Fc融合高亲和力IgE受体α链制造技术

本发明专利技术提供一种在低pH值下具有优异稳定性的Fc融合高亲和力IgE受体α链。本发明专利技术Fc融合蛋白的特征在于，其含有：(i)高亲和力IgE受体α链以及(ii)IgG1的Fc区域，并且所述(i)和(ii)之间的接头片段区域为SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

Fc fused a high affinity IgE receptor alpha chain

The present invention provides a Fc fused high affinity IgE receptor alpha chain at low pH values with excellent stability. Is that the characteristics of the present invention Fc fusion protein comprising: (I) the high affinity IgE receptor alpha chain (II) and the Fc region of IgG1, and the (I) and (II) segment joint region between the amino acid sequence of NO:2 ID SEQ.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Fc融合高亲和力IgE受体α链
本专利技术涉及一种用作药物的Fc融合高亲和力IgE受体α链(Fc-fusedhighaffinityIgEreceptorα-chain)。更详细而言，本专利技术涉及一种在低pH值下具有优异稳定性的Fc融合高亲和力IgE受体α链、以及其药物用途。
技术介绍
免疫球蛋白E(IgE)是负责过敏反应的免疫球蛋白类之一。由B细胞分泌、或在B细胞表面上表达的IgE会与肥大细胞以及嗜碱性粒细胞等表面上已知的高亲和力IgE受体(FcεRI)结合。当抗原蛋白与肥大细胞表面受体上的IgE结合时，则形成IgE与抗原发生交联的形态。之后，细胞内颗粒中储存的组织胺和血清素等化学介质等会被释放出来。其结果会诱发炎症反应，引起毛细血管扩张、血管通透性亢进等I型过敏症状(非专利文献1)。因此，抑制IgE与FcεRI结合的化合物或蛋白由于会抑制IgE与肥大细胞以及嗜碱性粒细胞等表面上已知的FcεRI结合，而作为支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎等I型过敏性疾病的治疗剂受到期待(非专利文献2)。近年来，除了开发以现有的低分子化合物为有效成分的药物以外，还开发了较强地与生物体内的特定受体等结合，并表现出优异的治疗效果的蛋白药物。例如，作为类风湿性关节炎的治疗剂，已知有依那西普。依那西普是在生物体内以肿瘤坏死因子(TNF)可溶性受体发挥抑制TNF作用的效果为目的而开发出的全人源性可溶性TNFα/LTα受体制剂。蛋白药物可以期待较高的治疗效果，但另一方面，在其制造工序中，也可能会产生蛋白药物所特有的问题。通常在将抗体和Fc融合蛋白制成药物时，会使用利用蛋白A(ProteinA)的纯化方法。在该方法中，为了洗脱与蛋白A结合的目的蛋白，会使用低pH值的缓冲液。另外，为了使病毒灭活，希望对目的蛋白在一定时间内及低pH值下进行处理。在低pH值下稳定性差的蛋白容易产生聚集体。当聚集体的比例较高时，在蛋白药物的制造中会导致纯化效率及产量降低。另外，药物中混入聚集体，也可能会引起免疫反应，导致过敏反应等严重副作用。因此，在蛋白药物的制造中，在低pH值下目的蛋白的不稳定性成为了问题。专利文献1记载了一种包含免疫球蛋白和细胞外区域而成的多肽(免疫黏附素)。专利文献1中，作为免疫黏附素的示例之一，记载有高亲和力IgE受体。但是，上述文献中并未具体记载高亲和力IgE受体与免疫球蛋白的融合蛋白。非专利文献3记载了高亲和力IgE受体α链(FcεRIα-chain，以下称作“FCER1A”)与免疫球蛋白G1(IgG1)的融合蛋白(以下称作“融合蛋白A”(FusionproteinA))。但是，上述文献中记载的融合蛋白A与本专利技术的蛋白相比，FCER1A与IgG1(Fc)的结合形式大不相同。即，本专利技术的蛋白，在其FcεRI与IgG1之间的接头片段区域中具有特征性氨基酸序列。专利文献2记载了高亲和力IgE受体(FcεRI)的水溶性片段与人Fc区域通过连接肽连接而成的融合蛋白(NPB301)。但是，本专利技术的蛋白并不包含专利文献2中记载的连接肽。另外，专利文献2并未记载及暗示本专利技术的接头片段区域的特征性氨基酸序列。专利文献3记载了FCER1A与免疫球蛋白G2(IgG2)的融合蛋白。但是，该融合蛋白与上述IgG2的融合蛋白和本专利技术的蛋白相比，在接头片段区域和Fc区域中，氨基酸序列有所不同。专利文献4记载了非人灵长类FCER1A与IgG1的融合蛋白。另外，专利文献5～7记载了FCER1A与IgG1的融合蛋白。