一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌及构建方法技术
A recombinant Lactococcus lactis expressing porcine epidermal growth factor gene and its construction method
The invention discloses a recombinant Lactococcus lactis expressing porcine epidermal growth factor gene and construction methods: the pEGF gene and plasmid from Lactococcus lactis pNZ8148 synthesis and double enzyme digestion, recovery, connection, was transformed into E. coli CM1061 competent cells, the use of chloramphenicol resistance were screened and identified by PCR recombinant plasmid was correct after that, the recombinant plasmid was extracted and transferred to the electric Lactococcus lactis NZ9000, then identified by PCR, to obtain the recombinant lactic acid pNZ8148 ball pEGF NZ9000; the invention of purified growth factor on expression of recombinant porcine epidermis, and the recombinant proteins were Tricine SDS PAGE identification.
【技术实现步骤摘要】
一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌及构建方法
本专利技术涉及一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌及构建方法。
技术介绍
表皮生长因子(EGF)是一类重要的生长因子，是类EGF大家族的一个成员。它是由50-60个氨基酸分子组成的肽链，链中含有6个半胱氨酸分子，半胱氨分子间形成稳定的双硫键。使整条肽链成为三个环联部分的活性物质。它是一种广泛存在于人或其它动物体内的小分子多肽，极微量即能强烈刺激细胞生长、抑制衰老基因的出现，延缓表皮细胞衰老。他通过与其受体相结合发挥作用。表皮生长因子通过与细胞表面的受体表皮生长因子受体(EGFR)结合而起作用。与表皮生长因子受体的高亲和力结合，激发受体内在的酪氨酸激酶的活性，从而启动了信号传导级联而导致多种生物化学变化，细胞内钙水平上升，增加糖酵解与蛋白质合成,增加某些基因(包括表皮生长因子受体)的表达，最终导致DNA合成和细胞增殖。猪EGF蛋白含53个氨基酸残基，相对分子质量6.2KD，主要由唾液腺、乳汁、Paneth细胞、十二指肠的Brunners腺和胰腺等分泌至胃肠道，在消化道中发挥作用，EGF对酸和热非常稳定，对抵...
【技术保护点】
一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌，其特征在于，所述的重组乳酸乳球菌为pEGF‑pNZ8148‑NZ9000。
【技术特征摘要】
1.一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌，其特征在于，所述的重组乳酸乳球菌为pEGF-pNZ8148-NZ9000。2.根据权利要求1所述的一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）用限制性内切酶分别对pNZ8148质粒和pEGF基因进行双酶切；（2）使用琼脂糖凝胶回收试剂盒分别对酶切产物进行回收，再经T4DNA连接酶对酶切产物进行连接反应后转化至大肠杆菌MC1061感受态细胞中，使用氯霉素抗性进行筛选后，经酶切鉴定、PCR鉴定得出...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹远东，周志，曾二生，潘烘，汪石粮，
申请(专利权)人：江西嘉博生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36
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