用于诊治骨肉瘤的长链非编码RNA标志物制造技术

本发明专利技术提供一种长链非编码RNA及其应用。本发明专利技术的研究表明LINP1在骨肉瘤组织中和在癌旁组织中的表达存在显著差异，据此认为LINP1可以作为诊断骨肉瘤的分子标志物。根据LINP1在骨肉瘤组织中呈现低水平表达，在骨肉瘤细胞中过表达LINP1，研究LINP1在骨肉瘤中的作用，结果表明过表达LINP1能够明显抑制骨肉瘤细胞的增殖。本发明专利技术揭示了LINP1在骨肉瘤发病机制中的重要作用，也为骨肉瘤的临床诊断、治疗和预后监测提供了新的分子标记和药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
用于诊治骨肉瘤的长链非编码RNA标志物
本专利技术属于生物医学领域，涉及用于诊治骨肉瘤的长链非编码RNA标志物。
技术介绍
骨肉瘤是来源于间叶组织的恶性肿瘤，其主要致病特征为体内增殖的肿瘤细胞直接形成未成熟骨或骨样组织。是一种人类骨骼系统最常见的原发性恶性肿瘤。典型的骨肉瘤是一种罕见的(占全部恶性肿瘤的0.2％)高致癌恶性肿瘤，其发病率约每年每一百万人里有三例。骨肉瘤主要出现在较长的骨骼以及少部分的软组织。其主要发病人群集中在10～20岁青少年，具有发病率高，早期转移率高，治愈生存率低等特点。X-射线，断层摄影技术，核磁共振，血管造影技术以及动态骨闪烁摄影技术等广泛应用于该病的诊断、肿瘤发生的程度及手术类型判断等等。但是利用上述临床手段进行骨肉瘤的诊断，常常导致患者的病情延误，错过最佳治疗时期。因此寻找一种骨肉瘤早期诊断标志物是亟待解决的问题。人体中编码蛋白质的基因大约有2-3万个，仅占人类基因组的2％，其余98％不编码蛋白质的基因组DNA最初被认为是没有功能的，是生物体中的垃圾，通常被称为“垃圾DNA”。但目前的研究表明，这些垃圾DNA大多可转录产生非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA)。根据成熟转录本大小的不同，ncRNA可分为小分子ncRNA(如siRNA，miRNA，piRNA等)，中等长度ncRNA(70-200nt)和长ncRNA(longncRNA，LncRNA，>200nt)。目前，ncRNA领域研究较多的是小分子ncRNA，而对LncRNA的研究还处于起步阶段。由于序列内部存在过多的终止密码子，LncRNA不能被翻译成蛋白质，他们通常是以RNA转录本的形式行使其生物学功能，如发育过程中的细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和类固醇代谢等。最近的研究发现LncRNA与肺癌、非霍杰金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等肿瘤疾病有关。这表明LncRNA与细胞的癌变有着极为密切的联系，LncRNA在细胞增殖、分化和癌变中发挥着重要的作用。目前，已经克隆的人类lncRNAs基因已超过4万多个，但绝大部分lncRNA的功能未知。目前，有关LncRNA在骨肉瘤的发病机制、疾病诊断及治疗方面的研究基本空白，因此本申请利用生物信息学分析研究探讨LncRNA在骨肉瘤的发病机制、疾病诊断及治疗方面的的作用，同时为后续深入研究提供实验基础及研究方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于诊治骨肉瘤的长链非编码RNA标志物。本专利技术利用芯片和QPCR实验证明LINP1在骨肉瘤组织中的表达水平明显低于在癌旁组织中的水平，因此可以将LINP1作为诊断骨肉瘤的分子标志物。为了实验上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测长链非编码RNA表达的试剂在制备骨肉瘤辅助诊断或预后预测产品中的应用；所述长链非编码RNA的GeneID：108570035。本专利技术的长链非编码RNA在NCBI中的命名为LINP1。LINP1的Genbank登录号NR_138480.1，具有838bp的长度，相应的DNA序列如SEQIDNO.1所示。进一步，所述试剂包括利用SYBRGreen、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测LINP1表达量时使用的PCR扩增引物。在本专利技术的具体实施方案中，所述引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。本专利技术提供了一种用于骨肉瘤辅助诊断或预后预测的产品，所述产品包括检测LINP1表达水平的试剂。进一步，所述试剂包括SYBRGreen、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测LINP1表达量时使用的PCR扩增引物。在本专利技术的具体实施方案中，所述引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。