但是，上述文献并未记载及暗示本专利技术的接头片段区域的特征性氨基酸序列。上述非专利文献3和专利文献1～7并未记载及暗示本专利技术的蛋白。现有技术文献专利文献专利文献1：美国专利第5,565,335号说明书专利文献2：国际公开第2012/169735号专利文献3：中国专利申请公开第101633698号说明书专利文献4：国际公开第2008/028068号专利文献5：国际公开第2011/056606号专利文献6：国际公开第2008/099178号专利文献7：国际公开第2008/099188号非专利文献非专利文献1：罗智靖，“アレルギーの分子細胞機構”BIOINDUSTRY，2008年，第25卷，第9号，P.23-39非专利文献2：ChiseiRa等，“InternationalImmunology”，1993年，第5卷，第1号，P.47-54非专利文献3：M.Haak-Frendscho等，“JournalofImmunology”，1993年，第151卷，第1号，P.351-358
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的课题在于提供一种在低pH值下具有优异稳定性的Fc融合高亲和力IgE受体α链。解决课题的手段为了获得针对低pH值及热的稳定性高的Fc融合高亲和力IgE受体α链，本专利技术人进行了潜心研究。结果发现，在包含高亲和力IgE受体α链与IgG1的Fc区域的融合蛋白中，通过使用包含3个Cys的接头片段，能够获得稳定性高的Fc融合高亲和力IgE受体α链，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下。本专利技术涉及以下〔1〕～〔5〕等。〔1〕一种Fc融合蛋白，其特征在于，含有：(i)高亲和力IgE受体α链，以及(ii)IgG1的Fc区域，并且所述(i)和(ii)之间的接头片段区域为SEQIDNO:2的氨基酸序列。〔2〕一种Fc融合蛋白，其为权利要求1所述的Fc融合蛋白，其特征在于，所述蛋白为包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的蛋白；或者其为包含SEQIDNO:3的氨基酸序列C末端缺失赖氨酸(K)而成的氨基酸序列的Fc融合蛋白。〔3〕根据〔1〕或〔2〕的Fc融合蛋白，其为二聚体。〔4〕根据〔3〕的Fc融合蛋白，其中，接头片段区域的半胱氨酸残基相互形成3个二硫键。〔5〕一种药物组合物，其含有〔1〕～〔4〕中任一项的Fc融合蛋白作为有效成分。本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本专利申请号2015-032231号、2015-252231号的公开内容。专利技术效果本专利技术的蛋白在低pH值下具有优异稳定性。另外，本专利技术的蛋白具有针对IgE的优异中和活性。因此，本专利技术的蛋白能够用作预防和治疗由IgE介导的I型过敏性疾病的蛋白药物。附图说明图1表示针对人IgE的结合抑制活性。图中，横轴表示各药物的浓度(mol/L)，纵轴表示以添加了一定量的IgE时的结合量为基准，将对与固定在孔板上的蛋白1(Protein1)结合的IgE的量表示为百分率的值(游离IgE(相对于对照的％))。图中，圆圈表示蛋白1，方块表示奥马珠单抗(omalizumab)的值。图2表示在低pH值下聚集体含有率变化(％)的推移。图中，横轴表示天数(天)，纵轴表示聚集体含有率的变化(％)。图中，圆圈表示蛋白1，方块表示融合蛋白A(FusionproteinA)的值。图3表示热处理下的聚集体含有率变化(％)的推移。图中，横轴表示天数(天)，纵轴表示聚集体含有率的变化(％)。图中，圆圈表示蛋白1，方块表示融合蛋白A的值。具体实施方式下面对本专利技术的实施方式进行详细说明。本专利技术中，只要没有特别说明，各术语则具有以下含义。本专利技术中，“高亲和力IgE受体α链(FCER1A)”是指包含高亲和力IgE受体的细胞外区域即α链部分的蛋白。高亲和力I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Fc融合蛋白，其特征在于，所述蛋白含有：(i)高亲和力IgE受体α链，以及(ii)IgG1的Fc区域，并且所述(i)和(ii)之间的接头片段区域为SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.20 JP 2015-032231;2015.12.24 JP 2015-252231.一种Fc融合蛋白，其特征在于，所述蛋白含有：(i)高亲和力IgE受体α链，以及(ii)IgG1的Fc区域，并且所述(i)和(ii)之间的接头片段区域为SEQIDNO:2的氨基酸序列。2.一种Fc融合蛋白，其为...

【专利技术属性】
技术研发人员：坂本隆志，稻田洋一，横山和正，
申请(专利权)人：橘生药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP