的广泛应用的病症之一是急性形式和慢性形式中耳炎。已经示出渗出性中耳炎(OME)即特征在于中耳内存在液体而无急性感染症状的患者数在对早期急性中耳炎(AOM)进行抗生素治疗后显著增加，提示抗生素自身对OME有影响(Lim et al.，Laryngoscope 92，278-286，1982)。据信抗生素如青霉素干扰局部免疫应答的产生，如干扰在中耳内局部IgM的产生(Howie et al.，Ann.Otol.Rhinol.Laryngol.85 Suppl.25，18-19，1976)。抗生素治疗的另一个缺点是细菌被杀死，但其毒素仍具有活性。已经表明为了治疗细菌或真菌感染引起的这些和其它病症，使用不杀死微生物或细菌自身但中和其毒素并使得自然宿主防御机制控制感染扩散的化合物可能是有利的(Nell，The Role of Endotoxin in thePathogenesis of Otitis Media With Effusion，PhD Thesis，Leiden，1999)。同时，这个策略支持受损的粘膜功能迅速恢复。参与许多感染性病症，如耳炎的微生物毒素如真菌毒素尤其是细菌毒素的一个主要作用是是由内毒素引起的，内毒素是在革兰氏阴性菌的细胞壁中发现的一组脂多糖(LPS)，其由与高毒性的脂质部分脂质A(lipid A)缀合的多糖组成。现有的一种治疗OME的治疗方案是给予中和内毒素或LPS的化合物(Nell，如前)。现在已知许多能中和内毒素或LPS的化合物。例如，已经揭示了一些抗内毒素抗体，如HA-1A和E5，分别为人和小鼠单克隆IgM抗体。这些抗体已经示出改善患有一些严重病症如败血症性休克的患者的生存率(Ziegler et al.，New Engl.J.Med.324，429-436，1991)。然而，其活性和特异性不令人满意。抗内毒素的另一组活性物质衍生自称为增加细菌通透性的蛋白质(bacterial permeability-increasing protein，BPI)的人内源性蛋白质，其贮存在嗜中性粒细胞的嗜天青颗粒内(Gazzano-Santoro et al.，Infection and Immunity 6011，4754-4761，1992)。BPI是一种强阳离子蛋白，不仅中和游离的内毒素，还通过增加细菌细胞外膜的通透性而抑制或杀死细菌细胞。BPI确实是一种强力的天然抗生素，通过LPS和一些其它触发剂(trigger)包括肿瘤坏死因子(TNF)的存在而诱导。然而，其大部分活性与合成其的免疫细胞即多形核巨噬细胞相关。已经揭示了衍生自BPI的一些重组蛋白质，如rBPI23(Kohn et al.，1993)和rBPI21(Horwitz et al.，1996)，它们在很大程度上代表分子量分别为23和21kDa的BPI的N末端部分。BPI和BPI衍生的化合物在OME治疗中的应用在例如WO-A-00/71149中描述。具有抗微生物活性的天然化合物的另一家族是cathelicidins，这是由呼吸道上皮细胞、尘细胞及其它组织产生的一类肽。在其天然形式中，这些化合物是线性的、α-螺旋状、不含半胱氨酸的肽或蛋白质。Cathelicidins是阳离子性的并包含一个高度保守的信号序列和前区域(pro-region)cathelin。然而，其编码成熟肽的C末端结构域显示出很大的异质性。这些肽可具有12-80个氨基酸。最著名的人cathelicidin是一种18kDa的阳离子抗微生物蛋白CAP18。CAP18的37个C末端氨基酸，即肽LL-37代表一个负责对LPS高度亲和性和中和能力的结构域(Sawa et al.，Antimicr.AgentsChemother.4212，3269-3275，1998)。已经揭示并测试了衍生自CAP18或LL-37的一些截短的肽，如在Sawa(Sawa et al.，如前)、Gutsmann(Gutsmann et al.，Biophys.J.80，2935-2945，2001)及美国专利No.6,040，291及其欧洲同族专利申请EP-A-0 955 312中所论述的那些。另外，可参见Nagaoka Isao等的Clinical and DiagnosticLaboratory Immunology 9(5)(2002)972-982及Kirikae等的Infectionand Immunity 66(5)(1998)，1861-1868的文章。Nagaoka等描述了LL-37的氨基酸序列及衍生自其中的18聚体(18-mer)K15-V32，而Kirikae等着重于CAP-18衍生的专利的数量。因此现有
描述了天然氨基酸序列是保护的衍生自LL-37的截短的肽，尤其是包含氨基酸序列KEFKRIVQRIKDFLRNLV的这类肽。通常，由于一些原因优选相对小的肽如CAP18而不是蛋白质作为治疗化合物的先导候选物(lead candidate)。首先，它们可以更容易优化、调试并修饰以保留或增加其希望的活性和特异性。其次，它们更易于获得或合成并因此更易得到。第三，它们更易于配制和输送，因为蛋白质通常不稳定并且在经非胃肠外给予后无生物利用性。专利技术目的尽管现有
取得了这些成就，但仍需要另外的肽和肽化合物，其具有LPS和LTA中和活性并可以作为治疗细菌诱导的疾病和病症如耳炎的药剂或者用来开发新药剂的先导物。另外，目前持续需要没有或非常少的不希望的炎症活性的这类化合物，不希望的炎症活性例如为刺激细胞因子产生、T细胞增殖、激活胞外信号相关激酶(extracellular signal-related kinase，ERK)或者嗜中性粒细胞的趋化，所有这些均是目前已知的CAP18衍生肽的活性谱的一部分。本专利技术的主要目的之一是提供新的化合物，其具有对微生物毒素、尤其是真菌和细菌毒素如脂多糖(LPS)和脂磷壁酸质(LTA)的亲和性和中和能力，但其同时具有降低的炎症活性。本专利技术的另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与细菌和真菌毒素、尤其是与脂多糖（ＬＰＳ）或脂磷壁酸质（ＬＴＡ）有亲和性的肽化合物，其包含氨基酸序列Ｘ↓［１］ＫＥＦＸ↓［２］ＲＩＶＸ↓［３］ＲＩＫＸ↓［４］ＦＬＲＸ↓［５］ＬＶＸ↓［６］，其中Ｘ↓［１］代表Ｎ末端部分；Ｘ↓［２］是Ｋ或Ｅ；Ｘ↓［３］是Ｑ或Ｅ；Ｘ↓［４］是Ｄ或Ｒ；Ｘ↓［５］是Ｎ或Ｅ；Ｘ↓［６］代表Ｃ末端部分；其中核心序列的一或多个氨基酸任选地被衍生化；其中Ｎ末端部分被乙酰化和／或Ｃ末端部分被酰胺化和／或所述氨基酸序列与天然氨基酸序列Ｘ↓［１］ＫＥＦＫＲＩＶＱＲＩＫＤＦＬＲＮＬＶＸ↓［６］不同。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰内斯雅各布斯格罗特，扬沃特德里杰夫豪特，
申请(专利权)人：莱顿教学医院，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]