进一步，前面所述的产品包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断骨肉瘤的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的RNA表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的RNA表达谱，容易分析出哪个RNA的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知非LINP1的异常与骨肉瘤相关也属于LINP1的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。所述试剂盒包括检测LINP1表达量的试剂，所述试剂包括与LINP1或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括SYBRGreen、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测LINP1表达量时使用的PCR扩增引物。所述芯片包括检测LINP1表达量的试剂，所述试剂包括与LINP1或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括能够检测LINP1表达量的探针。所述试纸包括检测LINP1表达量的试剂，所述试剂包括与LINP1或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括能够检测LINP1表达量的探针。本专利技术提供了一种用于治疗骨肉瘤的药物组合物，所述药物组合物包括LINP1的激活剂。进一步，所述激活剂不受限制，只要是可以增加LINP1表达水平或提高LINP1功能活性即可。所述激活剂包括LINP1本身、促进型miRNA、促进型转录调控因子、或促进型靶向小分子化合物。本专利技术的药物组合物可以作为医药单独施用或与其它药物一起施用。可以与本专利技术的药物组合物一起施用的其它药物不受限制，只要它不损害本专利技术的治疗性或预防性药物组合物的效果即可。本专利技术的药物组合物可根据需要制备成各种剂型。包括但不限于，经皮、粘膜、鼻、口颊、舌下或经口使用的片剂、溶液剂、颗粒剂、贴剂、膏剂、胶囊剂、气雾剂或栓剂。本专利技术的药物组合物的施用途径不受限制，只要它能发挥期望的治疗效果或预防效果即可，包括但不限于静脉内，腹膜内，眼内，动脉内，肺内，口服，小泡内，肌肉内，气管内，皮下的，通过皮肤，通过胸膜，局部的，吸入，通过粘膜，皮肤，肠胃，关节内，心室内，直肠，阴道，颅骨内，尿道内，肝内，瘤内。在某些情况下，可以系统地给药。在某些情况下是局部地给药。本专利技术的药物组合物的剂量不受限制，只要获得期望的治疗效果或者预防效果即可，可以依据症状、性别、年龄等来恰当的确定。本专利技术的治疗药物组合物或预防药物组合物的剂量可以使用例如对疾病的治疗效果或者预防效果作为指标来确定。本专利技术还提供了前面所述的激活剂在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用。本专利技术还提供了一种诊断骨肉瘤的方法，所述方法包括如下步骤：(1)获取受试者的样品；(2)检测受试者样品中LINP1的表达水平；(3)将测得的LINP1的表达水平与受试者的患病与否关联起来。(4)与对照相比，LINP1的表达水平降低，则该受试者被判断患有骨肉瘤、或者该受试者患有骨肉瘤的风险高、或者骨肉瘤患者被判断为预后不良。本专利技术还提供了一种骨肉瘤的治疗方法，所述方法包括增加LINP1表达量或者增强LINP1的调节活性。本专利技术还提供了一种骨肉瘤药物的筛选方法，可以通过在对骨肉瘤细胞添加测试药物后或在对骨肉瘤模型动物施用测试药物后的某个时期测量LINP1的表达水平来测定肿瘤药物改善肿瘤预后的效果。更具体地说，当LINP1的表达水平在添加或施用测试药物后升高时或者恢复正常水平时，可选择该药物作为改善肿瘤预后的治疗药物。在本专利技术的上下文中，“诊断骨肉瘤”包括判断受试者是否已经患有骨肉瘤、判断受试者是否存在患有骨肉瘤的本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测长链非编码RNA表达的试剂在制备骨肉瘤辅助诊断或预后预测产品中的应用；所述长链非编码RNA是LINP1，所述长链非编码RNA的相应DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.检测长链非编码RNA表达的试剂在制备骨肉瘤辅助诊断或预后预测产品中的应用；所述长链非编码RNA是LINP1，所述长链非编码RNA的相应DNA序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括利用SYBRGreen、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测所述长链非编码RNA表达量时使用的PCR扩增引物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒、芯片或试纸。5.一种用于骨肉瘤辅助诊断或预后预测的产品，其特征在于，所述产品包括检测权利要求1-4中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，石小峰，
申请(专利权)人：固安博健生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13