一种复合稳定剂及添加该复合稳定剂的NAD激酶的酶活测定方法技术

本发明专利技术提供了一种复合稳定剂及添加该复合稳定剂的NAD激酶的酶活测定方法，具有这样的特征，该方法包括以下步骤：步骤一，制备粗酶液；步骤二，将粗酶液分装于多个离心管中，向一部分离心管加入与保护剂，向另一部分离心管加入双蒸水；步骤三，将加有保护剂的粗酶液冷却，加入缓冲溶液、底物以及金属离子，水浴，离心后取上清液；步骤四，将上清液中的NADP转化为NADPH，测定OD340的吸光值，得到NAD激酶酶活；步骤五，以未加保护剂的粗酶液为对照，以初始酶液酶活为100％，得到酶活保留率。该复合稳定剂由常见的组分组成，成分简单、成本低廉，能有效提高NAD激酶的稳定性，并且应用前景广阔；NAD激酶的酶活测定方法简单实用，效果直观。

【技术实现步骤摘要】
201610268174

【技术保护点】
一种复合稳定剂，用于提高NAD激酶的稳定性，其特征在于，包含：浓度为2～10g/L的麦芽糖，体积分数为2～10％的乙醇，体积分数为2～10％的甘油，浓度为2～10mL/L的吐温20。

【技术特征摘要】
1.一种复合稳定剂，用于提高NAD激酶的稳定性，其特征在于，包含：
浓度为2～10g/L的麦芽糖，体积分数为2～10％的乙醇，体积分数为2～10％的甘油，浓度为2～10mL/L的吐温20。
2.一种NAD激酶的酶活测定方法，采用权利要求1所述的复合稳定剂作为保护剂，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，制备粗酶液；
步骤二，将制备得到的所述粗酶液分装于多个1～2mL的离心管中，向其中一部分离心管中加入与所述粗酶液相同量的所述保护剂，向另一部分离心管中加入与所述粗酶液相同的量的双蒸水，将两部分都置于35～50℃的水浴锅中，保温2～4h；
步骤三，将保温后的加有所述保护剂的所述粗酶液冷却至室温，加入缓冲溶液、底物以及金属离子，混匀后置于30～38℃的水浴锅中反应1～2h，沸水浴5～10min终止反应，在转速为4000～8000r/min条件下离心5～10min，去除沉淀，取上清液；
步骤四，将所述上清液中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)，测定OD340的吸光值，得到NAD激酶酶活；
步骤五，以未加所述保护剂的所述粗酶液经热处理为对照，以初始酶液酶活为100％，得到酶活保留率。
3.根据权利要求2所述NAD激酶的酶活测定方法，其特征在于：
其中，在步骤一中，所述粗酶液的制备方法包括以下子步骤：
子步骤一，从4℃冰箱保存...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红梅，袁飞飞，段琳琳，亢涵，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31