一种离心分离免疫层析检测方法及装置制造方法及图纸

本发明专利技术公开了本发明专利技术提供一种离心分离免疫层析检测方法，所述方法是以在现有的免疫层析技术基础上采用离心装置驱动液相在固相检测膜中流动为特征，可用于胶体金属免疫层析检测方法、荧光免疫层析检测方法和化学发光免疫层析检测方法。本发明专利技术具有灵敏度高、检测时间短、使用便捷、稳定性高、便于储存的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种离心分离免疫层析检测方法及装置
本专利技术涉及一种离心分离检测方法及装置，属于免疫检测

技术介绍
免疫学检测技术是应用免疫学原理设计的测定抗原、抗体、免疫细胞及化学成分等的实验手段，广泛用于来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。常用的有免疫浊度技术、固相酶免疫测定技术、化学发光检测技术、免疫荧光标记技术、流式细胞术、胶体金技术等。免疫浊度技术，也称免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位，用于定量检测，但检测灵敏度低，不适合于微量检测。固相酶免疫测定技术基于抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，结合在固相载体表面的抗原或抗体保持其免疫学活性，抗原或抗体的酶结合物既保留其免疫学活性，又保留酶的活性，在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，具有灵敏度高、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点，但检测反应时间长限制了其使用。免疫化学发光检测技术是一种高灵敏的微量及痕量分析技术，具有操作方便、灵敏度高、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点，广泛地应用于环境、临床、药物分析、食品和工业分析中，也是基于抗原或抗体的固相分离手段及抗原或抗体的发光试剂标记技术，但检测反应时间长、检测试剂需要冷藏保存和运输及对检测设备的要求高影响其使用。免疫荧光标记技术、流式细胞术、胶体金技术也是常用的检测技术被广泛使用，但均有其相应的不足，检测反应时间长或灵敏度、准确性和稳定性欠缺是普遍存在的不足。高灵敏度、快速、便捷、小型化、全定量、自动化是目前临床免疫检测技术产品的发展趋势，但现有的都无法同时实现上述功能。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种离心分离免疫层析检测方法及装置。本专利技术具有灵敏度高、检测时间短、使用便捷、稳定性高、便于储存的特点。本专利技术提供一种离心分离免疫层析检测方法，所述方法是以采用离心装置驱动液相在免疫层析固相检测膜中流动，其中所述免疫层析包括以胶体金属为指示剂的胶体金属免疫层析、以荧光素为指示剂的荧光免疫层析和化学发光物质和/或化学发光酶介导发光作为指示剂的化学发光免疫层析的至少一种。上述的方法中，所述胶体金属为胶体金、胶体硒和胶体金磁微粒中的至少一种；所述荧光素包括异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶、别藻青蛋白和铕化合物中的至少一种；所述化学发光物质包括鲁米诺和异鲁米诺及其衍生物类、吖啶酯及吖淀酰胺类、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷及其衍生物和三联吡啶钌中的至少一种；所述化学发光酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和黄嘌呤氧化酶中的至少一种。所述辣根过氧化酶的化学发光底物常用鲁米诺和异鲁米诺及其衍生物类，如异鲁米诺、4-氨基已基-N-乙基异鲁诺及AHEI和ABEI等，目前常用的产品有PIERCE公司生产的WestPico化学发光检测底物、WestDura化学发光检测底物、WestFemto化学发光检测底物。碱性磷酸酶的化学发光底物常用的有(金钢烷)-1,2-二氧乙烷及其衍生物、AMPPD、CDP-STAR、Lumi-Phos530。黄嘌呤氧化酶的化学发光底物有黄嘌呤、杨梅酮、槲皮素。上述的免疫层析化学发光检测方法中，还包括非酶促化学发光底物，即直接化学发光物质，是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester(AE),是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂（NaOH、H2O2）作用而发光，主要有吖啶酯及吖淀酰胺类、三联吡啶钌等。上述的方法中，所述固相检测膜包括硝酸纤维素膜、PVDF膜、聚偏氟乙烯膜、尼龙膜、DEAE纤维素膜的一种或组合。上述的方法中，所述方法是以微粒作为所述指示剂的承载载体；所述承载载体承载所述指示剂的方式采用以所述指示剂直接标记的待检物特异性直接结合物或待检物特异性间接结合物标记所述微粒或以带有所述指示剂的所述微粒直接标记待检物特异性直接结合物或待检物特异性间接结合物；所述微粒为能够直接和/或通过化学交联方式与蛋白质和/或所述指示剂形成非特异性结合并维持稳定的颗粒，所述微粒的粒径选择1nm-1um，具体可为10~800nm、20~600nm或43~500nm；所述特异性结合物包括抗原、抗体、亲和素、生物素及其衍生物。目前常用的微粒有胶体金微粒、胶体硒微粒、胶体金磁微粒、荧光微球、磁性微粒、金磁微粒、凝胶微粒、乳胶微粒、塑料微球、微球硅胶、琼脂糖微粒、聚苯乙烯微粒、二氧化硅微球、聚苯乙烯微球、羧基微球、氯甲基微球等。上述的方法中，所述液相包括含有待检物的液相、用所述指示剂标记的检测物的液相、用所述微粒标记的检测物的液相、非标记的检测物的液相、清洗液相的一种或组合；所述检测物为待检物特异性结合物及其二级或三级特异性结合物，所述特异性结合物包括抗原、抗体、亲和素、生物素及其衍生物。上述的方法中，所述方法还含有所述固相检测膜封闭液，所述封闭液为含有牛血清白蛋白以及其它可溶性蛋白质、脱脂奶粉、聚乙二醇、酪蛋白、蔗糖、表面活性剂、明胶、血清、血浆中的至少一种的缓冲盐溶液，包括以下使用步骤：1）采用固相检测膜包被液包被所述固相检测膜，所述固相检测膜包被液包括抗原、抗体、亲和素、生物素及其衍生物的溶液；2）采用所述清洗液清洗所述固相检测膜，所述清洗液包括水、常规缓冲液及其含有表面活性剂的缓冲溶液；3）用所述封闭液浸沁覆盖所述固相检测膜；4）用所述清洗液再次清洗所述固相检测膜；5）干燥，备用。一种离心分离检测装置包括进样部件和离心装置；所述离心装置包括由驱动电机驱动的离心转子和支撑底座，所述离心转子以所述支撑底座为支撑；所述进样部件不与离心转子直接连接，设于离心转子的上方、下方或外侧；所述进样部件包括液相储存装置、进样管和进样泵；所述液相储存装置与所述进样管相连通；所述进样泵驱动所述液相储存装置中的液体进入所述进样管；所述进样管直接或间接加载所述液相至所述固相检测膜的近心一侧上；所述固相检测膜被置于所述离心转子上离心。上述的装置中，所述固相膜置于固相膜固定装置中，所述固相膜固定装置选自固相膜支撑底片样部件、侧向流试纸条扣卡样部件和透明质包埋式部件中至少一种，且所述固相膜固定装置安置于所述离心转子上；所述固相膜固定装置与所述离心转子为可拆装式结构。上述的装置中，所述装置含有检测器，包括胶体金定量检测器、荧光检测器、化学发光检测器的一种或组合，所述检测器的检测指标包括吸光度、荧光值、化学发光值和图像数字信号值中的任一种或组合。上述的装置中，所述离心装置的转速和所述进样装置的进样速度均采用程序控制方式；所述离心装置的转速为200~10000r/min，具体可为500~5000转/分钟、800~3000转/分钟或800~2000转/分钟。上述的方法或装置中任一项所述方法或所述装置在免疫检测方法产品开发中的应用。本专利技术由于采取以上技术方案，其具有以下优点：1、本专利技术采用离心装置驱动检测的液相在固相检测膜上流动以及清洗，提高了待检物的捕获结合能力，降低了固相检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种离心分离检测方法，所述方法是以采用离心装置驱动液相在免疫层析固相检测膜中流动，其中所述免疫层析包括以胶体金属为指示剂的胶体金属免疫层析、以荧光素为指示剂的荧光免疫层析和化学发光物质和/或化学发光酶介导发光作为指示剂的化学发光免疫层析的至少一种。

