一种人血浆转铁蛋白分离纯化的方法技术

本发明专利技术公开了一种人血浆转铁蛋白分离纯化的方法，包括以下步骤：1)将人血浆组分FIV‑1蛋白沉淀溶解于缓冲液中，过滤，得滤液；2)利用阴离子交换层析对步骤1)得到的滤液进行分离，收集含转铁蛋白的洗脱液；3)将步骤2)得到的洗脱液进行病毒灭活，过滤、透析后，收集透析液；4)利用疏水作用层析对步骤3)中的透析液进行二次分离，得含转铁蛋白的穿透液。本发明专利技术的方法分离得到的转铁蛋白具有高纯度、高回收率、步骤简单以及易规模化生产的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种人血浆转铁蛋白分离纯化的方法
本专利技术属于蛋白质分离纯化领域，尤其涉及一种人血浆转铁蛋白分离纯化的方法。
技术介绍
人血浆转铁蛋白是一种重要的β-球蛋白，分子量为79kDa，等电点约为5.9左右。转铁蛋白是一种单链糖基化蛋白，糖基约占10％，由C端和N端两个具有高度同源性的结构域组成，两个结构域都由一个短肽连接，而且，C端和N端都由两个大小相同的小亚基构成，两个小亚基之间的间隙则是Fe3+结合位点，因此，转铁蛋白有2个铁离子结合位点。根据结合数目及位点的不同，转铁蛋白有四种形式，分别是无铁离子结合转铁蛋白、只有N端结合铁离子的转铁蛋白、只有C端结合铁离子的转铁蛋白以及N端和C端都结合铁离子的转铁蛋白。正常条件下，转铁蛋白的铁离子饱和度是20％-35％。人血浆中转铁蛋白的浓度约为2.0～3.0g/L。转铁蛋白是人血浆和组织细胞外空间的主要铁载体，其主要生理功能是把铁离子从吸收和储存的地方运输到红细胞供合成血红蛋白用，或输送到机体的其他需铁部位。转铁蛋白结合的铁不会催化羟基自由基形成，而且可以使铁离子远离细菌和真菌，因此转铁蛋白具有抗氧化和抗菌的作用。转铁蛋白可用于治疗先天性无转铁本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人血浆转铁蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将人血浆组分FIV‑1蛋白沉淀溶解于缓冲液中，过滤，得滤液；2)利用阴离子交换层析对步骤1)得到的滤液进行分离，收集含转铁蛋白的洗脱液；3)将步骤2)得到的洗脱液进行病毒灭活，过滤、透析后，收集透析液；4)利用疏水作用层析对步骤3)中的透析液进行二次分离，得含转铁蛋白的穿透液。

【技术特征摘要】
1.一种人血浆转铁蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将人血浆组分FIV-1蛋白沉淀溶解于缓冲液中，过滤，得滤液；2)利用阴离子交换层析对步骤1)得到的滤液进行分离，收集含转铁蛋白的洗脱液；3)将步骤2)得到的洗脱液进行病毒灭活，过滤、透析后，收集透析液；4)利用疏水作用层析对步骤3)中的透析液进行二次分离，得含转铁蛋白的穿透液。2.如权利要求1所述的人血浆转铁蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤4)之后还包括步骤5)：将步骤4)得到的含转铁蛋白的穿透液进行超滤之后进行病毒过滤、除菌过滤，分装冻干。3.如权利要求1所述的人血浆转铁蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中溶解FIV-1沉淀的缓冲液的pH为7.0～9.0；优选地，所述的缓冲液为pH7.0-9.0，10～100mM的磷酸盐缓冲液或pH7.0～9.0，10～100mM的Tris-HCl缓冲液。4.如权利要求1所述的人血浆转铁蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中，溶解在20～45℃的温度下进行5～10h。5.如权利要求1所述的人血浆转铁蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤2)具体为：取装有阴离子交换层析填料的色谱柱，用平衡缓冲液平衡色谱柱后上样，然后用洗脱液进行洗脱，收集含转铁蛋白的洗脱液。6.如权利要求5所述的人血浆转铁蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤2)中，阴离子交换层析填料为：DEAESepharoseHighPerformance、DEAESepharoseFastFlow、DEAEMacro-Prep、ToyopearylDEAE-650M、QSepharoseHighPerformance、QSepharoseFastFlow或CaptoQ；平衡缓冲液为pH6.5～9.0，10～100mM的Tris-HCl缓冲液或pH6.5～9.0，10～100mM的磷酸盐缓冲液；洗脱以A液和B液为洗脱液进行线性梯度洗脱，其中，所述A液为平衡缓冲液，所述B液为含0.08～0.15MNaCl，pH6.5～9.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：何洁，郭采平，丁玉江，谭淑娴，王锦才，张战，张运佳，黄伟荣，
申请(专利权)人：深圳市卫光生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44