一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于胰腺癌治疗的抗体药物偶联物及其制备方法，属于抗肿瘤药物技术领域。本发明专利技术的抗体药物偶联物，通过利用抗EGFR单克隆抗体，采用作用机制明确的细胞毒分子美登素衍生物DM1为效应分子，以稳定型硫醚接头SMCC(4‑(马来酰亚胺基)环己烷羧酸N‑琥珀酰亚胺基酯)为偶联接头，构建了一种靶向EGFR以胰腺癌为适应症的抗体药物偶联物(LR‑DM1)。本发明专利技术对抗体药物偶联物进行了系统的体内外活性评价，与裸抗体相比，LR‑DM1在抗原水平和细胞水平具有与裸抗体相当的亲和力，并且能够被靶细胞进行有效内化。

An antibody drug coupling for the treatment of pancreatic cancer and its preparation method

The invention provides an antibody drug coupling and a preparation method for the treatment of pancreatic cancer, which belong to the field of antitumor drug technology. Antibody drug conjugates of the invention, by using anti EGFR monoclonal antibody, the cytotoxic molecular mechanism of clear maytansine derivatives DM1 as effector molecules to stable type sulfide joint of SMCC (4 (maleimide group) cyclohexane carboxylic acid N succinimidyl ester) as a coupling joint, construct a targeting EGFR to pancreatic cancer for antibody drug conjugates (LR DM1). The invention of the in vivo activity evaluation system of antibody drug conjugates, compared with the naked antibody, LR DM1 is naked and the affinity of the antibody in antigen level and cell level, and can be the target cells for efficient internalization.

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物及其制备方法
本专利技术属于抗肿瘤药物
，具体涉及一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物及其制备方法。
技术介绍
根据国际癌症研究中心的报告，恶性肿瘤患者的数量正以每年3％～5％的速率递增，预计到2020年，全球将会有2000万癌症新发病例，死亡人数将达到1200万。在过去的30年中，我国恶性肿瘤死亡率呈显著上升趋势，已成为城乡居民的主要死因。近年来，癌症的发生趋势更加严峻，因罹患恶性肿瘤发生死亡的患者比例增长迅速，其中，胰腺癌等恶性肿瘤上升趋势显著。胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤，预后极差，5年生存率低于5％。胰腺癌的发病具有很强的隐蔽性，早期诊断十分困难，多数情况下，患者确诊后，病情已发展至中晚期，这也给胰腺癌的治疗带来了很大的障碍，因此，胰腺癌又被称为“癌中之王”。目前，胰腺癌的治疗策略主要分为三种：手术治疗、放射治疗、药物治疗。然而这些手段均存在一定的局限性。例如，由于胰腺癌发病的高度隐匿性，通常确诊时，病情已发展至中晚期，加之胰腺在解剖学上所处的位置较为复杂，周围存在着腹腔动脉、肠系膜动脉与静脉、肝动脉与门静脉等大血管，大大增加了胰腺癌手术治疗的难度和风险。细胞毒药物治疗主要通过细胞毒类药物，抑制细胞增殖，没有针对肿瘤组织的特异靶点，只是肿瘤细胞增殖活跃肿瘤细胞对于细胞毒类药物具有相对敏感性，例如吉西他滨。即使增值率高，对化疗药物敏感，但由于少部分不敏感非增殖细胞的存在，在敏感细胞被杀灭后，原来处于非增殖状态的细胞重新进入增殖状态，常常造成肿瘤的复发。此外，增殖活跃的正常细胞也不可避免受到细胞毒化疗药物的杀伤，产生毒性，临床表现为骨髓抑制、胃肠道反应、肺毒性、心脏毒性、肝毒性、肾毒性、脱发、致癌等毒副作用。虽然EGFR为多种癌症的检测靶点，但是目前以EGFR为靶点的抗胰腺瘤药物主要有小分子激酶抑制剂，在胰腺癌临床用药中，小分子激酶类抑制，如酪氨酸激酶抑制，发展的相对较为成熟。但是在胰腺癌靶向治疗方面，如今获批上市用于胰腺癌治疗的小分子靶向抑制剂为厄洛替尼，其在临床使用过程中发现，作用时间有限，由于酪氨酸激酶区域的二次点突变，从而导致病人对厄洛替尼产生耐药，这些患者使用酪氨酸激酶抑制剂进行治疗后，50％的病人会发生T790M突变，而在未曾接受过此治疗的患者中却很少发生此类突变。另外还有一种抗体类药物应用于肿瘤的治疗中，但是尚无以胰腺癌为适应症的单克隆抗体药物上市。抗体药物偶联物(ADC)目前有应用于急性骨髓性白血病或乳腺癌等肿瘤的治疗中，但是ADC药物研究并不成熟，不同类型肿瘤存在不同的问题，例如抗体与肿瘤细胞表达的抗原特异性不高或者系统稳定性差，仍会带来系统性的毒性作用，无法有效提高总体生存率；同时抗体分子能够携带的效应分子较低，造成效能不高，杀伤力较低，不能达到杀灭肿瘤细胞的目的。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于胰腺癌治疗的抗体药物偶联物及其制备方法，对EGFR表达阳性的肿瘤细胞普遍具有较强的细胞增殖抑制活性。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物，由抗体、细胞毒性药物和偶联接头组成，所述抗体药物偶联物具有式I所示的结构：其中，为抗EGFR单克隆抗体；n＝2～6。优选的，所述抗EGFR单克隆抗体的轻链具有如序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。优选的，所述抗EGFR单克隆抗体的重链具有如序列表中SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。优选的，所述抗体为人源化抗体。优选的，n＝3～5。本专利技术提供了所述的抗体药物偶联物的制备方法，包括以下步骤：1)将4-(马来酰亚胺甲基)-环己甲酸-N-琥珀酰亚胺基酯SMCC与二甲基亚砜混合，得到偶联接头溶液；2)将抗体与所述步骤1)得到的偶联接头溶液混合进行置换反应5～8h，得到偶连接头修饰的抗体溶液；3)美登素衍生物和二甲胺混合，得到美登素衍生物二甲胺溶液；4)将所述步骤3)得到的美登素衍生物二甲胺溶液滴加入所述步骤2)中得到的偶连接头修饰的抗体溶液中进行加成反应，得到抗体药物偶联物。优选的，所述步骤2)混合时以抗体的质量为基准，所述4-(马来酰亚胺甲基)-环己甲酸-N-琥珀酰亚胺基酯SMCC的质量为抗体质量的13～18倍。优选的，以抗体的质量为基准，所述步骤4)美登素衍生物二甲胺溶液的添加质量为抗体质量的4～7倍。优选的，所述步骤2)置换反应和所述步骤4)加成反应时伴随搅拌；搅拌的转速为500～700rpm。优选的，所述步骤2)置换反应和所述步骤4)加成反应时温度优选为23～28℃。本专利技术提供了一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物(ADC)。由抗体、细胞毒性药物和偶联接头组成，其中抗体的生物性质对抗体与靶细胞表面抗原的结合、抗体内化等ADC进入靶细胞的关键环节起决定性作用，肿瘤细胞特异性高表达的表面抗原作为抗体靶标，保证抗体与细胞表面抗原之间具有较高的亲和力。细胞毒性药物是ADC发挥药物活性的核心元件，具有极高的活性，同时与抗体偶联因此要具有可化学可修饰性，同时所述药物还具有水溶性，以确保弹头药物可被抗体携带进入细胞并发挥其效能。偶联接头需要具有循环系统稳定性，保证ADC到达靶细胞之前在循环系统中不发生裂解，避免释放出细胞毒分子产生毒副作用；同时在进入靶细胞之后，偶联接头需进行快速有效的断裂，以释放细胞毒分子来发挥应有的药理活性。本专利技术通过利用抗EGFR单克隆抗体，采用作用机制明确的细胞毒分子美登素衍生物DM1为效应分子，以稳定型硫醚接头SMCC(4-(马来酰亚胺基)环己烷羧酸N-琥珀酰亚胺基酯)为偶联接头，构建了一种靶向EGFR以胰腺癌为适应症的抗体药物偶联物(LR-DM1)。本专利技术对抗体药物偶联物进行了系统的体内外活性评价，结果表明，与裸抗体相比，LR-DM1在抗原水平和细胞水平具有与裸抗体相当的亲和力，并且能够被靶细胞进行有效内化。体外细胞增殖抑制结果表明，LR-DM1对EGFR表达阳性的肿瘤细胞普遍具有细胞增殖抑制活性并且与EGFR表达量存在一定的相关性，IC50可达到纳摩尔水平，其中针对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制活性达到了7.19nM。以人胰腺癌细胞Capan-2建立的裸鼠移植瘤为模型，对LR-DM1进行了体内药效学评价，通过活体成像结果证明了药物在体内具有良好的靶向聚集作用；在为期24天的单次给药试验中，各剂量组肿瘤生长抑制作用明显，均优于阳性对照吉西他滨，10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg剂量组的肿瘤生长抑制率分别为50.0％、67.1％、77.9％；在单次给药的基础上，进行了为期40天的多次给药试验，各LR-DM1给药剂量组均表现出良好的肿瘤生长抑制作用，并且呈现出一定的剂量依赖关系。此外，急性毒性试验结果表明，LR-DM1的LD50在300mg/kg～400mg/kg，高于给药剂量的10倍，治疗指数较高，安全性良好；通过对单次及多次给药的主要脏器及组织的病理切片进行分析，发现在治疗过程中，LR-DM1无显著的毒性蓄积作用。本专利技术提供了所述的抗体药物偶联物的制备方法，所述方法能够制备得到一种稳定性好、成品率高的抗体药物偶联物。本专利技术提供的方法重复性好，方便简便。附图说明图1为实施例1中细胞毒性药物合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物，由抗体、细胞毒性药物和偶联接头组成，其特征在于，所述抗体药物偶联物具有式I所示的结构：

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗胰腺癌的抗体药物偶联物，由抗体、细胞毒性药物和偶联接头组成，其特征在于，所述抗体药物偶联物具有式I所示的结构：其中，为抗EGFR单克隆抗体；n＝2～6。2.根据权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述抗EGFR单克隆抗体的轻链具有如序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述抗EGFR单克隆抗体的重链具有如序列表中SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述抗体为人源化抗体。5.根据权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，n＝3～5。6.权利要求1～5任意一项所述的抗体药物偶联物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将4-(马来酰亚胺甲基)-环己甲酸-N-琥珀酰亚胺基酯SMCC与二甲基亚砜混合，得到偶联接头溶液；2)将抗体与所述步骤1)得到的偶联接头溶液混...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉成，邵荣光，张代铭，郑忠辉，甄永苏，周磊，武临专，苗庆芳，白晓光，何红伟，张国宁，王菊仙，张胜华，弓建华，
申请(专利权)人：山东新华制药股份有限公司，中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37