用于疫苗及诊断开发的重组登革病毒的方法及组合物技术

本发明专利技术提供包含嵌合登革病毒E糖蛋白的组合物及使用方法，所述登革病毒E糖蛋白包含以下登革病毒E糖蛋白主链，所述主链包含引入表位的氨基酸取代，所述表位被来自以下登革病毒血清型的抗体识别，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同。

Methods and compositions for recombinant dengue viruses for vaccine and diagnostic development

The present invention provides a chimeric dengue virus E glycoprotein on composition and method of use, the dengue virus E glycoprotein contains dengue virus E glycoprotein backbone, the backbone contains introduction of amino acid epitope substitution, the epitope of antibody recognition from the dengue virus serotypes of the dengue. With the virus serotypes of dengue virus E glycoprotein backbone of dengue virus serotypes.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于疫苗及诊断开发的重组登革病毒的方法及组合物优先权声明根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求保护2014年11月2日提交的美国临时申请系列号62/074,053的权益，所述申请案的全部内容通过引用结合到本文中。政府支持声明本专利技术使用美国国立卫生研究院授予的基金号AI057157、AI097560、AI107731和AI109761下的政府支持进行。美国政府对本专利技术具有一定权利。专利
本专利技术涉及这样的登革病毒疫苗，其诱导针对来自单个来源的多于一种登革病毒血清型的中和抗体。专利技术背景登革病毒(DENV)为一种蚊媒黄病毒，其以空前的速度传播并已在50多个国家形成较大的健康及经济负担。现有的防御全部四种DENV血清型的DENV疫苗必须作为四种病毒或者四种重组蛋白的“四价”制剂递送，意图其各自提供针对所述血清型的防御。近期在泰国的大型2B期试验中，提供临床上有意义保护的最先进的四价减活嵌合病毒的失败，强调了在所述四价混合物中适当混合血清型以实现均衡的抗体应答仍为未知的(Sabchareon等，2012)。认为病毒干扰导致失败，因为一种或多种病毒血清型在竞争中胜过其他血清型。本专利技术通过提供以下嵌合登革病毒来克服本领域中的前述缺陷，所述嵌合登革病毒诱导针对来自单个来源的多于一种登革病毒血清型的中和抗体。专利技术概述在一方面，本专利技术提供包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入表位的氨基酸取代，所述表位被与以下登革病毒血清型反应的抗体识别，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型4，和所述抗体与登革病毒血清型3反应。在又一方面，本专利技术提供包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入来自以下登革病毒血清型的蛋白质结构域的氨基酸取代，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型4，和所述蛋白质结构域来自登革病毒血清型2。在另一方面，本专利技术提供包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入表位的氨基酸取代，所述表位被与以下登革病毒血清型反应的抗体识别，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型2，和所述抗体与登革病毒血清型1反应。本文亦提供在受试者(例如，有需要的受试者)中产生对登革病毒的免疫反应的方法，其包括给予所述受试者有效量的本专利技术的E糖蛋白、本专利技术的黄病毒颗粒、本专利技术的VLP、本专利技术的核酸分子、本专利技术的群体和/或本专利技术的组合物及其任何组合。