【技术特征摘要】
1.一种离心分离检测方法，所述方法是以采用离心装置驱动液相在免疫层析固相检测膜中流动，其中所述免疫层析包括以胶体金属为指示剂的胶体金属免疫层析、以荧光素为指示剂的荧光免疫层析和化学发光物质和/或化学发光酶介导发光作为指示剂的化学发光免疫层析的至少一种。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述胶体金属为胶体金、胶体硒和胶体金磁微粒中的至少一种；所述荧光素包括异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶、别藻青蛋白和铕化合物中的至少一种；所述化学发光物质包括鲁米诺和异鲁米诺及其衍生物类、吖啶酯及吖淀酰胺类、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷及其衍生物和三联吡啶钌中的至少一种；所述化学发光酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和黄嘌呤氧化酶中的至少一种。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述固相检测膜包括硝酸纤维素膜、PVDF膜、聚偏氟乙烯膜、尼龙膜、DEAE纤维素膜的一种或组合。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述方法是以微粒作为所述指示剂的承载载体；所述承载载体承载所述指示剂的方式采用以所述指示剂直接标记的待检物特异性直接结合物或待检物特异性间接结合物标记所述微粒或以带有所述指示剂的所述微粒直接标记待检物特异性直接结合物或待检物特异性间接结合物；所述微粒为能够直接和/或通过化学交联方式与蛋白质和/或所述指示剂形成非特异性结合并维持稳定的颗粒，所述微粒的粒径选择1nm-1um；所述特异性结合物包括抗原、抗体、亲和素、生物素及其衍生物。5.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述液相包括含有待检物的液相、用所述指示剂标记的检测物的液相、用所述微粒标记的检测物的液相、非标记的检测物的液相、清洗液相的一种或组合；所述检测物为待检物特异性结...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤鸣，
申请(专利权)人：北京康华源科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11