一种高立体选择性苯丙氨酸脱氨酶突变体及其应用制造技术
Highly selective phenylalanine deaminase mutant and application thereof
The invention discloses a novel phenylalanine deaminase mutant and its application of a high stereoselectivity, the mutant is the amino acid sequence of prokaryotic Anabaena variabilis phenylalanine deaminase caused by point mutation, 311st mutation of glutamine to glutamic acid, 448th glutamate mutated to threonine, the mutant specific selective catalytic synthesis of D aromatic alanine, protein amino acid sequence of the mutants is shown as SEQ ID No.1. The obtained mutant also has high activity, high thermal stability and excellent performance, lay the foundation for the industrial application of the chiral D aromatic alanine synthesis in large scale and low cost.
【技术实现步骤摘要】
一种高立体选择性苯丙氨酸脱氨酶突变体及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种高立体选择性苯丙氨酸脱氨酶突变体及其应用。
技术介绍
手性D-芳香丙氨酸广泛应用于医药、农药和食品工业领域，如D-苯丙氨酸被用作生产治疗2型糖尿病药物“那格列奈”、β-内酰胺抗生素及新型抗肿瘤药物的前体。生产D-芳香丙氨酸的方法有发酵、化学合成、酶催化等方法。由于D-芳香丙氨酸代谢过程复杂，采用工程菌发酵的产量太低，达不到工业化生产的要求，因此目前工业生产D-芳香丙氨酸最主要的方法是化学合成，但是由于合成的立体选择性低，合成的产物是对消旋体，为获得高纯度的D-芳香丙氨酸，需要昂贵的手性拆分试剂，而且合成的原料都具有剧毒，生产过程复杂，导致D-芳香丙氨酸的价格昂贵。酶催化法是一种最具前景的生产方法，因为酶具有反应条件温和，立体选择性高，反应副产物少，环境友好等优点。具有催化合成D-芳香丙氨酸的酶有转氨酶、D-氨基酸氧化酶、酰胺酶、海因酶等，然而目前接近工业化生产的是采用海因酶和氨甲酰水解酶两种酶连续催化。该方法中，以DL-5替代海英作为原料，在海因酶的作用下，DL-5替代海英生成N...
【技术保护点】
一种高立体选择性的新型苯丙氨酸脱氨酶突变体，其特征在于，该突变体是原核生物Anabaena variabilis的苯丙氨酸脱氨酶的氨基酸序列通过定点突变而产生的，即第311位的谷氨酰胺突变为谷氨酸，第448位的谷氨酸突变为苏氨酸，该突变体可特异选择性催化合成D‑芳香丙氨酸，所述突变体的蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种高立体选择性的新型苯丙氨酸脱氨酶突变体，其特征在于，该突变体是原核生物Anabaenavariabilis的苯丙氨酸脱氨酶的氨基酸序列通过定点突变而产生的，即第311位的谷氨酰胺突变为谷氨酸，第448位的谷氨酸突变为苏氨酸，该突变体可特异选择性催化合成D-芳香丙氨酸，所述突变体的蛋白氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.一种编码权利要求1所述突变体的DNA分子，其特征在于，所述DNA分子核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。3.根据权利要求2所述的一种编码权利要求1所述突变体的DNA分子，其特征在于，所述DNA分子以来源...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘义，孙伟峰，丁文武，黄玉坤，刘平，曾朝懿，杨羚羚，车振明，周哲敏，朱龙宝，
申请(专利权)人：西华大学，
类型：发明
国别省市：四川,51
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