本文另外提供在受试者(例如，有需要的受试者)中治疗登革病毒感染的方法，其包括给予所述受试者有效量的本专利技术的E糖蛋白、本专利技术的黄病毒颗粒、本专利技术的VLP、本专利技术的核酸分子、本专利技术的群体和/或本专利技术的组合物及其任何组合。本文进一步提供在受试者(例如，有需要的受试者)中预防与登革病毒感染相关的病症的方法，其包括给予所述受试者有效量的本专利技术的E糖蛋白、本专利技术的黄病毒颗粒、本专利技术的VLP、本专利技术的核酸分子、本专利技术的群体和/或本专利技术的组合物及其任何组合。作为另一方面，本专利技术提供保护受试者免受登革病毒感染影响的方法，其包括给予所述受试者有效量的本专利技术的E糖蛋白、本专利技术的黄病毒颗粒、本专利技术的VLP、本专利技术的核酸分子、本专利技术的群体和/或本专利技术的组合物及其任何组合。在另外的方面，本专利技术提供在来自受试者的生物样品中鉴定针对特定登革病毒血清型或其组合(例如4/3、4/2、2/1)的中和抗体的存在的方法，其包括：a)以有效诱导对E糖蛋白的抗体反应的量给予所述受试者包含本专利技术的特定E糖蛋白的组合物；b)在黄病毒颗粒的中和可被检测的条件下，使来自所述受试者的生物样品与包含上述特定E糖蛋白的黄病毒颗粒接触；和c)检测步骤(b)中的中和，从而在来自所述受试者的生物样品中鉴定针对特定登革病毒血清型或其组合的中和抗体的存在。本专利技术另外提供了在来自受试者的生物样品中鉴定针对特定的登革病毒血清型或其组合(例如4/3、4/2、2/1)的中和抗体的存在的方法，其包括：a)在黄病毒颗粒的中和可被检测的条件下，使来自已给予本专利技术的特定E糖蛋白的受试者的生物样品与包含所述E糖蛋白的黄病毒颗粒接触；和b)检测步骤(a)中的中和，从而在来自所述受试者的生物样品中鉴定针对特定登革病毒血清型或其组合的中和抗体的存在。在其它实施方案中，本专利技术提供鉴定免疫原性组合物的方法，所述免疫原性组合物在受试者中诱导针对特定登革病毒血清型或其组合(例如4/3、4/2、2/1)的中和抗体，所述方法包括：a)以有效诱导对E糖蛋白的抗体反应的量给予受试者包含本专利技术的特定E糖蛋白的免疫原性组合物；b)在黄病毒颗粒的中和可被检测的条件下，使来自所述受试者的生物样品与包含步骤(a)的E糖蛋白的黄病毒颗粒接触；c)确定所述生物样品是否包含这样的抗体，其中和包含步骤(a)的E糖蛋白的黄病毒颗粒；和d)如果所述生物样品包含这样的抗体，其中和包含(a)的E糖蛋白的黄病毒颗粒，则将所述免疫原性组合物鉴定为在所述受试者中诱导针对所述特定登革病毒血清型或其组合的中和抗体。本文进一步提供鉴定免疫原性组合物的方法，所述免疫原性组合物在受试者中诱导针对特定登革病毒血清型或其组合(例如4/3、4/2、2/1)的中和抗体，所述方法包括：a)在黄病毒颗粒的中和可被检测的条件下，使来自已给予包含本专利技术的特定E糖蛋白的免疫原性组合物的受试者的生物样品与包含所述E糖蛋白的黄病毒颗粒接触；b)确定所述生物样品是否包含这样的抗体，其中和包含步骤(a)的E糖蛋白的黄病毒颗粒；和c)如果所述生物样品包含这样的抗体，其中和包含(a)的E糖蛋白的黄病毒颗粒，则将所述免疫原性组合物鉴定为在所述受试者中诱导针对所述特定登革病毒血清型或其组合的中和抗体。本专利技术亦提供在样品中检测针对特定登革病毒血清型或其组合的抗体的方法，其包括：a)在抗原/抗体复合物可形成的条件下，使所述样品与本专利技术的特定E糖蛋白接触；和b)检测抗原/抗体复合物的形成，从而在所述样品中检测针对所述特定登革病毒血清型或其组合的抗体。本文另外提供在来自受试者的生物样品中鉴定针对特定登革病毒血清型或其组合的抗体的方法，其包括：a)以有效诱导对E糖蛋白的抗体反应的量给予所述受试者包含本专利技术的特定E糖蛋白的组合物；b)在抗原/抗体复合物可形成的条件下，使来自所述受试者的生物样品与(a)的E糖蛋白接触；和c)检测抗原/抗体复合物的形成，从而在来自所述受试者的样品中鉴定针对登革病毒血清型3和/或4的抗体。本专利技术的又一方面提供在来自受试者的生物样品中鉴定针对特定登革病毒血清型或其组合的抗体的方法，其包括：a)在抗原/抗体复合物可形成的条件下，使来自已给予包含本专利技术的特定E糖蛋白的免疫原性组合物的受试者的生物样品与所述E糖蛋白接触；和c)检测抗原/抗体复合物的形成，从而在来自所述受试者的生物样品中鉴定针对登革病毒血清型3和/或4的抗体。本专利技术另外提供鉴定免疫原性组合物的方法，所述免疫原性组合物在受试者中诱导针对特定登革病毒血清型或其组合的抗体，所述方法包括：a)在抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入表位的氨基酸取代，所述表位被与以下登革病毒血清型反应的抗体识别，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型4，和所述抗体与登革病毒血清型3反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.02 US 62/0740531.一种包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入表位的氨基酸取代，所述表位被与以下登革病毒血清型反应的抗体识别，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型4，和所述抗体与登革病毒血清型3反应。2.权利要求1的嵌合登革病毒E糖蛋白，其中所述抗体为单克隆抗体5J7。3.权利要求1的嵌合登革病毒E糖蛋白，其包含氨基酸序列：MRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELTKTTAKEVALLRTYCIEASISNITTATRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCSGKITGNLVQIENLEYTVVVTVHNGDTHAVGNDTSNHGVTATITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILMKMKKKTWLVHKQWFLDLPLPWTAGADTSEVHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVTVLGSQEGAMHSALAGATEVDSGDGNHMFAGHLKCKVRMEKLRIKGMSYTMCSGKFSIDKEMAETQHGTTVVKVKYEGAGAPCKVPIEIRDVNKEKVVGRVISSTPLAENTNSVTNIELEPPFGDSYIVIGVGNSALTLHWFRKGSSIGKMFESTYRGAKRMAILGETAWDFGSVGGLFTSLGKAVHQVFGSVYTTMFGGVSWMIRILIGFLVLWIGTNSRNTSMAMTCIAVGGITLFLGFTVQA(WT_DENV4，SEQIDNO:1)，其中所述氨基酸序列包含下列氨基酸取代：T49E、K51T、E52Q、V53L、L55T、T58K、Y59L、S122L、G123E、K124P、T126E、N128K、L129V、I132Y、M199L、K200T、T205A、L207M、K210R、L214F、A222S、V270I、D271Q、S272N、G273S、D274G、N276T、H277S和M278I，且其中所述氨基酸序列进一步包含任意组合的一个或多个下列氨基酸取代：A71D、T148Q、D225T、V229P、D307K、K321Q和V362P。4.权利要求1的嵌合登革病毒E糖蛋白，其包含氨基酸序列：MRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELTKTEATQLATLRKLCIEASISNITTATRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCLEPIEGKVVQYENLEYTVVVTVHNGDTHAVGNDTSNHGVTATITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILLTMKKKAWMVHRQWFFDLPLPWTSGADTSEVHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVTVLGSQEGAMHSALAGATEIQNSGGTSIFAGHLKCKVRMEKLRIKGMSYTMCSGKFSIDKEMAETQHGTTVVKVKYEGAGAPCKVPIEIRDVNKEKVVGRVISSTPLAENTNSVTNIELEPPFGDSYIVIGVGNSALTLHWFRKGSSIGKMFESTYRGAKRMAILGETAWDFGSVGGLFTSLGKAVHQVFGSVYTTMFGGVSWMIRILIGFLVLWIGTNSRNTSMAMTCIAVGGITLFLGFTVQA(DENV4_M14，SEQIDNO:3)。5.权利要求1的嵌合登革病毒E糖蛋白，其包含氨基酸序列：MRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELTKTEATQLATLRKLCIEASISNITTDTRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCLEPIEGKVVQYENLEYTVVVTVHNGDQHAVGNDTSNHGVTATITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILLTMKKKAWMVHRQWFFDLPLPWTSGATTSEPHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVTVLGSQEGAMHSALAGATEIQNSGGTSIFAGHLKCKVRMEKLRIKGMSYTMCSGKFSIKKEMAETQHGTTVVKVKYEGAGAPCKVPIEIRDVNKEKVVGRVISSTPLAENTNSPTNIELEPPFGDSYIVIGVGNSALTLHWFRKGSSIGKMFESTYRGAKRMAILGETAWDFGSVGGLFTSLGKAVHQVFGSVYTTMFGGVSWMIRILIGFLVLWIGTNSRNTSMAMTCIAVGGITLFLGFTVQA(DENV4_M16，SEQIDNO:4)。6.一种包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入来自以下登革病毒血清型的蛋白质结构域的氨基酸取代，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型4，和所述蛋白质结构域来自登革病毒血清型2。7.权利要求6的嵌合登革病毒E糖蛋白，其中所述蛋白质结构域为E糖蛋白结构域III。8.权利要求6的嵌合登革病毒E糖蛋白，其包含氨基酸序列：MRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELTKTTAKEVALLRTYCIEASISNITTATRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCSGKITGNLVQIENLEYTVVVTVHNGDTHAVGNDTSNHGVTATITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILMKMKKKTWLVHKQWFLDLPLPWTAGADTSEVHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVTVLGSQEGAMHSALAGATEVDSGDGNHMFAGHLKCKVRMEKLRIKGMSYTMCSGKFSIDKEMAETQHGTTVVKVKYEGAGAPCKVPIEIRDVNKEKVVGRVISSTPLAENTNSVTNIELEPPFGDSYIVIGVGNSALTLHWFRKGSSIGKMFESTYRGAKRMAILGETAWDFGSVGGLFTSLGKAVHQVFGSVYTTMFGGVSWMIRILIGFLVLWIGTNSRNTSMAMTCIAVGGITLFLGFTVQA(WT_DENV4，SEQIDNO:1)，其中所述氨基酸序列包含下列氨基酸取代：T300S、S303T、S307K、D309V、M312I、T320I、V322I、K323R、K325Q、A329D、A331S、V335I、I337F、R340T、V342L、N343E、E345R、K346H、V348L、V351L、S353T、S354V、T355N、L357I、A358V、E359T、N360E、T361K、N362D、V364P、T365V、L369A、V379I、G383E、N384P、S385G、A386Q、T388K、H390N、R393K。9.权利要求6的嵌合登革病毒E糖蛋白，其包含氨基酸序列：MRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELTKTTAKEVALLRTYCIEASISNITTATRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCSGKITGNLVQIENLEYTVVVTVHNGDTHAVGNDTSNHGVTATITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILMKMKKKTWLVHKQWFLDLPLPWTAGADTSEVHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVTVLGSQEGAMHSALAGATEVDSGDGNHMFAGHLKCKVRMEKLRLKGMSYSMCTGKFKIVKEIAETQHGTIVIRVQYEGDGSPCKIPFEITDLEKRHVLGRLITVNPIVTEKDSPVNIEAEPPFGDSYIIIGVEPGQLKLNWFKKGSSIGKMFESTYRGAKRMAILGETAWDFGSVGGLFTSLGKAVHQVFGSVYTTMFGGVSWMIRILIGFLVLWIGTNSRNTSMAMTCIAVGGITLFLGFTVQA(DV4-EDIII-DV2，SEQIDNO:5)。