一种酶活提高的丙酮酸脱羧酶突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种酶活提高的丙酮酸脱羧酶突变体，属于酶工程、生物工程领域。本发明专利技术通过定点突变的方法，将丙酮酸脱羧酶分子内部，稳定性较差区域的亲水性氨基酸缬氨酸突变成疏水性较强的酪氨酸，改变酶分子内部的疏水性，提高了丙酮酸脱羧酶的酶活，并在催化2‑酮基‑L‑古龙酸生成L‑木糖的反应中提高了木糖的产量。用改造后的酶在生成L‑木糖的生产中，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。

An improved enzyme activity of pyruvate decarboxylase mutants

The present invention discloses a pyruvate decarboxylase mutant with improved enzyme activity, which belongs to the field of enzyme engineering and bioengineering. By the method of point mutation, internal pyruvate decarboxylase molecules, poor stability region of hydrophilic amino acid valine mutated tyrosine strong hydrophobic, hydrophobic change enzyme molecules inside the increased pyruvate decarboxylase activity, and increased the yield of xylose in the catalytic 2 keto L gulonic acid generation L xylose reaction. With the transformation of the enzyme in the formation of L xylose production, more suitable for industrial application, can reduce production cost, improve production efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种酶活提高的丙酮酸脱羧酶突变体
本专利技术涉及一种酶活提高的丙酮酸脱羧酶突变体，属于酶工程、生物工程领域。
技术介绍
丙酮酸脱羧酶(pyruvatedecarboxylase,PDC)是一种焦磷酸硫胺素(thiamindiphosphate,TPP)依赖性的非氧化酶，在TPP、Mg2+的辅助作用下，它能使α-酮基羧酸脱羧，进而与醛类发生聚合反应，生成手性的α-羟基酮类化合物。α-羟基酮类化合物是一类重要的有机合成中间体，在制药工业上发挥着重要的作用，它进一步还原可生成邻二醇的结构，氧化可生成邻二酮，还原氨化可生成醇胺等许多药物，例如维生素E、抗真菌药Sch42427、麻黄碱，都是通过α-羟基酮类化合物合成的。丙酮酸脱羧酶在自然界中广泛存在，迄今研究较多的是酵母和运动单胞菌的PDC。不同来源的PDC性质都有所不同，尤其是因此而生成的不同构型的α-枪击酮类化合物更为引人注意。譬如，以乙醛酸，乙醛为底物，由酵母PDC催化合成的乳醛酸以R型为主，而由移动单胞PDC催化则以S型为主，而丙酮酸与芳香醛或杂环醛的缩合反应，用以上两种丙酮酸脱羧酶催化，生成的产物都以R型为主，且R构型能占97％以上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丙酮酸脱羧酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种丙酮酸脱羧酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.编码权利要求1所述丙酮酸脱羧酶突变体的基因。3.携带权利要求2所述基因的载体或细胞系。4.一种获得权利要求1所述突变体的方法，其特征在于，是通过定点突变技术将丙酮酸脱羧酶蛋白质内部的第176位的缬氨酸突变为酪氨酸。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将含有编码野生型丙酮酸脱羧酶的基因与载体pET22b(+)连接，转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)；挑选转化子接种到LB液体培养基中，37℃培养10h，转接到TB培养基，接种量为1％，菌体长到OD600为0.8时，加入IP...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆茜，张德鸿，
申请(专利权)人：上海凌凯医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31