鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及鼻咽癌检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及鼻咽癌检测试剂盒。hsa‑miR‑1909‑3p、hsa‑miR‑3135a和hsa‑miR‑198的表达量高低与鼻咽癌存在密切的关联性，因此能够作为鼻咽癌的生物标志物应用在制备鼻咽癌检测试剂、鼻咽癌检测试剂盒或鼻咽癌检测装置中。基于上述生物标志物研发的鼻咽癌检测试剂，能够应用于鼻咽癌早期检测中，检测的灵敏度较高、特异性较高。

【技术实现步骤摘要】
鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及鼻咽癌检测试剂盒
本专利技术涉及生物检测
，特别是涉及一种鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及鼻咽癌检测试剂盒。
技术介绍
鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，发病率为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。世界卫生组织调查报道，全球有80％的鼻咽癌患者在中国。鼻咽癌的发病率以中国的南方较高，如广东、广西、湖南等省。由于鼻咽癌起病隐匿，具有强烈的转移倾向，约75％的患者首诊时就己到达晚期，发生局部淋巴结和/或远处转移。一般以放疗为主的综合治疗对早期鼻咽癌非常有效，而治疗后复发或转移则预后极差，成为鼻咽癌治疗失败、生存率下降的主要原因。因此，筛查鼻咽癌的肿瘤标记物，争取早期发现、合理治疗、预测预后、监测复发，对鼻咽癌临床诊治具有极其重要的意义。研究发现，鼻咽癌的发病与爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-BarrVirus，EBV)感染、遗传因素以及环境因素密切相关。鉴于鼻咽癌与EBV感染的相关性，现有鼻咽癌的外周血标志物主要围绕EB病毒设计，如EB病毒壳抗原抗体VCA-IgA、早期抗体EA-IgA及EBV-DNA，但它们的敏感性和特异性并不高，在鼻咽癌患者中的EBV阳性率只有60％左右，存在较多的假阳性和假阴性，远远达不到临床要求。人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)被认为是与鼻咽癌发病最显著相关的遗传因素，在鼻咽癌候选基因研究和全基因组关联性研究中均检出HLA与鼻咽癌的存在相关性，但由于技术和费用等限制，目前还无法应用于临床。而其它鼻咽癌相关蛋白及其编码基因标志物的筛选，都止步于实验理论阶段，目前尚无实用的特异性的鼻咽癌标志物。随着研究的深入，研究者发现除了肿瘤相关的蛋白及其编码基因，非编码基因也与肿瘤的发生发展密切相关。特别是一类高度保守的非编码单链小分子RNA(microRNA，miRNA)，通常通过与靶基因mRNA的3’端完全或部分匹配互补结合，导致靶mRNA降解或抑制其翻译从而调控靶基因的表达。miRNA对多种生理过程包括发育、增殖、分化凋亡和应激反应等重要功能基因的表达起调控作用。研究发现在几乎所有肿瘤组织中都检测出异常表达的miRNA，越来越多的研究证实了miRNA几乎参与了肿瘤发生发展中的每一个步骤，在肿瘤发病机制中发挥了超出想象的重要作用。特定的miRNA可以反映肿瘤的组织来源，并对其进行分子分型，可用来预测预后及判断治疗敏感性，甚至直接参与肿瘤的治疗。若能筛选出鼻咽癌中异常表达miRNA作为生物标志物，并研制相应的辅助诊断试剂盒，将有力推动我国鼻咽癌的早期诊断、预测治疗、监测复发等，具有重要的临床应用价值。然而，由于鼻咽癌miRNA的研究起步较晚，循环miRNA的研究更是报道较少。基于传统的鼻咽癌标记物研制的检测试剂存在如下缺点：难以在鼻咽癌早期检测，需要同时检测大量的生物标志物才能得到初步的判断，检测的灵敏度和特异性较低。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能够用于早期检测且在检测时具有较高灵敏度和较高特异性的鼻咽癌检测试剂盒。此外，还提供一种鼻咽癌相关的miRNA作为生物标志物的应用。hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198中的至少一种，作为生物标志物在制备鼻咽癌检测试剂、鼻咽癌检测试剂盒或鼻咽癌检测装置中的应用。一实施方式的应用中，所述鼻咽癌为早期鼻咽癌。一实施方式的应用中，所述生物标志物来自血液。一种鼻咽癌检测试剂盒，包括与生物标志物特异性结合的检测物，所述生物标志物选自hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198中的至少一种。在一个实施方式中，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括能够扩增所述生物标志物的引物或能够检测所述生物标志物的探针。在一个实施方式中，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括生物标志物PCR扩增正向引物和生物标志物PCR扩增反向引物；所述生物标志物PCR扩增正向引物包括第一正向引物、第二正向引物和第三正向引物中的至少一种，所述第一正向引物针对所述hsa-miR-1909-3p逆转录后得到的cDNA设计，所述第二正向引物针对所述hsa-miR-3135a逆转录后得到的cDNA设计，所述第三正向引物针对所述hsa-miR-198逆转录后得到的cDNA设计。在一个实施方式中，所述第一正向引物的碱基序列如SEQIDNo.1所示；及/或，所述第二正向引物的碱基序列如SEQIDNo.2所示；及/或，所述第三正向引物的碱基序列如SEQIDNo.3所示；及/或，所述生物标志物PCR扩增反向引物为通用反向扩增引物，所述生物标志物PCR扩增反向引物的碱基序列如SEQIDNo.4所示。在一个实施方式中，还包括能够检测内参基因的试剂，所述内参基因选自U6、GAPDH、β-actin中的至少一种。在一个实施方式中，还包括RNA提取试剂、加A尾试剂和RNA逆转录试剂；所述RNA提取试剂用于提取待测样品中的RNA；所述加A尾试剂用于在提取的所述RNA的一端加A碱基；所述RNA逆转录试剂用于将加A尾后的所述RNA逆转录成cDNA。在一个实施方式中，所述RNA逆转录试剂包括RNA逆转录引物，所述RNA逆转录引物的碱基序列如SEQIDNo.5所示。hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198均属于miRNA。专利技术人在鼻咽癌的生物标志物方面进行了大量的探索研究，预料不到的发现，在鼻咽癌患者与健康人中hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198的表达量具有显著性的差异。hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198的表达量高低与鼻咽癌存在密切的关联性，因此能够作为鼻咽癌的生物标志物应用在制备鼻咽癌检测试剂、鼻咽癌检测试剂盒或鼻咽癌检测装置中。基于上述生物标志物研发的鼻咽癌检测试剂，能够应用于鼻咽癌早期检测中，仅需要对hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198中的至少一种miRNA进行检测，操作简单且方便，工作量小，且检测的灵敏度较高、特异性较高。附图说明图1为测试一中生物标记物hsa-miR-1909-3p在鼻咽癌患者与健康人的血浆中表达水平的分布图；图2为测试一中生物标记物hsa-miR-3135a在鼻咽癌患者与健康人的血浆中表达水平的分布图；图3为测试一中生物标记物hsa-miR-198在鼻咽癌患者与健康人的血浆中表达水平的分布图；图4为采用实施例1的鼻咽癌检测试剂盒检测区分健康人和鼻咽癌患者的敏感性和特异性的ROC曲线图；图5为采用实施例2的鼻咽癌检测试剂盒检测区分健康人和鼻咽癌患者的敏感性和特异性的ROC曲线图；图6为采用实施例3的鼻咽癌检测试剂盒检测区分健康人和鼻咽癌患者的敏感性和特异性的ROC曲线图；图7为采用实施例4的鼻咽癌检测试剂盒检测区分健康人和鼻咽癌患者的敏感性和特异性的ROC曲线图。具体实施方式下面主要结合附图及具体实施例对本专利技术做进一步的解释说明。一实施方式的应用，hsa-miR-1909-3p、h本文档来自技高网...

【技术保护点】
hsa‑miR‑1909‑3p、hsa‑miR‑3135a和hsa‑miR‑198中的至少一种，作为生物标志物在制备鼻咽癌检测试剂、鼻咽癌检测试剂盒或鼻咽癌检测装置中的应用。

【技术特征摘要】
1.hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198中的至少一种，作为生物标志物在制备鼻咽癌检测试剂、鼻咽癌检测试剂盒或鼻咽癌检测装置中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鼻咽癌为早期鼻咽癌。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物来自血液。4.一种鼻咽癌检测试剂盒，其特征在于，包括与生物标志物特异性结合的检测物，所述生物标志物选自hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-3135a和hsa-miR-198中的至少一种。5.根据权利要求4所述的鼻咽癌检测试剂盒，其特征在于，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括能够扩增所述生物标志物的引物或能够检测所述生物标志物的探针。6.根据权利要求4所述的鼻咽癌检测试剂盒，其特征在于，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括生物标志物PCR扩增正向引物和生物标志物PCR扩增反向引物；所述生物标志物PCR扩增正向引物包括第一正向引物、第二正向引物和第三正向引物中的至少一种，所述第一正向引物针对所述hsa-miR-1909-3p逆转录后得到的cDNA设计，所述第二正向引物针对所述hsa-miR-3135a...

【专利技术属性】
技术研发人员：李炯，何箫梦，刘林泉，丁浩，
申请(专利权)人：深圳市恩普电子技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44