10.一种包含以下登革病毒E糖蛋白主链的嵌合登革病毒E糖蛋白，所述主链包含引入表位的氨基酸取代，所述表位被与以下登革病毒血清型反应的抗体识别，所述登革病毒血清型与所述登革病毒E糖蛋白主链的登革病毒血清型不同，其中所述登革病毒E糖蛋白主链来自登革病毒血清型2，和所述抗体与登革病毒血清型1反应。11.权利要求10的嵌合登革病毒E糖蛋白，其中所述抗体为单克隆抗体1F4。12.权利要求10的嵌合登革病毒E糖蛋白，其包含氨基酸序列：MRCIGISNRDFVEGVSGGSWVDIVLEHGSCVTTMAKNKPTLDFELFKTEVTNPAVLRKYCIEAKLTNTTTESRCPTQGEPSLNEEQDKRFICKHSMVDRGWGNGCGLFGKGGIVTCAMFTCKKNMEGKVVQPENLKYSVIVTVHSGEEHAVGNDTTEHGTTATITPQAPTSEIQLTDYGALTLECSPRTGLDFNEMVLLQMEDKAWLVHRQWFLDLPLPWLPGADTQESNWIQKETLVTFKNPHAKKQDVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQTSGTTTLFTGHLKCRLRMDKLQLKGMSYSMCTGKFKIVKEIAETQHGTIVIRVQYEGDGSPCKIPFEITDLEKRHVLGRLITVNPIVTEKDSPVNIEAEPPFGDSYIIIGVEPGQLKLNWFKKGSSIGQMFETTMRGAKRMAILGDTAWDFGSLGGVFTSIGKALHQVFGAIYGAAFSGVSWTMKILIGVIITWIGMNSRSTSLSVSLVLVGVVTLYLGAVVQA(DENV2-1F4E，SEQIDNO:6)。13.一种黄病毒颗粒或病毒样颗粒(VLP)，其包含权利要求1-12中任一项的E糖蛋白。14.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-12中任一项的E糖蛋白。15.一种分离的核酸分子，其编码权利要求13的黄病毒颗粒或VLP。16.一种黄病毒颗粒的群体，其包含权利要求13的黄病毒颗粒。17.一种组合物，其在药学上可接受的载体中包含权利要求1-12中任一项的E糖蛋白。18.一种组合物，其在药学上可接受的载体中包含权利要求14或15的核酸分子。19.一种组合物，其在药学上可接受的载体中包含权利要求16的群体。20.一种组合物，其在药学上可接受的载体中包含权利要求13的黄病毒颗粒和/或VLP。21.一种在受试者中产生对登革病毒的免疫反应的方法，其包括给予所述受试者有效量的权利要求1-12中任一项的E糖蛋白、权利要求13的黄病毒颗粒、权利要求13的VLP、权利要求14-15中任一项的核酸分子、权利要求16的群体和/或权利要求17-20中任一项的组合物及其任何组合。22.一种在受试者中治疗登革病毒感染的方法，其包括给予所述受试者有效量的权利要求1-12中任一项的E糖蛋白、权利要求13的黄病毒颗粒、权利要求13的VLP、权利要求14-15中任一项的核酸分子、权利要求16的群体和/或权利要求17-20中任一项的组合物及其任何组合。23.一种在受试者中预防与登革病毒感染相关的病症的方法，其包括给予所述受试者有效量的权利要求1-12中任一项的E糖蛋白、权利要求13的黄病毒颗粒、权利要求13的VLP、权利要求14-15中任一项的核酸分子、权利要求16的群体和/或权利要求17-20中任一项的组合物及其任何组合。24.一种保护受试者免受登革病毒感染影响的方法，其包括给予所述受试者有效量的权利要求1-12中任一项的E糖蛋白、权利要求13的黄病毒颗粒、权利要求13的VLP、权利要求14-15中任一项的核酸分子、权利要求16的群体和/或权利要求17-20中任一项的组合物及其任何组合。25.一种在来自受试者的生物样品中鉴定针对登革病毒血清型3和/或4的中和抗体的存在的方法，其包括：a)以有效诱导对所述E糖蛋白的抗体反应的量给予所述受试者包含权利要求1-5中任一项的E糖蛋白的组合物；b)在所述黄病毒颗粒的中和可被检测的条件下，使来自所述受试者的生物样品与包含上述步骤(a)的E糖蛋白的黄病毒颗粒接触；和...

【专利技术属性】
技术研发人员：R巴里奇，D维曼，B杨特，E加利乔特，S罗亚尔，A德西尔瓦，J斯万斯特伦，
申请(专利权)人：北卡罗来纳查佩尔山大学，
类型：发明
国别省市：美国,US